全 文 ：瑞毒霉在白花曼陀罗中消解动态研究
中 国 医学 科学 院
中国协和医科大学药用植物研究所
(北京 1 0 0 0 94) 张呀明 . 陈建 民 宋洪涛 刘慧灵
摘 要 用 R p一 H P L C 对病毒霉在白花曼陀罗花和叶中的消解动态进行了研究 。其色谱柱为 O D S -
C
, s柱 , 流动相为 M e O H 一H Z( ) ( 6 : 4 , V / V ) ,检测波长为 26 4 n m ;瑞毒母的最小检出量为 2 . 5 6 x l o 一 9
g
。 样品用硅胶小柱纯化 . 对白花曼陀罗花和叶的瑞毒橄添加回收率为 73 . 56 % ~ 75 . 56 % , R S D 为
。 . 48 % ~ 3
.
27 %
。 瑞毒霉在白花曼陀罗叶和花中的消解方程和半衰期分别为 C = 64 . 41 31 e 一 ` 2 1 19t ,
C = 1 9 4
.
3 1 6 6 3 e 一氏 ` 7 43t 和 3 . 2 7d , 1 . 4 6 d .
关镇词 瑞毒霉 白花曼陀曼 消解动态 R p 一H P L C
白花曼陀罗 aD ut ar m et el L
. 又名风茄 区 , 一个空 白对照区 , 每小区 3m 2 , 每处理 间
儿 、大颠茄 、 野蓖麻 、 猪波罗等 。 在中药配伍中 设有保护行 。 用 25 %瑞毒霉可湿性粉剂按
以花入药 ,名为洋金花 ,其叶为工业提取东莫 2 0 09 / 6 6 6m , 的用量兑水 6 0k g 均匀地喷雾于
若碱的原料 。 白花曼陀罗叶和花表面 (以叶面有液滴滴下
在栽培过程中霜霉病为其主要病害之 为止 ) ,然后按 1/ 1 2 、 1 、 3 、 7 、 10 及 15 d 分别随
一 ,瑞毒霉作为一种较新型的内吸收性杀菌 机采取叶片和花 ,供消解动态研究之用 (样品
剂 ,具有保护植物和治疗病害的作用 ,在本植 存放于低温冰箱中 ) 。 检测前从冰箱中取出 ,
物中使用频繁 。瑞毒霉在我国的应用较晚 ,且 迅速在低温处风干后称量提取 。
尚未见到其残 留量分析的正式报道 ,而 国外 2 分析方法
对其在农作物中已有一些报道 , 其主要分析 2 . 1 色谱条件 : 250 x 4 . om m i( . d ) C 18 一O D s
手段为 G C 和 H P L C 〔 ,一 ` , 。 鉴于上述情况 , 我 柱 ( 10拌m ) , 室温 , 进 样 : 2 0拌l , 流速 : 1 . o m l /
们建立了白花曼陀罗叶和花中瑞毒霉残留量 m in , 检测波长 : 2 6 4n m , 流动相 : M e O H 一 H ZO
分析的 R p 一 H P L C 法 , 同时测定 了瑞毒霉在 ( 6 : 4 , V /V ) ,灵敏度 : 0 . 08 A U F S ,瑞毒霉的
上述材料中的消解动态和半衰期 , 为合理 、有 保留 时间 9 . 72 士 0 . 16 im n , 最 小检 出量为
效而安全地使用该药 , 为防止其污染 ,提高药 2 . 56 x lo 一 , g ,理论塔板数 n 为 2 7 0 。
材质量提供科学依据 。 2 . 2 样品前处理 : 准确称取叶和花的干燥粉
1 材料和方法 末 2 9 于 50 m l 具塞三角瓶中 , 加入 40 m l 丙
1
.
1 仪器和试剂 : V ar ian 2 0 2 0 H P L C 系统 , 酮浸泡过夜 , 超声提取 hl , 抽滤 , 残渣 加入
G J
一
6 0 1 进样阀 (大连化物所 ) ,瑞毒霉标准品 3 0m l 丙酮超声 0 . h5 ,抽滤 。 残渣及滤纸用丙
(纯度 > 9 % ,沈阳化工研究院 ) , 25 %瑞毒霉 酮洗涤 2 ~ 3 次 , 合并全部滤液 , 于旋转蒸发
可湿性粉剂 (南通化工厂 ) , 10 。一 20 目柱层 器上 (水浴温度为 45 ~ 50 ℃ )浓缩近干 ,转移
析用硅胶 (青岛海洋化工厂 ) , lE m a 31 0 超声 至小烧杯中 , 挥至近干时 , 加入适量硅胶拌
清洗器 , Z F Q 一 85 A 真空旋转 蒸发器 , 20 x 样 , 干燥 ,上样至预先装好小硅胶柱中 (8 g 硅
0
.
sc m 玻璃柱 。 其它溶剂均为分析纯 。 胶 ) ,用石油醚一乙酸乙醋 (2 : 1 , V / V ) 湿法装
1
.
2 白花曼陀罗材料的处理与采集 : 在本所 柱 , 且用它作为洗脱液 ,洗脱 ,弃前流出液 ,收
植 物 园设 试验 面积 24 m “ , 3 个重复 处理小 集黄色 一淡黄色部分 (约 80 m l ) , 经旋转蒸发
.
A d d
r e s s : Z h
a n g s h u m i
n g
,
I n s t i t u t e o f M
e
d i
e i n a l P l a n t
,
C h i
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A
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d
e m y o f M
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e a l cs i
e n e e s ,
C h i
n e s e
X i
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h
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M
e d ie a l U
n iv e r s i t y
,
eB ij i
n g
《中草药 ) 1 9 96 年第 2 7 卷 第 7 期 . 4 0 3 .
器 (水浴 温度 45 一 50 ℃ ) 浓缩近 干 , 甲醇溶
解 、 转移并定容于容量瓶中 ,待测 。
2
.
3 标准 曲线的绘制 : 准确称取瑞毒霉标准
品 .3 2m g 于 10 m l 容量瓶中 , 用 甲醇溶解并
定容至刻 度线 , 配成贮备液 , 准 确移取 40 、
6 0
、
8 0
、
1 0 0 和 5 0 0拌l 贮备液分别于 1 . o m l 容
量瓶中 , 甲醇定容 。 在上述色谱条件下测定 ,
得到其回归方程为 : Y ~ 1 . 1 8 64 x l o 一 ` X +
o
·
0 1 6 2
, r = 0
.
9 9 9 9
。 式中 Y 为瑞毒霉含量
(拜g ) , X 为峰面积 。
2
.
4 样品中瑞毒霉含量测定 : 按上述色谱条
件 , 采用外标法测定各待测样品中瑞毒霉含
量 , 并用标准液作随行对照 。 根据 H P L c 测
得数据计算出瑞毒霉在叶和花中的消解动态
和半衰期 。样品中瑞毒霉含量的计算公式为 :
表 1 瑞毒 . 在白花曼陀罗叶和花中的
消解动态 (m g / k g , n 一 3 ) ( x 士 s )
取样间隔期 (d)
`兮2
l 0
l 5
消解方程
相关系数 r
半衰期 t l zZ
6 4
.
5士 1 . 1 0
3 4
.
4士 0 . 9 7
1 1
.
1士 1 . 0 7
7
.
1士 0 . 2 4
3
.
2士 0 . 3 5
1 7 4
.
9士 9 . 3 6
1 3 6
.
4士 4 . 59
4 1
.
2士 0 . 8 3
8
.
2士 0 . 7 1
1
.
6士 0 . 0 1
C = 6 4
.
4 1 3 l e 一 o 2 1 19 t C = 1 9 4 . 3 1 6 3 e 一 0 4 74 3 t
一 0 98 7 1 一 0 . 9 9 8 0
3
.
2 7 1 4 6
: 未检出
表 z 回收率测定结果 ( n = 3 ) ( x 士 s )
样品名称 添加标准品
( 拜g )
检出量
( 拜g )
回收率
(% )
R S D
(% )
4
.
2 0士 0 . 0 2
6
.
7 5士 0 . 0 9
7 3
.
6 7士 0 . 3 5
7 3
.
9 9士 1 . 0 1
瑞毒霉含量 (m g k/ g ) -
蔷者黯袭镊爵罗` 定容体积
5
。
7 0
9
.
12
4
.
3 1士 0 . 1 2
6
.
7 1士 0 . 2 2
7 5
.
5 6士 2 . 1 1
7 3
.
5 6士 2 . 4 0
消解方程为 : C 一 A e 一 Bt , C 为不同天数 ( t) 样
品中瑞毒霉含量 ,根据 H P L C 数据 , 经 回归
计算得出 A 、 B 值 。 半衰期 t , / 2= 0 . 6 9 3 3 / B 。
2
.
5 样品精密度测定 : 取同一批白花曼陀罗
叶 (第一天 ) , 花 (第三天 ) ,按上述方法提取 ,
净化并测定 ,每批样品重复 5 次 。 测得 白花曼
陀罗叶和花的精 密度 R S D 分别为 1 . 8 %和
1
·
7 8%
。
2
.
6 回收率测定 : 分别准确称取未经农药处
理过的 白花曼陀罗叶和花各 2 9 ,置于具塞三
角瓶中 ,分别加入一定体积的标准品溶液 ,混
匀凉干 。按上述方法提取 ,净化并测定瑞毒霉
含量 。 每处理重复 3 次 ,计算其回收率 。
3 结果与讨论
3
.
1 瑞毒霉在 白花曼陀罗叶和花中的消解
动态和半衰期 见表 1 , 回收率测定结果见表
2
。 从表 1 可以发现 ,瑞毒霉在白花曼陀罗花
中的消解较叶中快 ,这可能跟这二部位 的化
学成分不同有关 (花中以东蓑若碱为主 , 蓑若
碱次之 , 而叶中则正好相反 〔9 〕 ) 。 沈一行等 〔 , “ 〕
曾报道了敌克松对白花曼陀罗和毛曼陀罗中
·
4 0 4
·
二种主要生物碱 (东蓑若碱和食若碱 ) 的含量
有明显的影响 , 由于瑞毒霉的结构跟这一种
生物碱有相似之处 ,故它们之间存在着相互
影响 。 从表 2 得知 ,其 回收率均不是很高 ,反
映了采用硅胶净化样 品时有损失 , 同时瑞毒
霉 标 准品 在这 两 种材 料 中 的 添加 水平 为
2
·
8 5一 4 · 5 6拌g / g , 实际添加量很低 , 样品吸
附及转移过程也造成一定损失 。
3
.
2 由于白花曼陀罗叶和花中成分复杂 ,且
食若碱和东蓑若碱含量较高 , 其物理性质跟
瑞毒霉有相似之处 , 故对瑞毒霉的分离干扰
较大 。 我们曾用了多种吸附剂进行了净化试
验 ,结果不满意 。 最后采用硅胶 T L C 展开 ,发
现瑞毒霉与黄色部分有重叠 , 且与前后色带
有很好的分离度 。 空白样品经 T L C 展开 ,刮
下相 同部位的硅胶 , 经溶剂洗脱 , 用 H P L C
测定 ,对瑞毒霉无干扰 , 又经柱层析进一步验
证 , 说明此方法可行 ,故最后采用了上述硅胶
柱净化的条件 。
3
.
3 检测波长的选择 : 经过瑞毒霉标准品的
U V 吸收情 况 (在 2 6 4 n m 和 2 7 2 n m 处有 吸
收 ) , 选择其最大吸收峰 2 6 4n m 作 为 H P L C
的检测波 长 。 曾有文献报道 , 选用 2 2 0n m 〔 ’ 〕和
2 7 5 n m 〔8〕作为检测波长 , 但本实验中曾作了
用此 波长 为检 测波 长 , 但均没 有 2 6 4 n m 处
好 。
3
.
4 根据 以上实验结 果 , 并参 照 W H O 和
F A O 在 1 9 8 5 年推荐的瑞毒霉在农作物上的
最大残 留量 标准 ( M R I一 ) 在 0 . 1一 0 . 5拼g /g ,
结合南洋金花在中药制剂与配伍 中的应用情
况 , 建议在 白花曼陀罗上最后一次使用瑞毒
霉 (使用量为 I k g / h a) 到收获的安全间隔期
为 1 5d 。
参 考 文 献
1 S p e e k M
, e t a l
.
J C h r o m a t o g r a
,
1 9 8 0
,
2 00
:
3 1 3
2 F r a n e e s e o T
, e t a l
.
J A g r i e F o o d C h e m
, 1 9 8 1
,
2 9
: 1 2 9 6
3 C a v
e r ly D J
, e t a l
.
A n a ly s t
,
1 98 1
,
10 6
:
3 8 9
4 G
e t z i n I W
,
e t a l
.
J A s s o e o f f A n a l C h e m
, 1 9 8 9
, 7 2
: 3 6 1
5 V u i k J
, e t a l
.
J A g
r
i
e F o o d C h
e
m
, 1 98 9
, 3 7
:
8 8
6 E I
一
Y a s e r y l l
, e t a l
,
A r
a
b J P l
a n t P r o t
, 1 9 9 1 , 9 : 23
7 L o伴 z L F , e t a l . J A g r ie F o od C h e m , 1 9 8 9 , 3 7 ; 6 8 4
8 K h a az
n e h i R
, e t a l
.
In t J T
r o p A g r i e
,
19 8 9
,
7
:
1 2 9
9 C A
,
6 0
: 7 8 70 e
10 沈一行 , 等 . 中药材 , 1 9 9 3 , 1 6 ( 3 ) : 7
( 1 9 9 5
一
1 2
一
2 1 收稿 )
S t u d i e s o n t h e D i s P e l l e d D y n a m i e s o f M e t a l a x y l i n H云n d u D a t u r a (刀。 ut ar m e t e l )
Z h
a n g Sh
u m in g
,
C h
e n Jia n g m i n
,
oS
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n g t a o
, e t a l
以 s P e ll e d d y n a m ie s o f m e t a la x y l in b o t h l e a v e s a n d fl o w e r s o f D a t u r a m e t e l L . w e r e s t u d ie d b y R P -
H P L C
.
O D S
一
C
一: w a s u s e d a s t h e e o l u m n w it h M e O H
一
H ZO ( 6 , 4 ) a s t h e m o b il e p h a s e a t a d e t e e t io n w a v e le n g t h
o
f 2 6 4
n m
.
T h
e
l im it o f d e t e c t io n o f m e t a l a x y l w a s 2
.
5 6 x 1 0一 9 9 , w h il e t h e s a m p l e s w e r e p u r if ie d t h r o u g h a
s m a l l s il ie a g e l e o lu m n
.
T h
e a d d e d r e e o v e r y r a t e s o f m e t a l a x y l i n t h e s e s a m p le s w e r e 7 3
.
5 6 %一 7 5 . 5 6 % . R S D
w a s 0
.
4 5 %一 3 . 2 7% . T h e d i s p e lle d e q u a t io n a n d t h e h a lf 一 lif e t i m e o f m e t a l a x y l i n le a v e s a n d fl o w e r s w e r e C
一 6 4 . 4 1 3 l e 一 0 · Zl l gt , 3 . 2 7 d a y s a n d C 一 1 9 4 . 3 1 6 3 e 一 0 · 4 7 43 , , 1 . 4 6 d a y s r e s p e e t iv e l y .
根痛平片中葛根素的含量测定
北京医科大学实验药厂 (1 0 0 83) 张世勤 介 李树琦 胡长风 柳 林
摘 要 应用 H PI 尤 法测 定根痛平片中葛根素的含量 , 作为控制该制剂质量的方法 。
关键词 H P L C 根痛平片 葛根 葛根素
根痛平片是 治疗颈椎病较 为有效的药
物 , 由牛膝 、 葛根 、 伸筋草 、 红花 、 乳香 、 没药等
多味中药组成 。 其功能是祛风止痛 , 养血活
血 , 可以治疗 由于颈椎病引起的颈部痛 、 肩臂
痛 、 坐骨神经痛 , 以及各种原因引起的神经根
痛病 。 组方中的葛根在治疗颈项强痛方面起
着很重要的作用 , 其主要成分为葛根素 , 因此
测定葛根中的葛根素含量 , 对控制根痛平片
的质量是有着十分积极的意义的 。
1 仪器与试剂
美国 S P 公 司 P 4 0 0 0 型高效液相色谱
仪 , F O C U S 紫外检测器 , S P 38 6 E 色谱工 作
站 , 甲醇为优级纯 ,双蒸水由北京医科大学提
供 , E D T A 及磷酸氢二钠 均为分析纯 , 葛根
素为中国药品生物制 品检定所提供 , 根痛平
片为北京医科大学实验药厂生产 。
·
A dd
r e s s :
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a n g S h iq l n
,
E x p e r im
e n t a l F a e t o r y
,
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一Jin g M e d i e a l U n iv e r s it y , eB ij i
n g
《中草药 》 1 9 9 6 年第 2 7 卷第 7 期 . 4 0 5 .