全 文 ：广西植物Guihaia32(6)：774—780 2012年11月
漆树漆酶割漆季节活性变化及同工酶研究
邵 杨，晁 菲，魏朔南。，胡正海
(西北大学生命科学院，西安710069)
摘 要：采用分光光度法、SD孓PAGE电泳及等电聚焦电泳法分析了陕西平利县高八尺和大红袍2个品种漆
树漆酶的活性变化规律及同工酶组成。结果表明：漆酶的活性在割漆季节中呈现6～7月下降，7～9月上升，
并且高八尺漆酶的活性高于大红袍漆酶活性；确定漆酶的分子量为110kDa；分离得到4种漆酶同工酶组成，
而这4种同工酶组成在两个品种中存在差异，可以作为漆树品种鉴定的生化指标。
关键词：漆树；漆酶；活性；同工酶
中图分类号：Q946．5文献标识码：A 文章编号：1000一3142(2012)06一0774一07
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VarlatlonS0tlaCCaSeCtlVltVandlSOZVnleS0t’JDXZCD一
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SHAOYang，CHAOFei，WEIShu0-Nan’，HUZheng-Hai
(CoZZ曙P。，Li^Sci跏c已s，No疗^缸肼￡洲L臃tPHi缈，xi’an710069 China)
AbstI?act：Itwasuccessfultoresearchont eva“ationsof1accasectivityandisozymesoftwo了bzifodP行d，．0行讪?rwif一
川““m5species．BarkleyvarietieswhichwereGaobachiandDahongpaoinPin91iCountyofShaan妇Pmvincewerean—
alyzedbyspectrophotometry，SD孓PAGEandisoelectrofocusingelectrophoresis．Ther ultsrevealedlaccaseacti、，ity
declinedfromJunetoJuly，thenrosefromJunetoSeptemberandthelaccasectivityinGaobachiwashigherthanDa—
hongpaoattappingseason．Molecularw ightwas110kDa．InT．w埘ici∥““m．thereweremorethanfourisozymes
whichweredifferentb tweentwova“etiesanditcouldbeabiochemistryindextoappraiseFt肥瑚ici∥““mbarkley
varieties．
Keywords：T．w埘id∥““m；1accase；acti访ty；isozyme
漆树(TbzifodP扎dro卵口Pr卵io厂f““m)是漆树科
(Anacardiaceae)漆属(Tozi∞d鲫dr彻)重要经济树
种，在我国大部分省(区)均有分布。生漆是漆树次
生代谢产物，为优良的天然涂料，具有抗腐蚀、防潮、
耐高温、防水等优点，在我国已有6900多年的应用
历史(甘景镐，1992；兰仲克，1996)。生漆主要由漆
酚、漆酶、树胶质和水组成，其中催化生漆干燥成膜
的重要物质是生漆中所含的漆酶(袁筱昆，1984)。
漆酶是一种多酚氧化酶，催化活性中心是铜，它能催
化多酚、多胺基苯等底物氧化(雷福厚等，2003)。漆
酶在漆酚的聚合(袁筱昆，1984)、纸浆去木质素(魏
华丽等，2004)、高等植物病菌防御(Alfred等，2002)
等方面都有重要作用，广泛用于食品工业(曹治云
等，2004)、生物脱色(朱启忠等，2009)以及废水处理
(魏华丽等，2004)等领域。
生漆采割一般在6～9月进行，在此割漆季节中
不同采割时间所割生漆质量有所不同，一般认为7
月、8月所割生漆质量最好。生漆质量的好坏主要
表现在漆酚含量和干燥成膜性能的高低。而导致生
漆干燥成膜性能差异的原因目前认为主要是由于漆
收稿日期：2012一03—13修回日期：2012—06一08
基金项目：国家自然科学基金(30870136)[supporttedbytheNationalNaturalScienceF0undationofchina(30870136)]
作者简介：邵杨(1984一)，女，硕士．从事植物学研究工作，(E—mail)shaoyang．sylp@yahoo．com．cn。
’通讯作者：魏朔南，男，教授，从事植物资源学研究工作，(Email)wsn0505@nwu．edu．cn。
万方数据
6期 邵杨等：漆树漆酶割漆季节活性变化及同工酶研究 775
酚含量(魏朔南等，2009)、漆酶活性(袁筱昆，1984)
等。生漆中存在着结构不同但功能相同的酶(万云
洋，等2003，韦建学等，2000)，但它们之间活性存在
差异。割漆季节中漆酶活性以及同工酶组成是否存
在变化，从而导致生漆干燥成膜性能变化尚无研究
报道。为此，本研究以陕西平利县漆树品种高八尺、
大红袍为对象，应用等电聚焦法对其割漆季节所产
生漆液中的同工酶组成进行分离，并测定各酶带的
等电点，建立漆酶同工酶等电聚焦分析方法，同时比
较测定2个品种生漆中漆酶活性以及割漆季节中不
同割漆时间所获漆液中漆酶活性差异，其结果对深
人研究天然多酚氧化酶同工酶组成及其活性变化规
律具有理论意义，而且对于鉴别漆树品种以及指导
生漆的科学应用也具有现实意义。
1 材料和方法
1．1材料
以陕西省平利县漆树品种高八尺、大红袍为研
究对象，于2010年6～9月割漆季节中每个月采集
一次生漆，选择割龄为3年的漆树，采用“V”形割口
采集漆树主干部位漆液，共采集4个月份的生漆样
本(表1)。样品在4。C保存。其中，大红袍样品在9
月份只采集到1株，其余各株在九月份均已不流漆。
北京市六一仪器厂DYCP一378等电聚焦多用途
电泳仪，DYY一12C电脑三恒多用电泳仪电源，Wn
9412A型恒温循环器，Wn9406胶片观察仪，美国
Bedford公司Milli—Q超纯水仪，德国Eppendorf
5804R冰冻离心机，DL一180超声波提取仪，SHB_III
循环水式多用真空泵。40％pH3—10载体两性电解
质(GE)，丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、过硫酸铵、四甲
基乙二胺、p巯基乙醇、考马斯亮蓝R_250(Ameres—
co)，亲水硅烷和疏水硅烷(北京鼎国试剂公司)，甘氨
酸、十二烷基磺酸钠、丙酮为国产分析纯。
1．2方法
1．2．1漆酶粉末的提取参照Bengt(1970)的方法
进行。秤取1g漆酶丙酮粉末溶解于20mL4℃双
蒸水中，将上述滤液按1：1的比例加入4℃冰丙酮
后经冷冻离心机离心(4℃，10000r／min，10min)，
弃去上清液，沉淀冷冻干燥。取干燥后的沉淀，加入
超纯水制成5％的溶液备用。
1．2．2漆酶活性测定采用分光光度法(周易勇，
1989)，以2×10。3mol／L对苯二胺为底物，在比色皿
中加入1．5mL对苯二胺、1．45mL纯水及o．05
mL的酶液，以1．5mL纯水、1．5mL对苯二胺作对
照液测定吸光值。根据25℃490nm处漆酶催化
底物反应产生对苯醌的光吸收特征的变化值来测定
酶的活性。以每分钟吸光值增加o．001所需要的酶
量作为一个活力单位。漆酶活性按下式计算：
漆酶活性一(5min时的光密度一1min的光密
度)／(t5一t1)／毫克酶
将漆酶溶液与样品缓冲液按2：1的比例互溶，
沸水浴5min后上样进行漆酶的SDS—PAGE电泳。
分离胶浓度为12．5％，考马斯亮蓝R一250染色，经
脱色后观察拍照。
表1样品采集地和采集时间
Table1 Geographicloca“tiesandtimeof
thepopulationsinthi tudy
1．2．3漆酶同工酶分析参考郭晓君(2005)的方
法，预置凝胶厚度为O．5mm，凝胶浓度为7．5％，交
联度3％。预电泳30min后各上样8“L，1300V
电泳，待电流降至2mA后停止。整个电泳过程循
环水保持在5℃。用对苯二胺作为底物进行活性染
色，25℃处保温5min，用水漂洗后观察。
1．2．4漆酶等电点的测定电泳结束后，将未加样
一侧的凝胶从阳极端每隔2cm切段，加入2mL双蒸
水4℃密封保存48h后测量各段的pH值，以胶长为
横坐标，pH值为纵坐标绘制曲线，通过酶带在凝胶中
的位置找出对应的pH值即该酶带的等电点。
2 结果与分析
2．1割漆季节中高八尺与大红袍漆酶活性变化规律
采用分光光度法测定6～9月漆酶活性结果见
图1。由于其中一株高八尺漆树(G10)和五株大红
袍漆树(D6、7、8、9、10)采集到的漆液量太少，漆液
自行氧化干燥而没有得到漆酶丙酮粉末。另外G7、
G8、G9以及D2、D3、D4、D5七个样品在9月份由于
漆树割后不流漆液，故未采到漆液。
分析高八尺割漆季节漆酶活性变化可知，6～9
万方数据
776 广西植物 32卷
一喜
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60
50
40
30
20
10
O
样品sampIe
图1 高八尺和大红袍漆酶活性变化
Fig．1VariationsoflaccasectivitywithGaobachiandDahongpao
6 7 8 9 10
月份Month
图2高八尺与大红袍漆酶平均活性变化
F毽2Variationsofeverage1accasectivity
withGaobachiandDahongpao
月漆酶活性表现出上下波动的趋势。除G4和G9
两个样品外，均呈现出先下降后上升的规律，即6～
7月漆酶活性下降，7～9月漆酶活性逐渐上升，其中
活性最大值出现在6月和9月，最小值出现在7月
(图1：A)。
观察大红袍割漆季节漆酶活性变化发现，在割
漆季节中漆酶活性同样存在上下波动的现象，除D3
样品外，其余样品表现出与高八尺漆酶相似的规律，
即6～7月漆酶活性下降，7～8月漆酶活性上升，其
最小值也出现在7月(图1：B)。
比较高八尺与大红袍漆树漆酶割漆季节平均漆
酶活性，其结果见图2。高八尺漆酶活性总体高于
大红袍漆酶活性。高八尺漆酶平均活性最高值达
52．3U／mg，最低值为28．8U／mg，而大红袍漆酶活
性最高值为31．5U／mg，最低值仅20．3U／mg。虽
然大红袍漆酶平均活性小于高八尺漆酶平均活性，但
是两者在割漆季节中平均漆酶活性随时间的变化趋
kDaM 1 2 3 4 5 6 7 8
1 70
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图3 高八尺和大红袍漆酶SDS-PAGE电泳
Fig．3LaccaseofGaobachiandDahongpao
bvSD孓PAGEelectroDhoresis
1—4分别为高八尺6～9月的漆酶液样品；5—8分别为
大红袍6～9月的漆酶液样品。箭头所指的位置即为漆酶蛋白。
1—4arethesamplesofGaobachilaccase；5—8arethesamples
ofD口^o以g声口。缸cc口sP；arrow‘pointstopr teinoflaccase．
势却极为相似，即从6～7月下降，而7～9月上升，
平均最高值出现在9月，平均最低值出现在7月。
2．2漆酶分子量确定
SD孓PAGE结果显示，经初步纯化后的漆酶液
中漆酶分子量水平(图3)。经Gel—ProAnalyzer
4．5分析凝胶成像图可知，漆酶分子量为110kDa。
此外，在28、30kDa处出现两条清晰的条带，该条带
在所有样品中都存在，推测可能是漆酶以外的含氮
物。而特殊的是1号(6月高八尺)样品在38kDa
出现一个清晰条带，该条带在其余样品中缺失。
2．3漆酶同工酶测定
分析2个漆树品种漆酶氧化酶同工酶谱可知，
高八尺：大红袍两个漆树品种6～9月漆酶同工酶经
等电聚焦分离后所有样品均出现了1～4条染色较
钙∞弱∞弱加佰伯0
0∞∞∞砷∞∞∞∞如∞0
万方数据
6期 邵杨等：漆树漆酶割漆季节活性变化及同工酶研究 777
深，图像清晰、位置稳定的4条酶带(E、F和H除
外)(图4)。
2．3．1Gel—ProAnalyzer4．5分析高八尺漆树1、2
中6月和9月的1—4各条酶带颜色均较深，而7月
和8月1～4各条酶带的颜色相对于6月和9月则
较浅。表征高八尺漆树漆酶各条同工酶带活性在整
三200
o1 OO
刨
豫
羽
0
个割漆季节中存在差异，其中6月和9月各条酶带
酶活性普遍高于7月和8月。这与前述所测漆酶活
性的变化规律中6月和9月活性较高相一致。由高
八尺1、2的所有同工酶条带的数量和颜色显示，在6
～9月的4个月中均较为稳定，只有条带1明显显现
出6～7月份颜色变浅，而8～9月又开始加深(图5)。
ii垒曼警⋯睾墨警誊基曼
A B C D E F G H J K
迦：坐：垒坚!吵t、———一．——_=二——，，
“八Kl(jaobachil
Jun． JuJ Aug．SeD
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迅坐．全竺翌j、-———————、，——二——J
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图4 漆酶同工酶谱 右侧箭头表示上样他点。左侧箭头1．4分别农示4个小Itl】的酶带。
IsozymesoflaccaseRightarrowpointstopositionofsamplesadded．1eftarrows(1—4)pointtodiverselaccasestra田
0O10020O30040O50060O70080O90
MolWelghtnRf
00．10020030O40050O60070O800．90
MoIWeightnRf
图5高八尺中6～9月酶带比较a．d．表示6～9月酶带。
Fig．5C‘)mparison诵the zymebeltsfromJunetosepternperinGaobachi扣dpointtoIaccasestrapsfmmJunetoSept唧per
2．3．2大红袍漆酶同工酶分析图6结果显示，除8
月以外，其余6、7和9月只得到条带2、3和4，条带
1没有显示，表明该酶带缺失。此外，在条带2、3和
4中，条带4的颜色在6月和7月相对较浅，表明相
对于条带2和3，该条带在这个时期的酶活性较低。
比较6月、7月条带2、3和4的颜色可以看出，6月
条带2、3和4的颜色更浅，表明该时期的酶活性更
低(图4)。8月大红袍同工酶各条带结果与高八尺
相似，也具有1～4条清晰的、染色明显的条带，与其
他月份的条带相比较，它不仅条带颜色深于其它月
份，而且明显多出条带1，这显示8月漆树大红袍品
种的漆酶活性相对高于6月、7月和9月。
2．3．3 比较高八尺与大红袍2个品种的1～4各漆
酶同工酶谱带可见(图7)，其谱带位置在凝胶中相
同，表明这些酶带具有相同或相近的等电点，即高八
尺与大红袍有着基本相同的同工酶。比较二者同工
酶谱带各条带的颜色可见，大红袍漆酶同工酶条带
除8月份与高八尺漆酶同工酶条带相似外，其余6
月、7月和9月的条带无论是条带数量还是条带颜
色与高八尺条带都相差较大。
2．4等电点测定
2．4．1用酸度计测定装有凝胶片段的双蒸水溶液，
距凝胶正极1、3、5、7、9、11cm处的pH值分别为
2．95、4．49、5．67、6．55、7．91、9．43。以胶长为横坐
O
O
0
加
伯
。％u|山n|Sso』9世帐∞
万方数据
778 广 西植物 32卷
标，pH值为纵坐标绘制pH一胶长线性关系图，结果
见图8，线性方程为了一O．622z+2．4347，r—
o．9942，线性关系良好。
2．4．2根据同工酶谱中1～4酶带的位置，对应图
8得出各酶带的等电点列于表2。由表2可见，依据
各酶带的位置可知漆酶同工酶等电点大多位于中性
或偏碱位置。这与文献中报道漆酶提取时需在
pH6．8的磷酸盐缓冲液中相一致。
3 结论与讨论
3．1割漆季节漆酶活性变化特点
漆酶活性在不同温度下会呈现出不同的变化。
万云洋等(2003)在研究漆酶的活性时发现，所纯化
出的两种漆酶同工酶Ll和L2，L1活性随着温度的
；200
耋100
趔
根
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0a100．20O．30O40a50O．60O．70Q800．90
Mol，||IfeightnRf
Oa100200．30O40Q50a600．70O80090
MoJ．Weight；nRf
升高而降低，而L2活性几乎不变。表明在不同温
度下漆酶的活性会呈现出不同的变化，而这种变化
并不是随着温度的升高而呈正相关。本研究以单品
三200
o
占{OO
谶
恨
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o
古100
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泳道8一untitled (1／{)
O0．10 ，20O，30O．加0．50O，600．700．80o’90
MoIWeightnRf
图6大红袍中6～9月酶带比较
Fig．6Comparisonwithe zymebeltsin
DahongpaofromJunetoSeptemper
O0．100200．300．400．500．60 7}。O80090
MolWeightnRf
图7 高八尺和大红袍漆酶6～9月酶带比较A—D．6、7、8和9月酶带。
Fig．7Comparisonwithe zymebeltsfromJunetoSeptemperinGaobachiandDahongpao
A—D．pointtolaccasest地psfromJunetoS印temper．
种单株漆树的生漆为样品，通过对割漆季节不同月
份漆酶活性变化研究表明，在整个割漆季节中，平均
漆酶活性6～7月呈现下降趋势，而7～9月又会逐
渐上升，平均漆酶活性在6月和9月最高，7月最
低。对此我们推测可能与气候及温度有相关。在整
个割漆季节中以7月和8月气温较高，而在此高温
情况下漆酶同工酶之问活性出现变化，即同工酶之
间活性存在有高有低，从而影响整个漆酶活性。这
也解释了为什么在7月生漆产量高的时候，漆的燥
性却不好，原因之一可能是漆酶的活性较低。
漆酶活性与其抑制因子也有一定的相关性，
K+、Zn2+等离子对漆酶有激活作用，而Ag+、Fe”、
Na+、Mg抖、Cu2．、Mn2+等对漆酶活性却有一定的
抑制作用。另外，高浓度的底物(o．1～1．om l／L
邻苯二酚)将对真菌漆酶活性产生不利的影响，甚至
漆树树皮的丙酮提取物即可抑制漆酶的活性(周易
勇，1992)。对此有解释认为天然酶中活性位点之间
存在某种配合作用，当底物浓度上升到某一限度以
∞
∞
o
●￡
1
Q磊uI§|s∞o占世戤珀
万方数据
6期 邵杨等：漆树漆酶割漆季节活性变化及同工酶研究 779
上时即产生抑制作用(甘景镐，1992)。生漆的主要
成分为漆酚，在研究漆树割漆季节所产生漆中漆酚
含量变化时发现，6～9月割漆季节中漆酚含量呈现
上下波动现象，其中6月和9月为两个低谷期(魏朔
南等，2009)。比较本研究中割漆季节漆酶活性变化
结果可以看出，当漆酶活性(6月和9月)出现高峰
时正是漆酚含量的低谷期，似乎表明漆酶活性的高
低与底物漆酚含量的多少有相关性。但本研究显示
出高八尺、大红袍漆树漆酶活性在割漆季节出现的
变化是由气温变化引起还是由底物漆酚含量抑制因
子引起，还是二者共同引起的尚不能确定。
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
胶长GeIIength(cm)
图8 pH一胶长线性关系
Fig．8RelationshipofpHandthelengthofgel
表2漆酶各酶带等电点
Table2 1soelectricpQintofeachlaccasestrap
，
酶带
．． 距正极距亭， 、 pH
LaccasestraD Distancetoanode(cm)
P‘
3．2不同品种间漆树漆酶活性的差异
韦建学等(2003)的研究发现，漆酶同工酶I最
适温度在46～50℃之间，而漆酶同工酶Ⅱ的最适温
度在35℃左右，表明不同漆酶同工酶活性最适温度
存在差异。分析高八尺在6～9月得到4条清晰的
酶带中，只有条带1在6～9月变化最大，表现出与
割漆月份变化密切相关。在7月颜色最浅，表明酶
带1在7月份活性最低，8～9月逐渐加深，以6月
和9月颜色最深，表明在6月和9月活性最高。其
余3条酶带颜色深浅变化不大，表明其活性与割漆
月份的变化相关不大。因此，由同工酶带颜色深浅
变化可见，不同漆酶同工酶存在着最适温度变化的
现象，而这种最适温度变化主要体现在条带1。由
于条带1同工酶的活性随割漆月份变化的特性，导
致高八尺漆树漆酶在整个割漆季节中活性的变化，
即当6月和9月都存在4条同工酶带时，其漆酶活
性最高。此结果与漆酶活性测定结果6月和9月最
高相一致。由此表明，在整个割漆季节中，漆酶活性
的变化与第一条同工酶带活性变化密切相关，即同
工酶带1对整体漆酶的活性在割漆季节中的变化规
律起主要作用。由大红袍各同工酶谱带的有无和颜
色深浅变化可见与高八尺不同，其6月各条带颜色
最浅，7～9月各条带颜色先变深后变浅，8月达到最
深。而条带1则出现在8月并颜色最深，表明在大
红袍漆酶同工酶中，酶带1在8月活性最高，这意味
着包括条带1在内的大红袍漆树各同工酶可能与高
八尺的有所不同。比较高八尺漆酶与大红袍漆酶同
工酶谱可见各条带位置几乎相同，但各条带颜色存
在差异。高八尺漆酶条带颜色明显深于大红袍漆酶
条带，显示出高八尺漆酶活性在同一月份中要高于
大红袍，这与前述漆酶活性测定结果高八尺漆酶平
均活性高于大红袍漆酶相一致。探讨其原因，大红
袍漆树为同源三倍体漆树(尚宗燕等，1989)，而高八
尺漆树为正常二倍体漆树。多倍体植物不仅在外部
形态、生理状态以及次生代谢物含量上与二倍体植
物有区别(王安虎，2009)，而且在同工酶的组成与二
倍体植物也有不同(赵钢等，1994)。对三倍体大红
袍漆树的研究显示，其在外部形态、内部结构以及遗
传基础等方面均与二倍体漆树存在差异，因此染色
体倍性的变化可能是造成漆酶活性差异的主要原因
(赵喜萍等，2007)。黄群策等(2009)采用秋水仙素
对水稻种子进行倍性处理后，发现其种子内蛋白质
亚基的类型没有出现新的变异，而蛋白质亚基的表
达量则发生了明显的变化。大红袍漆酶同工酶条带
数量及染色深浅变化是否表明在大红袍漆树中由于
染色体倍数的变化，导致转录产物RNA发生变化，
与二倍体漆树相比，其翻译产物漆酶蛋白在种类和
数量上表现出一定的差异还有待于进一步研究。
3．3漆酶同工酶谱在漆树品种鉴定中的意义
同工酶是分子水平的指标，按照一个基因编码
一个同工酶亚基的理论，可从同工酶的表现型变异
直接推测其基因型的变异，显然优于某些形态学的
指标，后者往往是多个基因型的综合表现型，因此，
同工酶作为遗传标志已广泛用于遗传分析的研究，
具有分析方便、灵敏度高等特点，已成功用于农作物
O
9
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7
6
5
4
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工△
万方数据
780 广 西植 物 32卷
品种鉴定研究，并开始用于作物育种优势杂交组合
的测定(王镜岩等，2002)。郑晓鹰等(1997)在对大
白菜品种同工酶的遗传多样性研究中指出，如果能
将每种酶的多样性位点放在一起分析而不是单独分
析一个同工酶，每一个品种至少有一个位点与其他
品种不同，由此就可以对所有测试品种进行鉴别，并
认为这种图谱可以作为每一个品种的指纹，成为鉴
定种质资源的有效手段。由高八尺和大红袍漆酶同
工酶谱可见，高八尺漆酶同工酶在品种内无论是条
带的数目、位置还是条带染色的深浅程度都具有稳
定性；而比较大红袍与高八尺漆酶同工酶谱可见，它
们不仅条带的数目与后者有明显区别，而且条带颜
色的深浅程度与高八尺漆酶同工酶也有明显区别。
冈此，漆树漆酶同工酶分析可作为鉴别漆树不同品
种的重要方法之一。
3．4等电聚焦技术及其在漆酶同工酶中的应用
等电聚焦(Isoelectrofocusing)是利用蛋白质或
其他两性分子等电点的不同，在稳定、连续、线性
pH梯度中进行蛋白质的分离和分析，其分离的关
键条件是具有稳定的、连续的以及线性的pH梯度
(郭晓君，2005)。在以往的研究中，曾采用HPLC
法(万云洋等，2003)、非变性凝胶电泳法(韩君莉等，
2008)、柱层析法(韦建学等，2000)等方法进行漆酶
同工酶分离，均得到1～2条漆酶同工酶。本研究采
用等电聚焦技术，将凝胶厚度调整为o．5mm进行
薄层等电聚焦，对割漆季节中单株漆树个体不同月
份的漆酶样品进行同工酶分离，共分离出4条清晰
酶带，达到了很好的分离效果。其结果不存在漆树
个体之间生漆的混合，更准确地反映漆树漆酶的活
性变化及其同工酶组成。本结果与其他方法相比，
显示出等电聚焦技术分离漆酶同工酶能获得更多酶
带，而且分辨率高，具有条带清晰、染色明显．、用时
短、低消耗等优点。
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万方数据
752 广 西 植 物 32卷
宽约2．6mm，卵状舟形，前部舟状，先端急尖，常向
下弯，中下部呈红色，基部凹陷呈囊状，囊高3～3．5
mm，内面无毛；蕊柱粗短，长约1．5mm；花药卵状
心形，先端急尖；花粉团黄色，2对，长约1．5mm；蕊
喙短，长约1mm，先端浅2裂。花期7～8月。
原记录产我国台湾省中部与北部，生长于海拔
2000～3000m的高山林下阴湿处苔藓丛中
(Chung，2002)。模式标本采自台北。本种发现于
我国西藏波密县岗乡自然保护区，生于海拔2950
m的高山林下倒木苔藓丛中。
本种曾被处理为高山斑叶兰(G．mnrgi咒盘￡n
Lindl．)的异名(田怀珍，2008)，而经笔者考察西藏
波密县岗乡的南湖斑叶兰，对比于田怀珍拍摄于云
南省维西县的高山斑叶兰的花期照片及花部解剖照
片，认为南湖斑叶兰的叶片较高山斑叶兰小，中脉更
为清晰而侧脉不甚明显，同时花序梗短，花萼片无毛
而不同，所以之前的处理值得再次商榷。此外胡超
考察四川省峨眉山时发现了非常类似于南湖斑叶兰
的植株，但其个体甚小，因为没有开花所以不能完全
肯定为本种。
研究标本：中国，西藏，波密县岗乡自然保护
区，2950m，2011年7月14日，95。33’56．56”E，29。
51’30．74”N，B．J．GeGBJ00889(CSH)；台湾：高雄
县，三零二六山庄到关山，3300m，2004年9月25
日，P．F。Lu8712(TAIF)；花莲县，小奇莱，2700
m，2005年8月21日，121。17E，24。087N，P．F．Lu
10323(TAIF)；台中县，南湖大山南峰至中央尖溪山
屋，2300～3500m，2005年7月7日，S．W．Chung
7837(TAIF)；南投县，奇莱主山，3200～ 00m，
2005年3月10日，121019’E，24。04’N，S．W．
Chung7682(TAIF)；台中县，七卡山庄至三六九山
庄，2006年8月20日，S．W．Chung8352(TAIF)；
台中县，七卡山庄至三六九山庄，2700～2800m，
2006年8月20日，S．W．Chung8383(TAIF)；新竹
县，塔克金溪，2900～3100m，2008年8月6日，S．
W．Chung9278(TAIF)。
致谢 感谢台湾林业试验所标本馆的陈建文先
生提供的标本扫描图片，感谢浙江农林大学的叶喜
阳、浙江大学的刘军、上海辰山植物园的魏宇昆博士
在标本采集过程中提供的帮助。
参考文献：
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万方数据
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作者单位： 西北大学生命科学院,西安,710069
刊名： 广西植物
英文刊名： Guihaia
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引用本文格式：邵杨.晁菲.魏朔南.胡正海.SHAO Yang.CHAO Fei.WEI Shuo-Nan.HU Zheng-Hai 漆树漆酶割漆季节活性变化及同
工酶研究[期刊论文]-广西植物 2012(6)