全 文 ：广 西 植 物 Guihaia　Nov．２０１４,３４(６):８７４－８７８　　　　　　　　　　 http://journal．gxzw．gxib．cn　
DOI:１０．３９６９/j．issn．１０００Ｇ３１４２．２０１４．０６．０２５
付传明,江海涛,黄宁珍,等．桂黔吊石苣苔的组织培养与快速繁殖[J]．广西植物,２０１４,３４(６):８７４－８７８
FuCM,JiangHT,HuangNZ,etal．TissuecultureandrapidpropagationofLysionotusaeschynanthoides[J]．Guihaia,２０１４,３４(６):８７４－８７８
桂黔吊石苣苔的组织培养与快速繁殖
付传明１,江海涛２,黄宁珍１∗,唐凤鸾１,盘　波１,冼康华１,赵志国１
(１． 广西壮族自治区中 国 科 学 院 广西植物研究所,广西 桂林５４１００６;２．广西国有维都林场,广西 来宾５４６１００)
摘　要:以桂黔吊石苣苔的茎段和叶片为外植体材料,对桂黔吊石苣苔进行离体培养与快速繁殖技术研究.
结果表明:桂黔吊石苣苔茎段腋芽可直接诱导萌发,在 MS＋６ＧBA１．０mg􀅰LＧ１＋IBA０．１mg􀅰LＧ１培养基上萌
发率最高,达７５％;适宜的继代增殖及壮苗培养基为１/２MS＋NAA０．２mg􀅰LＧ１,繁殖系数为６．０/６０d,继代培
养中茎段外植体可以诱导出愈伤组织,但诱导率较低,未能进一步分化成苗;最佳生根培养基为１/２MS＋６Ｇ
BA０．２mg􀅰LＧ１＋NAA０．８mg􀅰LＧ１＋AC０．１％＋香蕉５％,生根率达１００％;在大棚中模拟桂黔吊石苣苔自
然生境对生根苗进行移栽,成活率在９５％以上.
关键词:桂黔吊石苣苔;组织培养;快速繁殖
中图分类号:Q９４５．５　　文献标识码:A　　文章编号:１０００Ｇ３１４２(２０１４)０６Ｇ０８７４Ｇ０５
Tissuecultureandrapidpropagationof
Lysionotusaeschynanthoides
FUChuanＧMing１,JIANGHaiＧTao２,HUANGNingＧZhen１∗,
TANGFengＧLuan１,PANBo１,XIANKangＧHua１,ZHAOZhiＧGuo１
(１．GuangxiInstituteofBotany,GuangxiZhuangAutonomousRegionandtheChineseAcademyofSciences,Guilin
５４１００６,China;２．GuangxiWeidouForestCentre,Laibin５４６１００,China)
Abstract:TissuecultureandrapidpropagationtechniqueofLysionotusaeschynanthoideswerestudied．Theresults
showedthattheaxilarybudsofLysionotusaeschynanthoidescoulddirectlygerminateinMS＋６ＧBA１．０mg􀅰LＧ１＋
IBA０．１mg􀅰LＧ１andthegerminationratewas７５％．TheprimaryculturemediumforbudinductionfromstemsegＧ
mentswasMS＋６ＧBA１．０mg􀅰LＧ１＋IBA０．１mg􀅰LＧ１．Thesubculturemediumforbudmultiplicationandseedlings
growingwas１/２MS＋NAA０．２mg􀅰LＧ１,andproliferationcoeficientwas６．０/６０d．Caluscouldbeinducted
throughthepedicelsexplantsinsubculturebutcouldnotdevelopfurther．Theoptimalrootingmediumwas１/２MS
＋BA０．２mg􀅰LＧ１＋NAA０．８mg􀅰LＧ１＋AC０．１％＋５％bananajuice,androotingratewas１００％．TherootingplaＧ
ntletsweretransplantedingreenhousethatsimulatedthenaturalgrowingenvironmentofL．aeschynanthoids,the
survivalratewasmorethan９５％．
Keywords:Lysionotusaeschynanthoides;tissueculture;rapidpropagation
　　桂黔吊石苣苔(Lysionotusaeschynanthoides)
为苦苣苔科吊石苣苔属多年生小灌木或亚灌木植
物,茎高１m.分布于广西省西部(靖西、上林、河
池、田林)、云南省东南部(麻栗坡)和贵州省西南部
(兴义).生于海拔６００~１２００m的山地林中、灌丛
中石上或溪边石上(李振宇等,２００４;韦毅刚,２０１０).
收稿日期:２０１３Ｇ１０Ｇ１４　　修回日期:２０１３Ｇ１２Ｇ１８
基金项目:广西科技攻关项目(０９９２００３BＧ３１);国家自然科学基金(３１１６００５５).
作者简介:付传明(１９８０Ｇ),男,湖北公安县人,副研究员,从事植物生物技术与保育研究,(EＧmail)４７０１９６４２２＠qq．com.
∗通讯作者:黄宁珍,研究员,从事植物生物技术与保育研究,(EＧmail)huangnz＠gxib．cn.
苦苣苔科植物含有黄酮类、苯乙醇类、醌类、萜类等
多类化学活性物质,具有显著的抑菌、抗炎、抗病毒、
止咳、祛痰、平喘及抗蛇毒等功效,多数种类为民间
常用草药,是分离新的活性成分和寻求新型先导化
合物的良好材料(郑晓珂等２００３).桂黔吊石苣苔
为吊石苣苔属植物,石吊兰素(nevadensin)是该属
植物吊石苣苔(L．pauciflorus)中的主要成分之
一,具有抗结核菌、止咳、祛痰、平喘、消炎、降压及清
除自由基等作用(王绍云等,２００７;冯卫生等,２００７;
盛卫国等,２００９),是传统的中药.桂黔吊石苣苔、齿
叶吊石苣苔(L．serratus)等同属植物常作为吊石苣
苔的替代品入药.由于这些植物生境特殊,分布区
域十分狭窄,加上目前仅有利用而无保育措施,资源
已趋濒危(韦毅刚,２０１０).因此,对该科植物进行组
织培养与快速繁殖技术研究,获得大量的种苗和植
物材料,是对该物种资源进行开发应用和保护的有
效手段.
在我国２０多种吊石苣苔属植物中,已进行组织
培养研究的仅有两三种(刘伟等,２０１０;黄宁珍等,
２０１０;Luetal．,２００６),桂黔吊石苣苔的组织培养和
快速繁殖技术研究未见报道.因此,本研究以叶片
和茎段为外植体,建立桂黔吊石苣苔组织培养及快
速繁殖技术体系,为该物种的大规模繁殖、保护及可
持续开发利用奠定实验和技术基础,同时也为同属
其它物种的组织培养研究提供借鉴和参考.
１　材料与方法
１．１材料及外植体灭菌
供试材料桂黔吊石苣苔(LysionotusaeschynＧ
anthoides)原生于广西大明山,引种于广西植物研
究所华南苦苣苔科植物种质保存圃.实验以桂黔吊
石苣苔茎段和叶片为外植体材料,用自来水将外植
体材料清洗干净后,在超净工作台上用７０％酒精浸
泡３０~６０s,０．１％ HgCl２消毒３~５min,无菌水漂
洗５次,滤干表面水分后,将茎段剪成含１个腋芽、
长２cm左右的节段,叶片剪成大小１cm×１cm的
小块.
１．２初代诱导
将带有腋芽的茎段接入到初代培养基:(１)MS
＋６ＧBA０．１mg􀅰LＧ１＋IBA０．０１mg􀅰LＧ１;(２)MS＋
６ＧBA０．５mg􀅰LＧ１＋IBA０．０５mg􀅰LＧ１;(３)MS＋６Ｇ
BA１．０mg􀅰LＧ１＋IBA０．１mg􀅰LＧ１上.每种培养
基３０管,每管接种一个外植体,定期进行观测,于培
养３０~４０d后,记录出芽率、愈伤诱导率及芽苗的
生长情况,筛选出最佳初代诱导培养基.
１．３继代增殖
将初代培养获得的无菌小芽切下,转接至不同
的继代增殖培养基上,继代增殖培养基设定为 MS、
６ＧBA(０．１、０．５、１．０、２．０ 和 ３．０)mg􀅰LＧ１和IBA
(０．０１、０．０５、０．１、０．２和０．３)mg􀅰LＧ１组合.每种培
基养接种１０瓶、每瓶５株,定期进行观测,培养４０~
５０d后,记录并统计芽苗高度、粗壮度、叶形态、愈
伤诱导率及分化率、长根率、苗的繁殖系数 (繁殖系
数＝１株芽苗经过一次继代所获得的有效芽苗的数
量).最后根据繁殖系数和芽苗的粗壮度,筛选出最
佳继代增殖培养基.
１．４生根与移栽
当继代增殖的芽苗长出２~３片叶、高２~４cm
时,将芽苗剪下,转接在不同的生根培养基中,每种
培养基接种１０瓶、每瓶３~４株,每周观测１次.培
养５０d后,统计苗高度、粗壮度、叶形态、愈伤产率、
生根率、根的数量和形态.根据生根率和苗的粗壮
度,筛选出壮苗和生根培养基.待植株生长健壮,根
系发达后,参照桂黔吊石苣苔原生地的生态环境,在
大棚中进行炼苗移栽,６０d后统计成活率.
２　结果与分析
２．１外植体的选择
桂黔吊石苣苔原生长在桂东南大山的沟谷中,
喜荫蔽湿润的环境,引种栽培对气候条件要求较高.
我们在对其他苦苣苔科植物进行组织培养时,通常
以叶片或幼嫩茎段为外植体材料,本实验中,桂黔吊
石苣苔叶片外植体在培养２周后,全部死亡;而以茎
段为外植体,在初代培养基上,腋芽能逐渐萌发伸
长,可继续用于下一步的培养.因此,选择茎段为外
植体比较好.
２．２初代培养
茎段外植体在不同初代培养基上的培养结果不
同(表１).在 MS＋６ＧBA１．０mg􀅰LＧ１＋IBA０．１
mg􀅰LＧ１培养基上,培养２０d时腋芽开始萌动,４０d
时形成长０．５~１．０cm、具２~３片叶的芽苗,每个外
植体形成２．５个芽,继续培养新长的叶片便从叶尖
开始发黄,并逐渐凋落;在培养基 MS＋６ＧBA０．５
mg􀅰LＧ１＋IBA０．０５mg􀅰LＧ１和MS＋６ＧBA０．１
５７８６期　　　　　　　　　　　付传明等:桂黔吊石苣苔的组织培养与快速繁殖
表１　不同培养基对桂黔吊石苣苔初代诱导的影响
Table１　EffectsofdifferentmediaonprimarybudsinducingofLysionotusaeschynanthoides
初代诱导培养基 (mg􀅰LＧ１)
Primaryculturedmedium
出芽所需的
培养时间 (d)
Culturedtime
forbudding
愈伤诱导率 (％)
Calusinduction
rate
出芽率 (％)
Buddingrate
每块外植体出芽数
Inducedbud
numberofeach
explant
培养情况
Cultivationsituation
MS＋６ＧBA１．０＋IBA０．１ ２３ ０ ７５ ２．５ 出芽快,培养后期落叶
Buddingquickly,butwithering
inlaterperiodofculture
MS＋６ＧBA０．５＋IBA０．０５ ４５ ０ ３４ ２．０ 腋芽萌动慢
Axilarybudsproutingslowly
MS＋６ＧBA０．１＋IBA０．０１ ５２ ０ ２７ ２．０ 腋芽萌动慢
Axilarybudsproutingslowly
mg􀅰LＧ１＋IBA０．０１mg􀅰LＧ１上,培养４０d以上时
才有部分腋芽开始萌动,且生长较缓慢.多次优化
试验发现,桂黔吊石苣苔在培养基 MS＋６ＧBA１．０
mg􀅰LＧ１＋IBA０．１mg􀅰LＧ１上培养３０d左右,将新
长出的芽苗及时转接到新的继代增殖培养基上,可
取得较好的培养效果.
２．３继代增殖培养
桂黔吊石苣苔在不同培养基培养(表２)结果表
明,当６ＧBA和IBA浓度分别为０．１和０．０１mg􀅰LＧ１
时,形成丛生芽,叶子中等偏小,培养６０d时的繁殖
系数约为５．０,总体生长情况相对最好;当６ＧBA浓
度大于０．５mg􀅰LＧ１时,培养材料虽也形成丛生芽,
但繁殖系数小于４．０,叶退化变小,而且退化程度随
着６ＧBA浓度的增加而加重,培养材料的整体生长
较差.桂黔吊石苣苔离体茎段在不同培养基上的愈
伤组织诱导率均较低,且未见分化.此外,我们还以
MS为基本培养基,分别以 KT (０．１、０．２、０．４、０．８
mg􀅰LＧ１)和ZT(０．１、０．２、０．４、０．８mg􀅰LＧ１)代替６Ｇ
BA进行培养,结果发现培养材料均不能正常生长.
２．４壮苗与生根培养
壮苗和生根培养６０d时(表３)结果发现,植株
明显长高,叶子舒展变大、形态较好,其中以１/２MS
＋NAA０．２mg􀅰LＧ１和１/２MS＋NAA０．２mg􀅰LＧ１
＋AC０．１％＋香蕉５％培养基上的培养材料繁殖最
表２　不同培养基对桂黔吊石苣苔继代增殖的影响
Table２　EffectsofdifferentmediaonsubcultureproliferationofLysionotusaeschynanthoides
继代增殖培养基
Subculturemedium
(mg􀅰LＧ１)
丛生芽
Multiplebud
繁殖系数
Propagation
coefficient
叶片情况
Leafsituation
愈伤诱导率
CalusinducＧ
tionrate
(％)
愈伤分化率
CalusdifferenＧ
tiationrate
(％)
生根率
Rooting
rate(％)
总体情况
General
observation
MS 不生长
Nogrowing
１．０ 落叶
Withering
０ ０ ０ 极差
Verypoor
MS＋６ＧBA０．１＋IBA０．０１ 生长
Growing
５．０ 中等偏小
Smalerthanmoderate
９．１ ０ ３６．０ 中等
Moderate
MS＋６ＧBA０．５＋IBA０．０５ 生长
Growing
４．０ 叶小退化
Smalanddegenerating
２０．３ ０ ０ 差
Poor
MS＋６ＧBA１．０＋IBA０．１ 生长
Growing
４．０ 叶小退化
Smalanddegenerating
２３．２ ０ ０ 差
Poor
MS＋６ＧBA２．０＋IBA０．２ 生长
Growing
３．７ 叶小退化
Smalanddegenerating
３０．１ ０ ０ 差
Poor
MS＋６ＧBA３．０＋IBA０．３ 生长
Growing
３．５ 叶小退化
Smalanddegenerating
２４．３ ０ ０ 差
Poor
快,培养６０d时繁殖系数为６．０,植株粗壮度中等,
可作为继代增殖和壮苗培养.在培养基１/２MS＋
NAA０．８mg􀅰LＧ１＋AC０．１％＋香蕉５％、１/２MS
＋NAA１．０mg􀅰LＧ１＋AC０．１％＋香蕉５％、１/２
MS＋IBA１．０mg􀅰LＧ１＋AC０．１％＋香蕉５％和１/
２MS＋６ＧBA０．２＋NAA０．８＋AC０．１％＋香蕉５％
上,植株生根率均达１００％,植株高度和粗壮度较为
理想.综合比较,选用１/２MS＋NAA０．２mg􀅰LＧ１
为继代增殖和壮苗培养基、１/２MS＋６ＧBA０．２＋
NAA０．８＋AC０．１％＋香蕉５％为生根培养基.
２．５炼苗和移栽
当生根的试管苗长至４~５cm高,根系发达时,
打开瓶盖炼苗２d,洗净根际培养基,用５００倍多菌
灵溶液浸１min后,浅栽在下铺一层厚３~４cm的
６７８ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３４卷
表３　不同培养基对桂黔吊石苣苔壮苗与生根培养的影响
Table３　EffectsofdifferentmediaongrowingandrootingofL．aeschynanthoides
壮苗与生根培养基 (mg􀅰LＧ１)
Mediumforstrongseedlingandrooting
繁殖系数
Propagation
coefficient
株高
Plant
height(cm)
粗壮度
Strong
level
叶片形态
Leafshape
生根率
Rooting
rate(％)
根多少
Howmany
roots
综合评价
Comprehensive
assessment
１/２MS＋NAA０．２ ６．０ ４．０ 中等
Moderate
正常
Normal
５０．０ 少
Less
优
Excelent
１/２MS＋NAA０．６ ５．０ ２．５ 纤细
Slender
正常
Normal
７０．０ 少
Less
一般
Common
１/２MS＋NAA０．２＋AC０．１％＋ 香蕉５％ ６．０ ４．０ 中等
Moderate
正常
Normal
８０．０ 中等
Moderate
优
Excelent
１/２MS＋NAA０．４＋AC０．１％ ＋香蕉５％ ３．５ ４．０ 中等
Moderate
正常
Normal
１００．０ 多
Many
良
Fine
１/２MS＋NAA０．６＋AC０．１％＋香蕉５％ ４．５ ４．０ 中等
Moderate
正常
Normal
１００．０ 多
Many
良
Fine
１/２MS＋NAA０．８＋AC０．１％＋香蕉５％ ４．５ ４．５ 粗壮
Strong
正常
Normal
１００．０ 多
Many
优
Excelent
１/２MS＋NAA１．０＋AC０．１％＋香蕉５％ ４．５ ４．０ 粗壮
Strong
正常
Normal
１００．０ 多
Many
优
Excelent
１/２MS＋IBA０．２＋AC０．１％＋香蕉５％ ３．５ ３．０ 中等
Moderate
正常
Normal
７０．０ 中等
Moderate
良
Fine
１/２MS＋IBA０．４＋AC０．１％＋香蕉５％ ３．５ ４．０ 中等
Moderate
正常
Normal
１００．０ 过多
Toomany
良
Fine
１/２MS＋IBA０．６＋AC０．１％＋香蕉５％ ４．５ ４．０ 中等
Moderate
正常
Normal
１００．０ 多
Many
良
Fine
１/２MS＋IBA０．８＋AC０．１％＋香蕉５％ ３．５ ４．５ 粗壮
Strong
正常
Normal
１００．０ 过多
Toomany
良
Fine
１/２BMS＋IBA１．０＋AC０．１％＋香蕉５％ ４．５ ４．５ 粗壮
Strong
正常
Normal
１００．０ 多
Many
优
Excelent
１/２MS＋６ＧBA０．２＋NAA０．８＋AC０．１％＋香蕉５％ ５．５ ４．０ 粗壮
Strong
正常
Normal
１００．０ 多
Many
优
Excelent
石灰岩碎石、上盖一层厚２cm的腐质土的苗床上,
根据天气情况定期浇水,保持苗床湿度,一年四季均
可移栽,移栽６０d后统计,成活率在９５％以上.
３　讨论
植物组织培养是植物种苗快速繁育的有效技术
手段,在继代增殖过程中增殖系数高低是决定种苗
数量和整个技术能否成功产业化应用的关键.而植
物生长调节剂特别是细胞分裂素的合理使用是继代
增殖过程中有效提高种苗数量和质量的关键因素,
不同植物对细胞分裂素的需求和耐受能力不同.我
们对桂黔吊石苣苔同属植物多齿吊石苣苔(L．denＧ
ticulosus)进行组织培养时发现,其继代增殖所用的
细胞分裂素为６ＧBA１．０mg􀅰LＧ１(黄宁珍等,２０１０).
对于同属另一植物吊石苣苔,刘伟等(２０１０)所筛选
出的最佳继代增殖培养基为 MS＋６ＧBA３．０mg􀅰
LＧ１＋NAA０．１mg􀅰LＧ１;与多齿吊石苣苔和吊石苣
苔不同,本研究中,在继代增殖阶段,桂黔吊石苣苔
更适合在不含细胞分裂素的培养基中生长,当加入
０．５mg􀅰LＧ１的６ＧBA时,其叶子退化变小,茎节缩短
不能长高,出现典型的玻璃化症状;当６ＧBA浓度小
于０．５mg􀅰LＧ１,培养效果也不够理想;用其它细胞
分裂素代替６ＧBA,培养效果更差.只有将材料接种
在不含细胞分裂素、只含生长素(NAA)的培养基
中,才获得比较理想的结果.可见,不同的物种,即
使是亲缘关系比较接近的同属种,其组织培养和快
速繁殖技术都可能存在比较大的差异.
在开展广西地不容(Stephaniekwangsiensis)
(黄宁珍等,２００７)、续随子(Euphorbialathyris)(付
传明等,２０１２)等的组培快繁研究中发现,多次的继
代培养会造成激素(特别是细胞分裂素)在培养材料
中累积,易导致培养材料的玻璃化和体细胞变异,使
得继代增殖培养效果不佳,与本研究有相似之处.
因此,针对那些组培快繁中激素累积效应明显的物
种,须调整不同培养阶段的激素质量浓度,可采取逐
代降低甚至不添加激素的办法,尽可能避免激素累
积造成的负面影响,获得理想的结果.本研究结果
７７８６期　　　　　　　　　　　付传明等:桂黔吊石苣苔的组织培养与快速繁殖
图１　桂黔吊石苣苔组培快繁的主要过程　 A．继代;B．丛生芽;C,D．壮苗和生根;E．移栽.
Fig．１　MainprocessoftissuecultureandrapidproliferationofL．aeschynanthoides　A．Subculture;
B．Clusterbuds;C,D．Seedlinggrowingandrooting;E．Transplantedplantlets．
可为桂黔吊石苣苔的保护和开发利用提供基础和技
术支撑.
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８７８ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３４卷