全 文 ：∶ 1)为流动相 ,黄芩苷保留时间为 5 min左右 ,样品
中黄芩苷的分离效果好。
3. 3　黄芩提取物的主要活性成分为黄芩苷 ,我们将
原地方标准中的紫外分光光度法测定改为用高效液
相色谱法测定 ,操作简便、准确 ,分析快速 ,相对误差
小 ,重现性好 ,使原有标准得到提高。该法可作为黄
芩提取物的质量控制手段。
HPLC法测定红花中 6-羟基山柰酚 -3-O-葡萄糖苷的含量
刘红亚 ,黄志芳 ,罗泽渊⒇
(四川省中药研究所 ,四川 成都　 610041)
中图分类号: R927. 2　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 08 0707 02
　　红花 Carthamus tinctorius L. 为菊科 1年生草
本植物红花的干燥花 ,是一种常用的活血化瘀药 ,具
有活血通络 ,祛瘀止痛之功效。从红花中分离得到的
6-羟基山柰酚 -3-O-葡萄糖苷 [ 1] ,经药效学试验证
明 ,具有抑制血小板聚集 ,对抗去甲肾上腺素引起的
血管平滑肌收缩等作用。 本文用 RP-HPLC测定了
红花中 6-羟基山柰酚-3-O-葡萄糖苷的含量。方法简
便 ,快速 ,灵敏 ,为控制红花药材的质量 ,提供了一个
良好的方法。
1　仪器和药品
HP 1100型高效液相色谱仪 Chemsta tion工作
站 ;对照品 6-羟基山柰酚 -3-O-葡萄糖苷由红花中分
离提纯得到 (自制 ) , HPLC归一法测定其纯度高于
98%。 所用试剂均为色谱纯。
样品红花由本所舒光明教授鉴定。
2　方法
2. 1　色谱条件: 色谱柱: phenomenex ( 150 mm×
4. 6 mm, 5μm);流动相: 乙腈 -0. 15% 磷酸水溶液
( 13. 5∶ 86. 5, pH= 2. 2) ;流速: 1. 5 mL /min;检测
波长: 342 nm ,柱温 25℃ ,见图 1。
2. 2　检测波长的选择:配制 6-羟基山柰酚 -3-O-葡
萄糖苷的对照品 (甲醇 )溶液 ,用岛津 UV2401型分
光光度计进行扫描 ,在 254, 342 nm处有最大吸收 ,
选择 342 nm波长进行含量测定。
2. 3　测定方法:取干燥红花样品粉碎过 40目筛 ,精
密称取 0. 3 g ,置 10 m L具塞试管中 ,准确加入
60% 乙醇 10 mL,超声处理 30 min[2 ] ,离心 ( 5 000
图 1　分离图谱
r /min) 5 min,吸取上清液 10μL直接进样 ,按上述
测定条件进行测定 ,以外标法计算含量。
2. 4　线性范围:精密称取对照品适量 ,加甲醇配制
成 0. 1 mg /mL的溶液。分别吸取 2, 4, 6, 8, 10μL,
注入液相色谱仪 ,按上述色谱条件 ,测定峰面积 ,以
进样量为横坐标 ,峰面积为纵坐标 ,绘制标准曲线 ,
计算回归方程: Y= 1 303. 9X - 12. 14, r= 0. 999 8。
说明 6-羟基山柰酚 -3-O-葡萄糖苷在 0. 2～ 1. 0μg
的范围内有良好的线性关系。
2. 5　稳定性: 对照品溶液 ( 0. 132μg /μL) 5μL进
样 ,按色谱条件进行分离、测定 ,每隔一定时间测定
1次 ,结果在 24 h内均稳定 ,RSD= 0. 70%。
2. 6　精密度试验:取对照品溶液 ( 0. 132μg /μL) 5
μL进样 ,按色谱条件进行分离 ,测定 ,重复操作 5
次 ,RSD= 1. 62% ,说明本方法精密度良好。
2. 7　重复性试验: 精密称取同批红花药材样品 5
份 ,每份约 300 mg,按前述供试品溶液制备方法及
·707·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 8期
⒇ 收稿日期: 2000-11-19作者简介:刘红亚 ( 1963-) ,重庆市人 ,助理研究员。 1983年毕业于重庆药剂学校 ,在四川省中药研究所从事植物化学分析工作 , 1990年毕业于中国药科大学药学专业。曾参加国家自然科学基金课题—— 天然甜味剂研究 ;博士基金课题—— 决明降脂胶囊的研究 ;国家“九· 五”攻关课题—— 红花质量标准规范化研究。 Tel: 028-7853187
色谱条件进行含量测定 , RSD= 1. 53%。
2. 8　回收率试验: 准确称取新疆红花粉末 7份 , 4
份中分别加入 6-羟基山柰酚 -3-O-葡萄糖苷对照品
溶液 ( 0. 132 mg /mL) 1, 2, 3, 4 mL,另 3份不加 ,然
后加入 50% 乙醇至 10 m L,依法提取 ,分离 ,测定 ,
计算回收率 ,结果 为 97. 2% , RSD= 2. 0% 。
2. 9　样品测定:用本法对 9个不同产地红花中的
6-羟基山柰酚 -3-O-葡萄糖苷进行了含量测定 ,结果
见表 1。
3　讨论
3. 1　本法分析样品不需柱前处理 ,直接进样 ,杂质
峰与样品峰能达到基线分离 (见图 1)。
3. 2　经试验溶剂系统因乙腈 -0. 15%磷酸水溶液
( 13. 5∶ 86. 5) ,红花样品中 6-羟基山柰酚-3-O-葡萄
糖苷分离效果明显。
3. 3　不同产地红花成分含量差异较大 ,说明红花在
采收、加工、贮藏等方面对其质量有明显影响 ,值得
引起注意。
表 1　红花中 6-羟基山柰酚-3-O-葡萄糖苷含量测定 ( n= 3)
产地 含量 (% ) R SD (% )
新疆阜康市 0. 13 0. 77
新疆吉木萨尔县 0. 106 0. 94
云南下关 0. 117 0. 85
山西 0. 029 1. 90
四川简阳 0. 081 1. 43
河南 0. 076 1. 51
湖南 0. 091 1. 27
武汉 0. 061 1. 89
陕西 0. 128 0. 45
参考文献:
[1 ]　 Hat to ri M , Huang X L. Ch e Q M. 6-Hydroxykaepferos and it
s glycosides f rom Cartham us tinctorius petal s [ J] . Phytochem,
1992, 31: 4001-4004.
[ 2 ]　余　红 . 红花中总黄酮含量的库仑滴定法测定 [ J ]. 分析化
学 , 1997, 25( 2) 371.
封闭连续柱层析装置的研制
易求实⒇
(湖北教育学院 ,湖北 武汉　 430060)
中图分类号: TQ028　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 08 0708 02
　　柱层析是复杂组分分离提纯的非常有效的手
段。使用通常的柱层析装置 ,溶剂挥发扩散、环境污
染。本文介绍的封闭连续柱层析装置洗脱液处于基
本封闭的循环利用状态 ,易于实现自动控制。此外 ,
还将洗脱和产品浓缩结晶两道工序结合起来 ,缩短
了生产周期 ,洗脱液的用量可显著减少。
1　装置主要部件和作用
1. 1　集热式磁力搅拌器:由 DF— 101B集热式恒温
磁力搅拌器改装而成 ,内装液体石蜡 ,工作温度用电
接点温度计自动控制。 装置见图 1。
1. 2　层析柱:由层析主体柱 ,洗脱液蒸气通道管 ,洗
脱液流出控制管组成 ,工作时 ,以干法或湿法装柱 ,
硅胶层上部装有适量拌有待分离样品的硅胶 ,最上
面铺一层脱脂棉 ,并注意略低于蒸气通道出口。流出
控制管有 3个作用 ,第一 ,通过旋转活塞 5和 6以控
制溶液速度从而控制层析速度 ,第二 ,通过取样孔 7
取样检测 ,实现对分离效果的监控 ,第三 ,必要时可
用一个能与活塞 4的母磨口磨合的分液漏斗在不改
变体系负压的情况下补充洗脱液。
1. 3　回流冷凝管:洗脱液蒸气在这里冷凝回流 ,由
一上端接一与之磨合的弯头经耐负压橡皮管与射流
真空泵相连。冷凝回流效果关系重大 ,因此不能使用
温度较高的水泵循环水 ,在良好的冷凝条件下 ,蒸气
泄漏极少 ,分别一次加液就能完成杂质淋洗或产品
洗脱的任务。
1. 4　真空负压装置: 由射流泵 ,水泵及循环水箱组
合而成。水泵抽取循环水箱中的水加压注入射流泵 ,
使柱系统形成负压 ,射流泵流出的水复流入循环水
箱。通过控制水流速度来控制系统真空度 ,进而使洗
脱液在规定的温度下沸腾。
·708· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 8期
⒇ 收稿日期: 2000-12-28作者简介:易求实 ( 1943-) ,男 ,湖南长沙人 ,副教授 ,长期从事复杂物质分离提纯和精细化学品制备研究。 发表论文 30多篇 ,国家专利 2项、出版专著 2部 ,近几年来 ,着重在天然药物有效成分提取方面进行探索。 Tel: ( 027 ) 88852529　　 E-mai l: Qsyi
@ hubce. edu. cn