全 文 ：· 药理实验与临床观察 ·
酸浆苦素 B 对活化多形核中性粒细胞
化学发光及 H 20 :产生的影响
北京市中医研究所病理生理室 ( 0 10 0 1 )李 萍 决 盛 巡 王晓中 张建华
鲍朝辉 何延 良 丁 瑞
摘 要 通过观察化学发光及检测 H2 0 :产生 ,考察锦灯笼的主要成分酸浆苦素 B ( p h ys ial n B ,
P h B )对调理醉母多糖激活的多形核中性粒细胞 ( p o l y m o r p h o n u e l e a r le u k o e y t e , P M N )的影响 。 结
果显示 ,不同浓度的 P h B 对活化的 P M N 化学发光呈剂量相关的抑制作用 ,同时对活化 PM N H 2 0 2
的产生也有相同趋势的抑制作用 。 提示锦灯笼抗炎机理可能是抑制 P M N 氧自由基的产生和释放
而发挥作用 。
美 . 词 酸浆苦素 B 多形核中性粒细胞 化学发光 H 2 0 2
多形核中性粒细胞 ( p o l y m o r p h o n u e le a r
le uk co yt
e , P M N )是机体防御感染的第一道
屏障 ,是炎症过程中的主要杀伤细胞 。活化的
P M N 产生呼吸爆炸 ,形成多种氧 自由基 , 如
0 牙 , · O H , H ZO , 及 ,O : 等参与了炎症过程 ,
锦灯笼常用于上呼吸道感染性疾病 ,有 良好
的临床疗效 , 酸浆苦素 B ( p h y s a l in B , P h B )
为其主要 成分 , 因此需观察 P h B 对活 化
P M N 化学发光及 H 2 0 2 产生的影响 , 探讨其
抗炎作用机理 。
1 材料与方法
L l P h B
: 由北京中医医院药化室提供 。
1
.
2 P M N 的制备 : 选用 W ist ar 大鼠 , 雌雄
不拘 ,体重 1 80 一 25 0 9 。 腹腔注入高压灭菌液
体石 蜡 g m l , 1 s h 后 用 p H 7 . 2 的 H a n k ` s 液
6
m0 l 冲洗腹腔 ,洗出液经 1 5 0 0 r 离心 l om i n ,
用 p H 7 . 2 磷酸盐缓冲液 (P B )S 冲洗两次 , 台
盼兰排除染色 ,存活率 > 95 % 。 并用 PBS 调
至所需浓度 。
L 3 调理酵母多糖 : 用生理盐水将酵母多糖
(
z帅 o s a n A , S i g m a 公司 )制成 Z om g /m l , 沸
水煮 3 o m i n 后 , 加自体血清 ( 1 : 5 稀释 )覆
盖 , 在 37 ℃恒 温 震 荡 水浴 中孵 育 30 m in ,
3 0 0 o r 离心 , 去上清液 , 用 P B S 洗两次 , 用
p H 7
.
2 P BS 调至所需浓度 , 置一 70 ℃冰箱中
保存 。
1
.
4 P M N 化学发光的测定 : 采用 l u m in o l
发光体系 , hi m in ol ( 3一氨基邻 苯二 甲酞麟 ,
M e r e k 公司 )先用二 甲基亚矾 ( D M SO )溶解 ,
配成 l x 10 一 3m ol / L , 4 ℃保存 。 参考李益新方
法 〔 , ’在 iB o br i-t 1 2 5 o 发光仪上测定 ,设置温
度 3 7℃ , 将 PM N 调至 1 x 1 0 , /m l , 分别与
P h B 溶 液 ( 1 0 0 % , 5 0 % , 2 5% , o ) 5仁l 孵育
l o m i n 后 ,加入调理酵母多糖 0 . Zm l ( 2 . s m g /
m l 终浓度 ) ,观察 l o m in 内的发光 曲线的变
化 。
1
.
5 P M N 产生 H ZO Z 的测定 : 参考 P ie k 方
法 〔2〕 。 辣根过氧化物酶 ( H o r s e r a d i s h p e r o x -
id e
,
H R P O )贮存液 : H R P O (上海生化所 ) 用
p H 7
. 。 的磷酸钾缓冲液配成 : 浓度为 8 5 u0 /
rn l
。
酚红贮存液 : 酚红 1 0 9 /m l 溶于双蒸水
中 ,浓度为 0 . o 2 8m o l / L 。
P R S 缓冲液 : 组成为工作液 ( m m ol / L ) :
一
A dd
r e s s : L i P in g
,
L a b
o r a t o r y o f P
a t h
o lo g y a n d P h y
s i o l
o g y
,
eB iji n g M
u n i e i p a l I n s t i t u t e o f T
r a
d i t i
o n a l
C h i n e s e M
e
d i
e i n e
,
eB ij n g
.
2 8 4
.
Na CI 1 4 0
, 磷酸钾缓冲液 1 0 , 葡萄糖 5 . 5 )
.9 s ml
,
H R P O 贮存液 。 . l m l , 酚 红贮 存液
0
.
l m l
。
H
2
0
: 标准品经 K M n O ; 滴定法检测 .
P M N 产生 H ZO : 的 测 定 : 将 P M N 用
P R S 调至 2 X 10 了 /血 , 分别 加于 试管中各
l ml
, 同时加 P h B ( 1 0 0% , 5 0% , 12 . 5% , o )各
5讨 ,再加入调理酵母多糖 (4 om g /m l ) 2印 l ,
在 37 ℃恒温水浴中孵育 3 0m i n , 然后 3 0 0 0r
离心 ,取上清 , 加 i om l / L N a O H 1 0拌l 终止反
应 ,在 7 21 分光光度计上测定 , 入一 6 10 n m 。
1
.
6 不同浓度的调理酵母多糖对 P M N 产
生 H : O , 的影响 : P M N 用 P R S 缓冲液调至 2
X l少 /ml ,每管各 l m l , 分别加调理的酵母糖
( 1 0
,
2 0
,
3 0
,
4 0
,
5
0rn
g /m l ) 2 0拌 l , 在 3 7℃水浴
中孵 育 3 o m i n , 离 心 取 上 清 , 加 l m ol / L
N a O H 1 0拜l 终止反应 ,在 7 2 1 分光光度计上
测定 , 入= 6 l o n m 。
2 结果
2
.
1 P h B 对活化 P M N 化学发光的影响 : 以
P h B 原液为 10 % , 依次观察 50 % , 25 %及不
加 P h B ( o )对调理酵母多糖 ( Zo m g /m l ) 活化
P M N 化学发光的影响 , 实验重复 3 次 ,结果
趋势相 同 , 直线 回归分析 , r 一 0 . 9 8 3 , 尸 <
0
.
0 5
,各组曲线见图 1 。
{料侣 ,
. lI万 l必 I _ _
25 匆
浓度 C (% )
7 5 10 0
困 2 P h B对活化 PM N 产生 H 2 0 : 的影响
H
Z
O
Z的影响 : 分别考察 1 0 , 2 0 , 3 0 , 4 0 , 5伽rn g /
m l 调理酵母多糖对 P M N 产生 H ZO : 的影
响 ,结果见图 3 , 在 10 一 4m0 g /m l 间 , 线性关
系良好 。
4
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浓度 C ( m创` 》
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图 1 不同浓度 P kB 对活化 P M N 化学发光的影响
2
.
2 P h B对调理酵母多糖激活的 P M N 产
生 H ZO Z的影响 : 以 4 0m g /m l调理酵母多糖
激活 PM N , P h B 浓度分 别为 10 0% , 5 0% ,
1 2
.
5%
,
0 ,抑制曲线见图 2 。
2
.
3 不同浓度调理酵母多糖对 P M N 产生
《中草药 ) 1 9 9 6 年第 2 7 卷第 5 期
图 3 不同浓度调理醉母多抽
对 P M N 产生 R 20 : 的影响
3 讨论
P M N 是机体防御感染 的第一道屏障 ,
在炎症过程 中 ,多种刺激剂可引起 P M N 激
活 , 产 生呼 吸爆炸 , 形成多种氧 自由基 , 如
o 『 , H : 0 2 , `0 2 及 · o H 等 ,其酶反应机制除
N A D P H 酶及髓过氧化物酶 ( M P O )外 , 还涉
及脂氧合酶和环氧合酶对氧化产物花生四烯
酸进行氧化 〔3〕 。 活性氧从激发态以光量子辐
射形式返回到稳态 ,这一过程伴随着化学发
光现象 (’] 。 活性氧 的产生 , 可促进白细胞趋
化 ,游走 ,导致溶酶体破裂 ,血管通透性增高 。
因此抗炎药物机理中抑制 P M N 的激活也是
十分重要的〔5〕 。
P hB 是锦灯笼的主要成分 , 常用于上呼
吸道感染性疾病 。 细菌学检查 P h B 对大肠杆
2 8 5
菌 、 金黄色葡萄球菌 、溶血性链球菌无明显抑
制作用 , 因此需对其抗炎机理进行深入探讨 。
本实验用调理酵母多糖激活 P M N , P h B
不仅能抑制活化 P M N 的化学发光 , 而且减
少 H : 0 : 的产生 , 并有剂量依赖性关系 。 因此
推侧 P hB 的抗炎作用可能是抑制了 P M N 活
化时氧自由基的产生 , 其作用环节仍需进一
步探讨 。
参 考 文 献
李益新 .等 . 上海免疫学杂志 , 1 9 8 5 , 5 ( l ) : 2 5
P i e k E
, e t a l
.
J L m m u M e t h
, 1 9 8 0 ( 3 )
:
16 1
aB d we y J A
, e t a l
.
J 压 oc h e m , 1 9 8 1 , 2 5 6 : 1 2 6 4 0
A l l e n R C
, e t a l
.
iB oc h e m iB o P h” R es C劝m m u n , 1 97 2 ,
4 7 : 6 7 9
W
e is s
ma
n G
, e t a l
.
r厅u , , 1 9 8 7 , 3 3 ( S u pp l ) : 2 8
( 1 9 9 5
一 0 3一 0 6 收稿 )
E f f ec t of P h y
s a l i n B o n C卜e m i l u m 五n es ce n e e an d H 2 0 2 P r o d u e t i o n o f
A e t i v a t ed P
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u k co yt
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L i P i n g
,
S h e n g X u n
,
W
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E f fe e t o f o p s o n iez d
z y m o s a n o n 卯 l y l l l o r p h o n u e le a r l e u kco yt e ( P M N ) w e r e s t u d ie d b y e h e m il u面ne s e e n e e
( C L ) a n d h y d r o g e n 伴 r o x id e ( H ZO Z ) a s s a y s . R e s u l t s s h o w e d t h a t d if fe r e n t e o n e e n t r a t io n s o f P h y s a l in B ( P h B )
p r e s e n t e d
a
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o s e戒 e伴 n d e n t in h ib it iv e e f fe e t o n C L a n d H 20 2 p r do u e t io n o f a e t iv a t e d P M N . I t s u既e s t e d t h a t
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一
in fl a m m a t o r y a e t io n o f P h B m a y be
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u e t i o n a n d
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e a l b y P M N
.
伸筋草注射液的制备及其对
大鼠实验性矽肺的疗效△
铁道部第二工程局职业病防治院 (成都 6 10 1 0 1) 贫立中 . 黄泽华 王惠茄
摘 要 将伸筋草提取液分别用超池法和水醉法制成注射液 ,分组对染尘大鼠腹腔注射给药 5
周 ,解剖后测定各组大鼠肺的鲜重 、 干重 、胶原含量和病理分级等指标 ,结果表明 . 用超滤法制备的
注射液预防性治疗给药对大鼠实验性矽肺有较好疗效 , 而用水醉法制备的注射液疗效不佳 。 还对
伸筋草的抗矽有效成分进行了探讨 。
关锐词 伸筋草注射液 矽肺 超滤
伸筋草为石松科植物石松 (与 c oP do 勿 m
少口户on -ct u m T h u n b . ) 和垂穗石松 P a l人i n 入a e a
c e o u a ( L
.
) A
.
F r a n e o e t V a s 。
. 等的干燥全
草 〔` ’ 2〕 。 我们在药筛工作中发现伸筋草的酸水
提取液腹腔注射对大鼠实验性矽肺有较好疗
效 ,为了能逐步应用于临床 ,采用不同的制剂
方法 ,将其制成注射液并进行了预防性治疗
给药的动物疗效实验 。
1 注射液的制备
制剂所用的伸筋草购 自本地医药公司 ,
经鉴定为垂穗石松 ,并经成都市药品检验所
检验所证 。 将药材先后用 10 倍量和 8 倍量的
0
.
1% H C I 浸泡过夜 , 倾出浸 泡液 ,过滤后浓
缩至约 20 0 % (即含生药 2 9 /m l ) ,冰箱中放置
帝
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r e s s :
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s e a s e s P r e v e n t io n
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r e a t m e n t C e n r r e
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e S e e o n d E n g i n e r in g
现在铁道部第二工程局中心医院药剂科
2 8 6
·
△铁道部 “ 八五 ” 重点卫生科研课题