全 文 ：连翘根醇提物对食管癌移植瘤生长的体内抑制作用
孙士萍1，李　磊1，戴素丽1，赵连梅1，李　燕2，单保恩1
Inhibitory effect of ethanol extract of Forsythia suspensa root on growth
of esophageal cancer xenograft in vivo
SUN Shi-ping1, LI Lei1, DAI Su-li1, ZHAO Lian-mei1, LI Yan2, SHAN Bao-en1
[ 摘要 ]　
目的：探讨连翘（Forsythia suspensa）根醇提物对食管癌细胞在裸鼠体内生
长的抑制作用。
方法：应用MTT法检测连翘根醇提物对食管癌 TE-1、TE-13、Yes-2和
Eca-109细胞增殖的抑制作用。构建食管癌 TE-13细胞的裸鼠移植瘤模型，
分为 2组：治疗组每只裸鼠腹腔注射 50 mg/kg连翘根醇提物，对照组注射
相同体积的 0.9%氯化钠溶液。用药后，观察 2组裸鼠成瘤情况，并测量肿
瘤体积和质量；TUNEL染色法分析裸鼠肿瘤组织的细胞凋亡情况；免疫
组织化学法检测肿瘤组织中 Bcl-2和 Bax蛋白的表达变化；苏木精 -伊红染
色法分析裸鼠肺和肝组织的形态学变化。
结果：连翘根醇提物对几种食管癌细胞均具有明显的生长抑制作用（P＜0.01），
且对 TE-13细胞的抑制作用呈时间和剂量依赖性（P ＜ 0.01）。连翘根醇提
物治疗组的肿瘤平均体积和质量均明显低于对照组（P ＜ 0.05）。连翘根醇
提物治疗组裸鼠肿瘤组织内凋亡细胞的数量较对照组明显增加（P ＜ 0.05）。
与对照组相比，治疗组裸鼠肿瘤组织中 Bcl-2 蛋白的表达水平明显降低
（P ＜ 0.05），Bax蛋白表达水平则明显升高（P ＜ 0.05）。连翘根醇提物治
疗组和对照组裸鼠的肝和肺均无明显的组织形态学改变。
结论：连翘根醇提物对裸鼠体内食管癌移植瘤的生长具有抑制作用，该作
用可能与诱导食管癌细胞凋亡有关。
[ 关键词 ]　食管肿瘤；连翘；异种移植模型抗肿瘤试验；细胞凋亡；小鼠，
裸；连翘根醇提物
[ABSTRACT]　
Objective: To investigate the inhibitory effect of ethanol extract of
Forsythia suspensa root (FSEER) on growth of esophageal cancer cells
in nude mice.
Methods: The inhibitory effect of FSEER on growth of esophageal
cancer cell lines including TE-1, TE-13, Yes-2 and Eca-109 was
　
DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2015.11.610
[ 作者单位 ]
1. 河北医科大学第四医院科研中心/肿瘤研究
所，河北 石家庄　050011；2. 河北医科大学第
四医院肿瘤防治办公室，河北 石家庄　050011
[ 中图分类号 ]　R735.1　[ 文献标志码 ] A
[ 文章编号 ]　1000-7431 (2015) 01-0001-07
[ 基金项目 ]
河北省中医药管理局科研计划项目（编号：
2011011）
AUTHORS FROM
1. Research Center, Fourth Hospital of Hebei
Medical University, Shijiazhuang 050011, Hebei
Province, China; 2. Cancer Prevention Research
Center, Fourth Hospital of Hebei Medical
University, Shijiazhuang 050011, Hebei Province,
China
Correspondence to: SHAN Bao-en（单保恩）
E-mail: shanbaoen@163.com
GRANT
Scientific Research Plan of Hebei Provincial
Administration Bureau of Traditional Chinese
Medicine (No. 2011011)
TUMOR, 2015, 35 (01):1-7
FINANCIAL DISCLOSURE: The authors have
indicated they have no financial relationships
relevant to this article to disclose.
Received 2014-09-16　Accepted 2014-11-11
Copyright© 2015 by TUMOR　All rights resvered
TUMOR Vol. 35, January 2015　肿瘤　　www.tumorsci.org 1
基础研究·Basic Research
measured by MTT method. The xenograft tumor models of TE-13 cells in nude mice were
established and divided into two groups: treatment group [treated with FSEER (50 mg/kg)]
and the control group (treated with equal volume of normal saline). Then the growth of
xenograft tumors in nude mice was observed and their sizes and weights were measured.
The apoptosis of tumor tissues in nude mice was deteced by TUNEL staining analysis. The
expressions of Bcl-2 and Bax in tumor tissues were detected by immunohistochemical
method. Morphological changes of lung and liver tissues in nude mice were observed by
hematoxylin-eosin staining.
Results: FSEER had obvious inhibitory effect on the growth of esophageal cancer cells in vitro (P <
0.01). Moreover, the growth of TE-13 cells was inhibited by FSEER in the dose- and time-
dependent manner (P < 0.01). The average volume and weight of tumor tissues in nude mice
of FSEER treatment group were significantly smaller and lower, respectively, as compared
with those of the control group (P < 0.05). Comparing to the control group, the number of
apoptotic cells in FSEER treatment group was significantly increased (P < 0.05), while the
expression level of Bcl-2 was decreased (P < 0.05), but Bax expression level was increased
(P < 0.05). No obvious morphological changes were found in liver and lung tissues in FSEER
treatment group and the control group.
Conclusion: FSEER has inhibitory effect on the growth of xenograft tumor of esophageal
cancer cells in nude mice, which may be related to inducing apoptosis.
[KEY WORDS]　Esophageal neoplasms; Forsythia suspensa ; Xenograft model antitumor
assays; Apoptosis; Mice, nude; Ethanol extract of Forsythia suspensa root
食管癌是在全球范围内发病率排名第 8位和
死亡率排名第 6位的常见癌症，每年新发病例约
50万人 [1]。在高风险的中国北部地区，食管癌的
发病率已经超过 100/10万人；除此之外，食管癌
因为预后较差，5年生存率不到 15%，已经成为
亚洲人群的一个重大社会问题 [2]。有研究表明，
西方国家食管癌的发病率与日俱增 [3]，是发病率
增长最快的癌症之一 [4]。因此，开发新型的抗食
管癌药物是目前研究的热点之一。
近年来，植物制剂及其衍生物的应用在癌症
治疗中越来越引起人们的关注 [5, 6]。连翘（Forsythia
suspensa）是在中国广为熟知的一种传统中草药，
现已用于抗炎、利尿、解毒和癌症的治疗 [7]。此
外，大量研究表明，连翘果实提取物可诱导癌细
胞凋亡 [8]，并能增加癌细胞对化学治疗的敏感性 [9]。
本课题组前期研究结果显示，连翘根、叶和
果实的水提物和醇提物在体外均能对食管癌细胞
的生长具有明显的抑制作用，且以连翘根醇提物
的抑瘤效果最为明显 [10]；研究还发现，连翘根醇
提物可诱导食管癌细胞发生凋亡 [12]；进一步研究
发现，连翘根醇提物能降低 Bcl-2蛋白的表达水
平，提高 Bax蛋白的表达水平，从而发挥促细胞
凋亡的作用 [10-12]。
为进一步研究连翘在体内对食管癌细胞的增
殖和凋亡是否具有相同的作用效果，本研究选择
连翘根醇提物进行体内抑瘤实验。本研究首先构
建裸鼠食管癌移植瘤模型，并用连翘根醇提物治
疗该裸鼠模型，然后监测食管癌细胞在体内的成
瘤、生长以及凋亡情况，并在瘤组织中检测 Bcl-2
和 Bax蛋白的表达水平，以期为应用连翘根醇提
物治疗食管癌提供更多的实验依据。
1　材料与方法
1.1　实验材料　
RPMI 1640 培养液和 0.25% 胰蛋白酶购自
孙士萍，等 . 连翘根醇提物对食管癌移植瘤生长的体内抑制作用2
美国 Gibco公司。胎牛血清购自杭州四季青生
物工程材料有限公司。青霉素和链霉素购自上
海博光生物科技有限公司。MTT和 DMSO购
自美国 Sigma 公司。TUNEL 染色试剂盒（包
含辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素）购自美
国 Promega公司。免疫组织化学 SP法检测试剂
盒（包含生物素标记的山羊抗兔二抗及辣根过氧
化物酶标记的链酶卵白素三抗）和二氨基联苯胺
（diaminobenzidine，DAB）试剂盒均购自北京中
杉金桥生物技术有限公司。高 pH值抗原修复液
购自基因科技（上海）有限公司。兔抗人 Bax和
Bcl-2多克隆抗体购自美国 Santa Cruz公司。
1.2　细胞培养　
食管癌细胞株 TE-1、TE-13 和 Eca-109 由
中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细
胞生物学研究所提供，Yes-2细胞由日本 Tagawa
Masatoshi教授惠赠。所有细胞均用含 10%胎牛
血清、100 U/mL青霉素和 100 μg/mL链霉素的
RPMI 1640培养液，置于 37 ℃、CO2体积分数
为 5%的条件下培养。每 1～ 2 d换液 1次，细
胞生长至融合度为（70 ～ 80）% 时，用 0.25%
胰蛋白酶消化并传代。取对数生长期的细胞用于
后续实验。
1.3　连翘根醇提物的制备　
中草药连翘购自河北省邯郸市武安县乐仁堂
药房，经邯郸市药品监督管理局鉴定为正品。将
一定量的连翘根粉碎，称取 2 kg并加入 10 L的
95%乙醇溶液里，室温下浸泡过夜；然后置于水
浴中加热回流提取 2次，每次 1 h，合并上清液，
以 447×g 的速度离心 20 min，取上清液，用旋
转冷冻蒸发器蒸发干燥，所得干粉即为连翘根醇
提物。然后将该提取物用乙醇溶液复溶至质量浓
度为 10 mg/mL，保存于－ 20 ℃冰箱。实验时，
用不含胎牛血清的 RPMI 1640培养液将上述提取
物稀释至所用浓度。
1.4　实验动物　
BALB/c裸鼠购自北京维通利华实验动物技
术有限公司，共 10只，均为雄性，5～ 6周龄，
平均体质量为 22.4 g。所有裸鼠均在河北医科大
学第四医院动物实验中心无特定病原体级屏障系
统条件下饲养 [动物使用许可证号：SYXK（冀）
2013-0051]。本研究设计已经河北医科大学第四
医院动物管理使用委员会和伦理委员会批准。
1.5　实验方法
1.5.1　MTT法检测食管癌细胞的活力
将各种食管癌细胞按 1×104个 /孔的密度接
种于 96孔板，培养 24 h后，分别用 0.1、0.2、0.4、
0.6、0.8、1.0 和 2.0 mg/mL 连翘根醇提物处理
48 h，然后检测不同食管癌细胞对连翘根醇提物
的敏感性。同时，用 0.25、0.5和 1.0 mg/mL连
翘根醇提物分别作用 TE-13细胞 24、48和 72 h，
然后检测连翘根醇提物对食管癌细胞生长的抑制
作用。简要步骤如下：每孔细胞中分别加 10 mg/
mL MTT 10 μL，并于 37 ℃反应 3 h，然后移除
上清液，加入 150 μL DMSO，并于室温条件下
轻轻振荡 15～ 20 min，最后用全自动定量酶标
仪在波长 492 nm处测定吸光度（D）值。连翘根
醇提物对食管癌细胞活力的影响以细胞增殖抑制
率表示，抑制率（%）＝（对照组D 值－实验组
D 值）/对照组D 值×100%。实验重复 3次。
1.5.2　裸鼠移植性肿瘤模型的建立及用药治疗
于 BALB/c裸鼠右侧腋窝处皮下注射 0.1 mL
TE-13细胞（含 2×106个细胞），当肿瘤体积增
长到约0.1 cm3时（约需7 d），将裸鼠随机分为2组，
每组 5只。预实验曾设立 12、25、50、75和 100
mg/kg这 5个质量浓度的连翘根醇提物治疗组以
及未经药物处理的阴性对照组，结果表明 50 mg/
kg连翘根醇提物的抑瘤作用最好。因此，后续治
疗组中每只裸鼠均于腹腔注射 50 mg/kg连翘根
醇提物，对照组裸鼠则注射相同体积的 0.9%氯
化钠溶液。从接种的第 7天开始，每 2 d注射药
物 1次，共 8次 15 d；每 3 d测量 1次肿瘤长短
径，按公式计算肿瘤体积：肿瘤体积＝ 1/2×长
径×短径 2。最后一次注射药物后第 2天，即接
种后第 22天时以颈椎脱位法处死裸鼠，切取移
植瘤组织标本，称取瘤体质量并拍照，按公式计
算肿瘤生长抑制率：抑制率（%）＝（对照组平
孙士萍，等 . 连翘根醇提物对食管癌移植瘤生长的体内抑制作用 3
均瘤体质量－治疗组平均瘤体质量）/对照组平
均瘤体质量×100%。
1.5.3　TUNEL染色法检测细胞凋亡
裸鼠移植瘤标本用中性甲醛溶液固定 24 h，
然后经脱水和浸蜡后，行包埋及切片，再置于烤
箱中 65 ℃ 30 min以常规脱蜡，最终制成 5 μm
厚的病理切片。收集各组病理切片，经二甲苯脱
蜡和蛋白酶消化后，PBS冲洗；加入 TUNEL反
应液 37 ℃反应 60 min，PBS冲洗；然后加入辣
根过氧化物酶标记的链霉亲和素（稀释比例为
1∶ 500），37 ℃反应 30 min，PBS冲洗；再滴加
DAB，室温反应 10～ 30 min，PBS冲洗；最后封
固并烘干，光学显微镜下观察细胞染色情况 [以细
胞核和（或）细胞碎片呈棕黄色记为凋亡细胞 ]，
每张切片随机选取 10个视野（×400），计数凋亡
细胞。凋亡指数（apoptosis index，AI）＝视野内
凋亡细胞个数 /视野内所有细胞个数。
1.5.4　免疫组织化学法检测 Bcl-2和 Bax蛋白表达
将用药治疗后的裸鼠移植瘤按 1.5.3节方法
制成石蜡切片，然后按 SP免疫组织化学试剂盒
说明书所述方法检测 Bax和 Bcl-2蛋白的表达情
况。Bax 和 Bcl-2 抗体均按 1 ∶ 100 比例稀释，
生物素标记的山羊抗兔二抗和辣根过氧化物酶标
记的链酶卵白素三抗均为试剂盒中的原液。DAB
试剂显色后，用苏木精对比染色，中性树胶封固。
在光学显微镜下观察阳性细胞为细胞质着色，呈
棕黄色颗粒状分布。选取 5个高倍视野，每个视
野计数 500个细胞，以阳性细胞所占百分率进行
评分：≤ 10%为 0分，＞ 10%且≤ 50%为 1分，
＞ 50%且≤ 75%为 2分，＞ 75%为 3分；再按
染色强度进行评分：无色为 0分，淡黄色为 1分，
棕黄色为 2分，棕褐色为 3分。上述 2项评分相加：
0分为“－”，1～ 2分为“＋”，3～ 4分为“＋＋”，
5～ 6分为“＋＋＋”。将 “－”和“＋”定义
为阴性表达，“＋＋”和“＋＋＋”定义为阳性表达。
1.5.5　苏木精 -伊红（hematoxylin-eosin，HE）染
色法检测肝和肺组织的细胞形态变化
取 2组用药治疗后荷瘤裸鼠中的肝和肺组织，
按 1.5.3节方法制成石蜡切片。然后行常规脱蜡
水化，苏木精染色 5 min，75%盐酸乙醇溶液分
化 30 s，酸化伊红对比染色细胞核 1 min。最后
常规脱水、透明和中性树胶封固，置于光学显微
镜下观察细胞形态的变化。
1.6　统计学方法　
应用 SPSS 13.0统计学软件对实验结果进行
统计学分析。计量资料以 ± s表示；两组间比较
采用两独立样本 t 检验；多组间比较采用单因素
方差分析（析因设计资料则采用两因素方差分析），
组内两两比较采用 SNK-q 检验；计数资料采用 χ 2
检验（n ＜ 40时则采用四格表资料的 Fisher精确
概率法）。以P ＜ 0.05为差异有统计学意义。
2　结　果
2.1　连翘根醇提物对食管癌细胞增殖的抑制作用
MTT法检测结果显示，不同质量浓度的连
翘根醇提物处理 48 h后对各种食管癌细胞的生长
均有抑制作用，其中 2 mg/mL连翘根醇提物对食
管癌细胞 TE-13、Eca-109、TE-1和 Yes-2的抑
制率分别为 64.8%、51.6%、49.2%和 30.7%（图
1A）；而且统计分析结果表明，连翘根醇提物对
TE-13细胞的抑制率显著高于对 Eca-109、TE-1
和 Yes-2细胞的抑制率（q ＝ 7.18，P ＜ 0.01；q ＝
8.23，P ＜ 0.01；q ＝ 18.14，P ＜ 0.01），因此后
续选取 TE-13细胞做进一步研究。
MTT 法进一步检测发现，0.25、0.5 和 1.0
mg/mL连翘根醇提物处理 TE-13细胞 24、48和
72 h后，药物的质量浓度和作用时间不存在交
互作用（F ＝ 2.18，P ＞ 0.05）；而连翘根醇提物
对 TE-13细胞的抑制作用与药物质量浓度（F ＝
129.04，P＜ 0.01）和作用时间（F＝ 283.29，P＜ 0.01）
均有关，其中 0.25 mg/mL 连翘根醇提物处理
TE-13细胞 72 h的抑制率显著高于 24和 48 h的
抑制率（q ＝ 14.76，P ＜ 0.01；q ＝ 8.82，P ＜
0.01），而 1.0 mg/mL连翘根醇提物处理 TE-13
细胞 24 h的抑制率显著高于 0.25和 0.5 mg/mL
组（q ＝ 12.74，P ＜ 0.01；q ＝ 7.24，P ＜ 0.01）
（图 1B）。以上结果表明，连翘根醇提物在体外可
抑制食管癌 TE-13细胞的增殖，且具有时间和浓
度依赖性。
孙士萍，等 . 连翘根醇提物对食管癌移植瘤生长的体内抑制作用4
Fig. 2　The growth of xenograft tumors in nude mice implanted with esophageal cancer TE-13 cells after
treatment with ethanol extract of Forsythia suspensa root (FSEER). The tumor-bearing nude mice treated
with 0.9% NaCl instead of FSEER were used as the control. A: The average volumes of xenograft tumors
were measured and calculated on the 1st-22nd days after implantation of TE-13 cells (on the 7th day, 50
mg/mL FSEER was used to treat the tumor-bearing mice for 15 d). B: The weights of xenograft tumors were
weighed and compared on the 2nd day after the last time of FSEER treatment. C: The photo of dissected
tumors was taken after FSEER treatment for 15 d. **P<0.01, vs the control (n = 5).
图 2　连翘根醇提物治疗后裸鼠体内食管癌细胞移植瘤的生长情况
2.2　连翘根醇提物对裸鼠体内移植瘤形成的抑制
作用
与注射 0.9%氯化钠溶液的对照组相比，连
翘根醇提物能够明显抑制肿瘤细胞在裸鼠体内的
生长。肿瘤细胞接种 7 d后，对照组裸鼠的肿瘤
体积开始增长，生长速度较快；而 50 mg/kg连翘
根醇提物治疗 10 d后，裸鼠肿瘤体积才开始增长，
并且增长缓慢（图 2A）。用药结束后，治疗组裸
鼠的肿瘤平均体积和质量均明显低于对照组，差
异有统计学意义（t ＝ 19.70，P ＜ 0.001；t ＝ 8.18，
P ＜ 0.001）（图 2B和 C）。与对照组相比，连翘
根醇提物的肿瘤抑制率为 78.9%。以上结果表明，
连翘根醇提物能够明显抑制 TE-13细胞在裸鼠体
内的生长。
Fig. 1　Inhibitory effect of ethanol extract of Forsythia suspensa root (FSEER) on growth of esophageal cancer
cells in vitro was detected by MTT method. The cells treated with 0.9% NaCl instead of FSEER were used as
the control. A: The different concentrations of FSEER inhibited the proliferation of various esophageal cancer
cells including TE-13, TE-1, Eca-109 and Yes-2 (**P<0.01, vs TE-1, Eca-109 and Yes-2 cells). B: The different
concentrations of FSEER inhibited the proliferation of TE-13 cells in the dose- and time-dependent manner
(**P<0.01, vs 0.25 mg/mL for 24 h and 48 h; △△P<0.01, vs 0.25 and 0.5 mg/mL for 24 h; n = 3).
图 1　MTT法检测连翘根醇提物对食管癌细胞体外生长的抑制作用
B
0.25
Ce
ll
pr
ol
ife
ra
tio
n
in
hi
bi
to
ry
ra
te
/%
100
48 h
72 h
24 h
FSEER ρ/(mg · mL-1)
80
60
40
20
0
0.50 1.00
A
Ce
ll
pr
ol
ife
ra
tio
n
in
hi
bi
to
ry
ra
te
/%
FSEER ρ/(mg · mL-1)
80
2.0
TE-1
Eca-109
TE-13
Yes-260
40
20
1.00.80.60.40.20.10.0
0
孙士萍，等 . 连翘根醇提物对食管癌移植瘤生长的体内抑制作用
Tu
m
or
m
/g
Control
0.8
0.4
0.0
0.6
0.2
FSEER
BA
Tu
m
or
V
/m
m
3
t/d
22
FSEER
Control
3 000
1916131071
2 500
2 000
1 500
1 000
500
0
FSEER
Control
C
5
2.3　连翘根醇提物促进裸鼠体内肿瘤细胞的凋亡
TUNEL 染色结果（图 3）显示，对照组裸
鼠肿瘤组织内细胞凋亡指数为 0.08±0.01，明
显低于连翘根醇提物治疗组裸鼠肿瘤组织的细
胞凋亡指数（0.21±0.03），差异有统计学意义
（P ＜ 0.05）。结果表明，连翘根醇提物能够促进
体内肿瘤细胞的凋亡。
2.4　连翘根醇提物可调控裸鼠体内 Bcl-2和 Bax
蛋白的表达
免疫组织化学染色法检测结果（图 3）显示，
Bcl-2蛋白在连翘根醇提物治疗组中阳性表达率
为 40%（2/5），明显低于对照组的 80%（4/5），
差异有统计学意义（P ＜ 0.05）；而 Bax蛋白在连
翘根醇提物治疗组中的阳性表达率为 80%（4/5），
明显高于对照组的 40%（2/5），差异也有统计学
意义（P ＜ 0.05）。
2.5　连翘根醇提物对小鼠肝和肺组织形态的影响
HE染色结果（图 3）显示，连翘根醇提物
治疗组裸鼠肝组织内可见肝细胞大小均一，排列
紧密整齐，无明显的极性变化；肺组织结构清晰，
染色均一。结果提示，与对照组相比，连翘根醇
提物治疗组裸鼠的肝和肺中均未见明显的组织病
理学改变，表明连翘根醇提物可能对裸鼠没有潜
在的毒性。
Fig. 3　Tumor-bearing nude mice were treated with ethanol extract of Forsythia suspensa root (FSEER) for
15 d. The apoptosis of tumor cells was detected by TUNEL staining (DAB, ×400), the expressions of Bcl-2
and Bax in xenograft tumors were detected by immunohistochemistry (DAB, ×400), and the morphological
changes of liver and lung tissues were detected by hematoxylin-eosin (HE) staining (×400). Control group:
The nude mice were treated with equal volume of normal saline; FSEER group: The nude mice were treated
with 50 mg/kg FSEER. Comparing to the control group, the number of apoptotic cells was increased, the
expression of Bcl-2 was down-regulated, while the expression of Bax was up-regulated, but no obvious
morphological changes were found in liver and lung tissues in FSEER treatment group.
图 3　TUNEL染色、免疫组织化学法和 HE染色法分别检测连翘根醇提物治疗后裸鼠体内移植瘤的细胞
凋亡、Bcl-2和 Bax蛋白表达以及肝、肺组织形态学变化
3　讨　论
连翘是中国传统中草药，主要功效为消肿散
结、疏散风热和清热解毒，用于治疗痈肿疮毒、
外感风热和热淋涩痛等症；近年来，发现其能够
调节机体免疫机制，同时也是治疗癌症的主要中
药之一 [7, 13]。虽然连翘的叶、根和果实具有不同
的药理学作用，但对其各部分抗癌作用的研究尚
未见报道。在前期研究的基础上，本研究探索了
连翘根醇提物对裸鼠体内食管癌细胞移植瘤的抑
制作用和初步机制。
本研究结果表明，连翘根醇提物可明显抑制
食管癌细胞的体外增殖。与对照组相比，用 0.25
mg/mL的连翘根醇提物处理 TE-13细胞 24、48
孙士萍，等 . 连翘根醇提物对食管癌移植瘤生长的体内抑制作用6
和72 h后，细胞生长抑制率分别为（27.8±1.90）%、
（38.2±1.75）% 和（55.4±2.14）%，与以往研
究结果相符，证明连翘根醇提物对 TE-13细胞的
抑制呈时间依赖性。进一步研究连翘根醇提物在
体内对 TE-13细胞增殖和凋亡的影响，发现连翘
根醇提物（50 mg/kg）可明显抑制食管癌细胞在
裸鼠体内成瘤，并促进肿瘤细胞凋亡。Bcl-2和
Bax均为 Bcl-2家族成员，Bcl-2蛋白家族可通过
复杂的机制调控细胞凋亡，按其功能可分为两大
类：（1）促凋亡的 Bcl-2 蛋白，如 Bid、Bax 和
Bak蛋白等；（2）抗凋亡蛋白，如 Bcl-2、Bcl-xL
和Mcl-1蛋白等 [14, 15]。本课题组以往的体外研究
结果也证明，连翘根醇提物可降低食管癌细胞中
Bcl-2、Bcl-xL和 Mcl-1蛋白的表达水平，提高
Bax蛋白的表达水平，从而发挥在体外的抗肿瘤
作用 [10, 12]。本研究结果表明，连翘根醇提物在体
内降低食管癌组织中 Bcl-2蛋白的表达水平，升
高 Bax蛋白的表达水平，与体外实验结果相符，
证明降低 Bcl-2蛋白的表达水平且升高 Bax蛋白
的表达水平可能是连翘根醇提物发挥促食管癌细
胞凋亡作用的重要机制之一。
迄今为止，恶性肿瘤的治疗多采用以手术切
除为主、放化疗为辅的传统方法。手术可以遏制
肿瘤的继续发展，但容易引起并发症，如出血、
术后感染和切口黏连等，且术后的复发率也较高；
放疗和化疗在杀死癌细胞的同时也不可避免地损
伤了正常细胞，不良反应往往很大，而中药抗肿
瘤的优势之一就是其不良反应较小。本研究结果
显示，与对照组相比，连翘根醇提物（50 mg/kg）
治疗组小鼠的肝和肺组织均未发现明显的病理学
改变，证明连翘根醇提物有成为一种较安全的抗
癌药物的潜力。已有研究结果显示，连翘提取物
中的单体化合物 LQ-4、连翘苷和连翘酯素均能够
发挥抗肿瘤作用 [13, 16, 17]，那么连翘根醇提物中是
否也含有具体的化合物而发挥抗肿瘤作用呢？对
这个问题还需要进一步的研究探讨。解决这一问
题将有助于进一步研究连翘根醇提物的功能和作
用机制，为连翘根醇提物用于肿瘤的治疗提供理
论基础，也这是本课题组下一步研究工作的重点。
综上所述，连翘根醇提物可在体内外通过调
节 Bcl-2蛋白家族成员的表达而抑制食管癌细胞
的增殖，促进细胞凋亡。关于连翘根醇提物诱导
食管癌细胞凋亡的具体成分和其他作用机制，尚
有待深入研究。
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[参考文献 ]
[本文编辑 ]　张俊彦
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