全 文 ：浙贝母低温解除休眠过程中醋酶同工酶和
可溶性蛋白质的电泳分析
中国医学科学院
中国协和医科大学药用植物研究所
(北京 10 0 0 94) 高丈远 脚 李志亮 肖培根
摘 要 用电泳方法分析了浙贝母低温解除休眠过程中芽 、 鳞片近轴面表皮和鳞片内部组织的醋
酶同工酶和可溶性蛋白质的变化 。 芽的酷酶同工酶谱带较多 ,变化明显 。 鳞片内部组织的醋酶同工
酶谱带较少 ,变化较小 。 芽 、 鳞片近轴面表皮和鳞片内部组织可溶性蛋白质图谱的变化主要是颜色
深浅的变化 。 结果说明浙贝母低温解除休眠的过程是由芽和鳞片共同完成的 , 鳞片近轴面表皮在
芽和鳞片内部组织的相互关系中起着重要作用 。
关锐词 浙贝母 休眠 醋酶同工酶 可溶性蛋 白质
浙贝母是一种多年生草本药用植物 ,有
止咳化痰等多种功效 。 用 S C ~ 10 ℃低温处
理 s d 左右解除其夏季的休 眠 , 可以使其在
气温适宜的秋季再度出苗生长 , 达到 一年生
长两季的目的 , 从而缩短商品鳞茎的收获年
限 l[] 。 我们在以前的研究 中曾分析了浙贝母
的芽和鳞片在低温解除休眠过程中过氧化物
酶和酷酶的活性变化图 。 后来的研究发现 ,在
休眠解除后鳞片衰退时 ,鳞片上近轴面表皮
附近的几层细胞首先衰退 , 形成一条清晰的
破碎细胞带 31[ 。 进一步的研究发现 , 鳞片衰退
时 ,近轴面表皮和 内部贮备组织的过氧化物
酶和可溶性蛋 白质有所不同〔`」。 为了深入探
讨浙 贝母低温解除休眠的机理 , 我们将鳞片
近轴面表皮和内部组织分开取样 , 与芽一起
用电泳方法分析其在低温解除休眠过程中醋
酶同工酶和可溶性蛋白质的变化 。
1 材料和方法
1
.
1 材 料 : 浙 贝母 F ir t i l l a ir a t h u n be塔 11
M iq 采自本所实验地 。 当浙贝母地上部分倒
苗 ,地下部分进入休 眠状态后 , 挑选无病 、 残
鳞茎 , 清水洗净后放于石英砂 上 , 在 8℃一
10 ℃条件下进行低温处理 ,定期取样 ,液氮速
冻后存于低温冰箱中 ,统一进行电泳分析 。
1
.
2 方法 : 采用聚丙烯酞胺乖直板凝胶 电泳
技术 。 点样量为 50 川一 ,分离胶浓度 10 % , 浓
缩胶浓度 4 写 。 稳流电泳 ,起始 电流强度 2 0
m A
,前沿线进入分离胶后调 至 4() m A ,整 个
电泳过程约需 3 h , 酉旨酶和蛋 白质的染色按
袁晓华等 ’一“ 1的方法进行 。
电泳样品的制备 : 准确称取材料 1 9 ,加
入 0 . 1 n i o l / 12 、 p H S . 5 的 ’ r r i s 一 } {C l砂 缓冲液 4
m L
,再加入少许石英砂后冰浴条件下充分研
磨 , O C , 8 0 0 0 r /m i n 离心 2 0 m i n 。 取上清液
与 10 % 甘油 1 : 1 混合 , 加入少许澳酚蓝 ,充
分棍 合后 _ L样 。
八 I几 (、 ! ) E 卜
1 2 3
图 l 浙贝母低温解除休眠过程中
酣酶同工酶的变化
A
、
B
、
C
、
D
、
E
、
F 分别为低温处理 0 、 1 5 、 2 5 、 3 5 、 4 5 、
5 5 d 时的谱带 ; 1 、 2 、 3 分别为芽 , 鳞片近轴而表皮和鳞
片内部组织的图谱
. A d d r e s s
:
G
a o
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e n y u a n
,
I n s t i t u t e o f M
e d ie in a l P l a n t
,
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,
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e d ie a l U n iv e r s i t y
,
B e ij in g
·
5 3 2
·
2 结果和讨论
图 1为醋酶的电泳结果 , 图 2 为可溶性
蛋白质的电泳结果 。 可以看出 ,醋酶同工酶的
谱带主要 由 15 条组成 ,可溶性蛋白质的谱带
主要由 25 条组成 。
图 2 浙贝母低温解除休眠过程中
可溶性蛋白质的变化
A
、
B
、
C
、
D
、
E
、
F 分别为低温处理 。 、 1 5 、 2 5 、 3 5 、 4 5 、
弘 d 的谱带 ; l 、 2 、 3 分别为芽 、鳞片近轴面表皮和鳞片
内部组织的谱图
图 1 表明 ,各部位醋酶同工酶的 5一 7 号
谱带比较稳定 ,其它谱带均有变化 。 芽的酷酶
同工酶谱带最多 ,变化最明显 。 其次为鳞片近
轴面表皮的酷酶同工酶 , 与芽的酶谱相比 ,少
12 一 14 号谱带 。 鳞片内部组织的醋酶同工酶
谱带颜色最浅 ,谱带最少 , 变化较小 。 与芽相
比 , 少 4 号和 9一 1 4 号谱带 ,从图 1 , 4 ~ 6 和
从图 2 可以看出 ,各部位可溶性蛋 白质的 13
一 1 8 号谱带颜色最深 , 比较稳定 。 芽和鳞片
内部组织不同时期可溶性蛋白质的谱带变化
主要是颜色深浅的变化 。 鳞片近轴面表皮在
休眠状态时的可溶性蛋白质图谱较其它时期
少 1 , 2 和 2 一 25 号谱带 ,低温处理 15 d 后
谱带的变化主要是颜色的变化 。还可以看出 ,
在浙贝母低温解除休眠过程中 , 各谱带在芽 、
鳞片近轴面表皮和鳞片内部组织 3 个部位的
变化不一致 , 表现了各部位内在代谢的复杂
性 。
酷酶同工酶在植物体内广泛存在 , 参与
若干酶类的修饰 、激活或钝化困 。 与植物体内
的醋代谢和 内膜系统的发育有关 7[] 。 浙贝母
低温解除休眠过程 ,是一个复杂的代谢过程 ,
其中有许多醋酶参与的反应 。 蛋 白质是基因
表达的产物仁. 〕 。 其谱带的活跃变化表明了低
温解除休眠过程中各部位核酸 、酶和蛋白质
代谢的活跃 。 芽的醋酶同工酶图谱变化最大 ,
表明其代谢最活跃 , 另外两个部位电泳 图谱
的变化表明鳞片也参与 了低温解除休眠的过
程 。 浙贝母的休眠解除一方面是使芽“ 苏醒 ” ,
另一方面也使鳞片内部组织做好准备 , 为芽
的生长降解并输出贮备物质 。 鳞片近轴面表
皮醋酶同工酶和可溶性蛋白质图谱的活跃变
化表明它在芽和鳞片内部贮备组织的相互关
系中起着重要的作用 。
参 考 文 献
1 李志亮 , 等 . 中草药 , 1 9 8 5 , 1 6 ( 1 ) : 1 7
2 高文远 , 等 . 植物学报 , 2 9 9 4 , 3 6 (增刊 ) : 2 1 5
3 高文远 , 等 . 植物学报 , 19 9 5 , 3 7 : 8 8 5
4 高文远 , 等 . 中国中药杂志 , 19 96 , 2 1 : 2 72
5 袁晓华 , 等 . 植物生理生化实验 . 北京 :高等教育出版社 ,
19 8 3
,
2 3 3
6 S h a n n o n l
团
M
.
A n n R e v p la n t p h y s i o l
, 1 9 6 8
,
1 9
:
1 8 7
7 S a n d e r o T H
, e t a l
.
L IP id万 , 1 9 7 5 , 10 : 50
8 氏 l r a l le e l , . t a l . J P la n t P h y 。 一0 1 , 1 9 8 8 , 1 3 2 : 2 1 0
( 1 9 9 6
一
1 0
一
1 5 收稿 )
E s t e r a s e I s o z y m e a n d S o l u b l e P r o t e i n A s s a y O v e r t h e C o u r s e o f D o r m a n e y R e l i e v i n g w i t h
L o w T e m p e r a t u r e b y E l e e t r o p h o r e s i s i n T h u n b e r y F r i t i l l a r y ( F八 r il l a而 t h u 碑 be gr ii )
G a o W
e n y 一, a n , L i Z h i li a n g a n d X ia n P e ig e n
C h a n g e s o f e s t e r a s e i s o z y m e a n d 、 o l u b l e p r o t e in in b u d , a d a x i a l e o r t e x a n d i n n e r t is s u e in s e a le w e r e a s -
s a y e d b y o ie e t r o p h o r e s i, o v e r t h e c o u r 、 e o f d o r m a r一c y r e l ie v in g i n F ir t i la
r i a t h u n b e啥` 1 . E s t e r a s e 15 0 ` y m e p a t -
t e r n o f b u d h a d m
。, r e b a n d , t l、 a n t h e o t h e r s , a n d t h e , e b a n d , e h a n g e d , i g n if i c a n t ly a , e o m p a r e d t o t h e a d a x ia l
e o r t e x a n d in n e r t i s s u e I n 、 e a le . T h e b a n d s in e o t e r a s e i s o z y m e P a t t e r n o f i n n e r t is s u e i n , e a le w e r e f e w a n d
e h a n g e d li t t l e t h a n t h e o t h e r s
.
C h a n g e s o f s o lu b l e p r o t e i n p a t t e r n s i n b
一z
d
, a d a x ia l
e o r t e x a n d in n e r t is s u e in
《哺万草药 》 1 9 9 7 年第 2 8 卷第 9 期 . 5 3 3 .
s e a le w e r e m a i n ly o n e o lo r
.
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e a t e d th a玄 b o th t h e b l ld a n d t h e s e a le jo i n e d t h e e o u r s e o f d o r -
m a n e y r e li e v i n g o f F ir t i l a r ia th u n be 塔 11 , a n d t h e a d a x ia l e o r t e x p r e s e n t e d a n im p o r t a n t r o le in t h e r e l a t io n b e -
t w e e n t h e b u d a n d t h e i n n e r t is s u e i n s c a le
.
香砂养胃胶囊中厚朴酚的含量测定方法研究
国家医药管理局天津药物研究院 ( 3 0 0 1 9 3) 戴广训 幸 唐永华
摘 要 采用反相高效液相色谱法 ,测定中成药香砂养胃胶囊和香砂养胃丸中厚朴酚的含量 。 以
联苯做内标 ,样品采用热回流甲醇提取 ,滤膜净化 。 香砂养胃丸中厚朴酚的含量为 O、 26 % ,香砂养
胃胶囊中厚朴酚的含量标准为 3 . 2 % 以上 。
关健词 含量测定 高效液相色谱 香砂养胃胶囊 厚朴酚
香砂养胃 忆为 1 , 9 5年版中国药典收载 ,
温中和 胃 , 用于不思饮食 , 呕吐酸水 , 胃院满
闷 ,四肢倦怠 。 处方 由木香 、 砂仁 、陈皮 、 厚朴
等组成 ,采用药粉泛丸 , 服用量大 。 我们拟将
其改变剂型 , 制成胶囊剂 , 以提高疗效 , 方便
服用 。 处方中含有厚朴 , 厚朴酚对照品为中国
药典收载 ,考虑可以通过厚朴酚的含量来控
制制剂的质量 。 文献报道了用高效液相色谱
法测定一些 中成药中厚朴酚的含量 〔, 一 3〕 , 多
数用的是外标法 。 我们参照 吕归宝等测定蕾
香正气水中厚朴酚的方法 4[J , 用联苯为内标 ,
进行了方法考查 ,测定 了香砂养胃丸和香砂
养胃胶囊样品中厚朴酚的含量 ,表明本方法
提高了准确度 ,操作简便 、快速 。
1 实验材料
仪器 : W at er s 高效液相色谱仪 , 51 0 泵 ,
V 6 K 手动进样器 , 4 41 型紫外检测器 , 岛津
C R 6A 数据处理机 。
试剂 : 分析纯甲醇 ,优级纯联苯 ,超纯水 。
对照品 : 厚朴酚购 自中国药品生物制品
检定所 (归一化检查纯度为 98 %以上 ) 。
2 色谱条件
色谱柱 : 4 . 6 m m X 2 5 0 m m 不锈钢柱 ,填
料为十八烷基硅烷键合硅胶 。
流 动 相 : 甲醇一水 ( 7 8 , 2 2 ) , 流速 0 . 6
m I
J
/m i n
, 检测 波 长 2 5 4 n m , 灵 敏 度 0 . 1
A U F S
,
A T T E N = i
, 纸速 2 m m /m i n 。 经测
定 ,柱效为 7 0 0 以上 ,厚朴酚和杂质峰的分
离度为 2 . 68 。 厚朴酚的保留时间为 13 . 3 43
m i
n ,联苯的保留时间为 1 7 . 4 5 8 m i n 。
3 实验方法
3
.
1 对照品溶液的制备 : 称取五氧化二磷真
空干燥至恒重的厚朴酚对照 品 9 . 90 m g 置
1 0 m L 量瓶中 , 加甲醇溶解至刻度 ,摇匀 ,作
为对照品溶液 。
3
.
2 内标溶液 的制备 : 称取 恒重 的联苯
1
·
9 8 m g
,置 1 0 0 m l 才 量瓶中 ,加 甲醇溶解至
刻度 ,摇匀 , 作为 内标溶液 。
3
.
3 校正因子测定溶液 : 精密量取对照品溶
液 0 . 8 m L , 内标溶液 1 m L 置 10 m L 量瓶
中 , 加甲醇至刻度 ,摇匀 ,备用 。
3
.
4 供试品溶液的制备 : 取香砂养胃胶囊
1 0 粒 , 倾出内容物 ,研成细粉 , 精密称取 0 . 1
g
, 置 1 0 0 m L 圆底烧瓶中 , 加甲醇 5 0 m L ,置
水浴中回流 3 h , 取下 ,冷却 。 精密量取上清
液 1 m L , 内标溶液 1 m L ,置 10 m L 量瓶中 ,
. A d d r e s s : D a i G u a n
t r a t io n o f
i
a n ji n I n
s t it
u t e o f P h a r m a e e u t ie a l R e s e a r e h
,
S t a t e P h a r m a e e u t i e a l A dm in i ,
-
,
T ia n ji n
g x u n
,
T
C hi n a
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.
5 3 4
.