全 文 ：上清液再用等体积的苯酚一氯仿一异戊醇 (25
: 2 4 : 1) 抽提 1 次 , 用无水 乙醇沉淀后将沉
淀的 D N A 离心分离 , 再用 70 %酒精洗两遍
后干燥 ,溶于适量 T E 中冻存 。
R A P D 反应 : 扩增总体积为 25 川 , 其 中
含 io m m o l/ L T r is 一C I(p H S . 3 ) , 2 . om m o l/ L ,
M g C 1
2 ,
d A T P
,
dC T P
,
d T T P
,
d G T P 各
0
.
lm m o l/ L
, 引 物 为 0 . 2仁m o l/ L , son g 核
D N A
,
1
.
5 单位 T ag 酶 。 整个 扩增 程序为
9 4 ℃ lm in , 3 6℃ Zm in , 7 2 oC Zm in , 经 4 5 个循
环 后 , 再 在 72 ℃延 伸 sm in 。 扩增 产 物在
1
.
4 %的琼脂糖中电泳 , 经 E B 染色 , 在紫外
灯下观察并照像 。
2 结果与讨论
对 40 个引物进行扩增实验 , 结果 5 个引
物扩增出谱条 , 如 件10 引物扩增 (图) 。 结果
表明种间有 明显差异而种内差异不明显 , 如
图中 5 、 6 号皆为小木通 , 但 6 号产昆明 , 5 号
产景洪 , 其扩增产物一致 。 本研究初步表明
R A PD 作为一种鉴定方法是合理 的 , 同时 ,
由于本研究采用干燥的材料 , 因此对干燥的
植物类中药的鉴定就更有实际应用价值 。
在本研究中发现 , T ag 酶用 1 单位 , 没有
用 1 . 5 单位好 ;循环由 30 增到 45 个后 , 扩增
效果较好 ;对于不同的扩增材料 , 扩增优化条
件也不相 同 , 而优化条件对成功的扩增极为
重要 。
参 考 文 献
1 江苏新医学院. 中药大辞典 . 上 、下册 . 上海 : 上海科学技
术出版社 , 1 98 6
2 W illia m s J G K
, e t a l
.
N u el A e id s R e s
.
1 99 0
,
1 8
:
36 5 3 1
3 L e e w o o n g Bi n
, e t a l
.
K o r e a n jo u r n al Pla n t T a x
, 19 9 3
,
2 3 (2 )
:
3 5
4 A da ms R P
, e t a l
.
T h e o re tie a l APP lie d G ene t
, 1 9 9 3
,
8 7
(l~ 2 )
:
2 2
(1 9 9 5
一 10 一2 7 收稿)
Id e n tifica tio n o f Se
v en S pe e i
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Z h a n g R o n g
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R A P D a n a lys is
.
R e s u lts sh o w e d tha t the d iffe r e n e e s o f R A PD b e tw e e n diffe r e n t s p e eie s w e r e s ig n ifiea n t
,
b u t
n o n sig n ifiea n t b e tw e e n s a m e sp e eie s o bta in e d fr o m d iffe r e n t lo e a litie s
.
一年生延胡索块茎的研究
安徽中医学院药学系(合肥 230 38) 胡 坷 , 梁益敏
摘 要 采集野生延胡索 Co ry da lis ya n hus 如 的种子 , 在苗圃中播种 , 栽培 , 发现其出苗率与种子
的大小及成熟度有关 。 对其 1 年生块茎的生长形态及内部结构进行观察 , 其虽为双子叶植物 , 但出
苗时仅 l 枚子叶 , 皮层有分泌组织 , 形成层发达 , 而木质部 、韧皮部均不发达 。
关锐词 延胡索种子 块茎 栽培 解剖
延胡索 co 勺d a lis 少a n h u s u o w · T · W a n g
e x 2
.
Y
.
Su e t C
.
Y
.
W
u 为多年生草本 , 无
毛 , 野生于丘陵坡地林下 , 也可栽培生长 。 其
地上茎高 5 ~ 2 5c m , 茎生叶 , 互生全裂 , 披针
, A d d r e ss : H u K e
,
De p
a r tm e n t o f Ph a rm a e y
,
A n h u i Co lle g e o f T ra d itio n a lC h in es e M
e diein e
,
H e fe i
《中草药) 29 9 6 年第 2 7 卷第 2 2 期 . 6 8 7 .
形 。 花为总状花序 , 青紫色 。 果为线形茹果 ,
易开裂 , 种子圆形 , 有光泽 , 并有一乳白色尾
状附属物 , 成熟时为黑色 〔, ,地下部分为球状
块茎 ,有须根 , 常入药 , 性味辛 , 苦 ,有活血 , 散
察 , 止痛作用 , 在安徽地区 , 花期 3 月下旬至
4 月中旬 , 果期 4 月上旬至 4 月末 , 5 月地上
部分基本枯萎 , 腐烂 。本研究采集此种野生延
胡索的种子播于与 自然环境基本相似的苗圃
中栽培 , 观察 1 年生延胡索的生长状况 , 块茎
的形成及内部结构 。
1 材料及方法
1
.
1 种子的采收及播 种 : 1 9 9 3 一 0 4 下旬 至
1 9 9 3
一
0 5 上旬 , 于合肥市西郊大蜀山西坡林
地采集母株发育健壮的种子 , 其大部分为黑
色 , 发亮 , 仅少数为褐色 。按大小 、颜色分开装
瓶 , 瓶中覆盖少量微湿沙土 , 在室温下 (巧 ~
30 ℃ )置黑暗处保存 , 于同年 6 月中旬播于苗
圃 ,界时气温 24 一30 ℃ , 在自然状态下越夏 、
秋 、冬 3 季 , 至第 2 年春 2 月末出苗 , 观察出
苗率 。
1
.
2 1 年生延胡索的生长 : 对出苗的延胡索
每 1 0d 采集 1 次 , 并观察其生 长状况 , 用
F A A 固定新鲜标本 , 制石蜡切片 , 并用番红 -
固绿染色 , 置显微镜下观察其内部结构 。
2 观察结果
2
.
1 种子的成熟状况与出苗的关系 : 黑色 ,
发亮的大粒种子 , 出苗率约 45 写 ;褐色种子
出苗率为 。 ;黑色的小粒种子出苗极少 , 并生
长缓慢后死亡 , 由此可推断 : 褐色种子为尚未
成熟的种子 ;小粒种子为发育不 良的种子 , 很
难形成块茎 。
2. 2 1 年生延胡索的生长及块茎的形成 : 延
胡 自 6 月份播种后 , 经过 8 个月左右 , 于第 2
年春 2 月上 、中旬 , 陆续开始出苗 , 子 叶仅为
1 枚 。 出苗 1 0d 左右 , 有极细小的块茎形成 ,
块茎下长有须根 , 分布于 10 c m 以上的土表
层内 。 到 4 月下旬 , 地上部枯死时 , 块茎呈球
形 , 乳白色 , 直径约为 3 m m 左右 , 此后地下
部分呈休眠状态 。
2. 3 块茎的内部结构
·
6 8 8
·
2
.
3. 1 块茎横切面 : 最外部有 2 列左右木质
化的厚壁细胞 , 其内为多层皮层薄壁细胞 , 并
充满单 、复式淀粉粒 , 维管束内始式 , 导管木
质化程度较低 , 用番红一固绿对染后 , 着色较
木化的外皮层为难 (图 1 ) 。
图 1 1 年生延胡索块茎横切面详图
l
一表皮层 2一皮层薄壁细胞 3 一淀粉粒 4一分泌
组织 5 一韧皮部 6一形成层 7 一木质部 8一盆
2
.
3
.
2 块茎纵切面 :表皮细胞长方形 , 有马
蹄状加厚 , 皮层细胞丰富 , 类圆形 , 韧皮纤维
不发达 , 呈长圆形 , 较短 ,形成层宽 , 细胞长方
形排列整齐 ,导管较少 ,着色较浅 , 螺状加厚 ,
并联结成网状 。髓细胞类似于皮层细胞 , 除表
皮 1一 3 层外 , 淀粉粒丰富 (图‘ 2 ) 、
卜拼郭钵i摄)l君馨毛亘
I)!”月时
图 2 1 年生延胡索块茎纵切面详图
1一淀粉粒 2 一螺纹导管 3 一形成层 4 一韧皮部
5
一髓 6一皮层薄壁细胞 7 一厚壁细胞
3 结论
用野生种子进行人工栽培繁育延胡索是
可行的 , 但采收时要注意种子的成熟度及种
子的大小 , 呈黑色发亮且粒大种子为好 , 而过
小粒的种子即使出苗 , 很难成活 , 也不能形成
块茎 , 这大概与成熟的种子在体眠期尚存在
着一些 内部结构的变化 , 即生理后熟作用有
很大关系〔2 , 。延胡索虽为双子叶植物 , 但其出
苗时仅有 1 枚子叶 。 1 年生块茎很细小 , 达不
到可利用的重量〔2〕 。 但可用来做种栽 , 繁育 2
年生的延胡索 , 其 内部结构 : 表皮有 1 一 3 层
小型细胞组成 , 排列较紧密 , 富含角质层 ;皮
层由疏松的大型细胞组成 , 并可见含有树脂
样物质的分泌组织 , 富含 淀粉粒 , 维管 束 1
枚 , 内始式 , 形成层发达 , 木质部 , 韧皮部不甚
发达 。 估计 1 年生的块茎是一种未充分发育
的块茎 , 有待于来年继续生长成熟 。延胡索胚
的生长以及对块茎生成的影响有待进一步研
究 。
致谢 : 延胡索原植物为本院武祖 发和王
德群教授鉴定 , 特此致谢 。
参 考 文 献
1 安徽省科学技术委员会 . 安徽中药志 . 第一卷 . 合肥 , 安
徽科学技术出版社 , 1 9 92 . 16 5
2 安 田真宰艳 , 他 . 生药学杂志旧 ) , 1 98 5 , 3 9 (3 ) : 20 8
(1 9 9 5
一
0 8
一
1 4 收稿 )
Stu d ies o n T u b er a n d Fir st A g e P la n ts o f Y a n hu su o (Go ry d
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H u K e
,
L ia n g Y im in
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n h u二0 W . T . W a n g e’x 2 . Y . S u e t C . Y . W u 15 a n a p e re n n ia l h e rb w h ie h 盯o u s w ild in A n h u i
Pr o v in e e
.
T he tu b e r o f th e Pla n ts 15 u s e d as a n a n o d yn e
.
C u ltiv a tio n o f th e Pla n t w ith s e e d s o b ta in ed fr o m th e
w ild w a s e a r r ie d o u t in o u r n u r s e ry b r e e din g h o u s e
.
R e s u lts s ho w e d th a t th e e m e r g en e e r 尽te d e p e n d s u p o n th e
s iz e a n d r ip e n e s s o f th e s e e d
.
A ltho u g h it 15 a d ieo tyl
e d o n
, ” t its s ee d lin g s ho w e d o n ly a s in g le e o tyled曲 . Se e-
r e t a r y tis s u e s e o u ld b e fo u n d in it s eu tieu la r la y er
·
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s w e ll d eve l
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w e r e n o t w e ll d e v e lo p ed
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《中草药》杂志 19 9 6 年第 27 卷增刊(“中药新药研究
与开发信息交流会”会议论文集)征订启事
国家医 药管理局 中草药信 .息中心站 、《中草药》杂志编料部于 1 9 96 一09 一20 ~ 24 联合主办
“ 中药新 药研制与开发信息交流会” , 并经国家科委「国科发信字 (1 9 6 ) 2 8 2 号〕批准 , 编样 、 出
版 、发行《中草药》杂志 1 9 9 6 年第 27 卷增刊 (总第 28 2 期 , 会议论文集) 。 增刊设专论 、有效成
分 、药剂与工艺 、 药理实验与临床观寨 、药材及综述等栏 目 , 主要 内容如下 :
文 ; 并向全国有关单位广泛征文 , 从 中精选 、荟草 。 增刊将为科研单位 、大专院校 、医疗保健 、生
产企业 、 药检 、 药材等部门提供热点课题 、最新 资料 , 以利技米决策 , 开拓思路 , 启发选题和促进
新药研究 。
增刊为 16 开本 , 采用激光照排 , 胶版印别 , 27 6 页(约 60 万字左右 ) , 共收载论文 14 0 篇 。
天津市报刊增刊特许准印证 (9 6) 第 0 45 号 。 本部发行 , 定价 45 元 , 另加包装费 、邮局附加费 5
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(中草药 》1 9 9 6 年第 2 7 卷第 1 1 期 · 6 8 9 ·