全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 30(6)：891— 894 2O10年 11月
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同 效液相色谱法测定罗汉果
根中两个降三萜配糖体
卢凤来 ，卢艺芳 一，陈换莹1．2，刘金磊 ，李典鹏1
(1． r
中
-
广西植物研究所 ，广西 桂林 541006；2．广西师范大学 ，广西 桂林 541004)
摘 要 ：建立了高效液相色谱测定罗汉果根中两个结构新颖的降三萜糖苷 ，罗汉果酸苷7_~I(Siraitic acid IB)和
罗汉果酸苷甲l~(Siraitic acid IA)含量的方法。色谱条件：色谱柱：ZORBAX 8B-C18柱(4．6 mm×150 mm，5 tLm)；
柱温 ：25℃；流动相：乙腈一水(梯度洗脱：O一4 rain：35％乙腈 ；4—16 rain：35 一45 乙腈)；流速：0．5 mL／rain；检
测波长：230 nrn；进样量 ：10 L。结果表明，罗汉果酸苷乙Ⅱ在 0．O5～O．3 mg／mL，罗汉果酸苷甲Ⅱ在 0．O5～O．25
rag／mL之间线性关系 良好 。该方法稳定，精密度、重现性好 ，且样品处理简单，提取与检测时间短。
关键词：罗汉果酸苷乙 Ⅱ；罗汉果酸苷 甲Ⅱ；HPLC；测定
中图分类号 ：Q946．83 文献标识码 ：A 文章编号：1000—3142(2O1O)O6一O891一O4
Determination of two nor-triterpenoid glycosides in
the roots of Siraitia grosvenorii by HPLC method
LU Feng-LaiI，LU Yi-Fang1，2，CHEN Huan-Ying1，2，
LIU Jin-LeiI，LI Dian-Peng1
(1．GuangxiInstitute ofBotany，GuangxiZhuangAutonomousRegion aM theChineseAcademy
ofSciences，Guilin 541006，China；2．Gangxi Normal University，Guilin 541004，China)
Abstract：A HPLC method was developed for determining the contents of Siraitic acid IIg and Siraitic acid lA，which
were novel 29一norcucurbitane triterepene glycosides in the roots of Siraitia grosvenorii．The chromatographic analysis
was carried out on a Z0RBAX SB-Q8 column(4．6 mm~150 rnIn，5 m)，and the mobile phase was acetonitrile(A)一wa—
ter(gradient elution：O— 4 min：O—}35％A，4— 16 rain：35％— 45％A)．The flow rate was maintained at 0．5 rnI rain．
The detection wavelength was set at 230 nnl，and the column temperature was controlled at Z5℃．The sample injection
volume was 10 The results indicated that Siraitic acid liB had a linear relationship at the range of 0．05-0．3 rag／
mL，and Siraitic acid HA had a linear relationship at the range of 0．O5—0．25 mg／mL．This method was accurate，stable
and reproducible，while the preparation of samples was simple and detected time was short．
Key words：Siraitic acid IB；Siraitic acid 1IA；HPLC；detemination
罗汉果(Siraitia grosvenorii)是我 国特有的经
济、药用植物(国家药典委员会 ，2O05)。其植株根系
发达，块根肥大，原料资源极为丰富。罗汉果根味
苦 、性微寒 ，具有清热祛湿 、通络止痛之功效，是广西
收稿 日期：2010-01-12 修回日期 ：2010—05—21
基金项 目：中科院“西部之光”人才培养计划专项(科发人教字[2009]24号)；药用资源化学与药物分子工程教育部重点实验室资助(桂科能
07109001—13)；广西植物研究所基本业务费(桂科植 1003)[Supported by West Light Doctoral Foundation of the Chinese Academy of Sciences(2009)
Key Laboratory for the Chemistry and Molecular Engineering of M edicinal Resources(Guangxi Normal University)，Ministry of Education of China
(07109001—13)；Fundamental Research Fund of Guangxi Institute of Botany(1003)]
作者简介：卢凤来(1979一)，女(壮族)，广西来宾人 ，硕士，主要从事植物资源开发与利用研究，(E-mail)Iufenglai@gxib．en。
通讯作者(Author for corresp0ndence，E—mail：ldp@gxib．cn)
892 广 西 植 物 3O卷
桂林永福等地的一种习用药材，民问常用于治疗咳
嗽、咽炎、风湿性关节炎及抗肿瘤等。然而，由于缺
乏深人系统的理论研究，罗汉果根的原料资源现阶
段仍未得到有效的开发利用。在产区，罗汉果块根
大量废弃，造成了自然资源极大的浪费。
国内学者王雪芬等从罗汉果根 乙醇提取物的乙
酸乙酯部位已分离出了一些结构特别的葫芦烷降三
萜类化合物，即罗汉呆酸 甲、乙、丙、丁、戊 (王雪芬
等，1996，1998；斯建勇等，1999)。初步药理实验发
现罗汉果 酸乙在体 外有 抗肿 瘤 活性 (斯建 勇等，
1999)。为了开发利用罗汉果根资源 ，我们对罗汉果
根的水提取物进行抗肿瘤筛选 ，发现它在体内外对
多种瘤谱均有较强的抗癌活性，体外细胞试验发现
其活性成分可能是水溶性较好的植物配糖体。通过
对罗汉果根的水溶性部分化学成分研究 ，我们首次
分离得到结构新颖的降三萜酸糖苷罗汉果酸苷乙Ⅱ
(Siraitic acidⅡB)和罗汉果酸苷甲 Ⅱ(Siraitic acid
ⅡA)(Li等，2009)。本文建立高效液相色谱法测定
罗汉果根原料 中这两个化合物的含量，为罗汉果根
标准提取物的开发提供可靠的含量分析方法。
1 材料与仪器、试剂
材料 ：罗汉果块根采 自桂林市永福 ，挖出后洗净
泥土 ，切成薄片，阴干 ，再在烘箱内低温干燥，碾碎过
筛并干燥保存备用。仪器：Agilent一11OO分析型高
效液相色谱仪，包括二极管阵列多波长检测器
(DAD)、四元梯度泵、在线真空脱气机、7725i手动
图 1 罗汉果酸苷乙Ⅱ和罗汉果酸苷甲Ⅱ的化学结构
Fig．1 Structures of Siraitic acidⅡB and Siraitic acid ⅡA
进样 器、HP化 学 工 作 站 (美 国 Agilent公 司)。
BS110g赛多利斯电子天平(北京赛多利斯天平有
限公司)；B3500S—MT超声清洗器(必能信超声有限
公司)。标准品与试剂 ：罗汉果酸苷乙Ⅱ和罗汉果酸
苷甲 Ⅱ由本实验小组从罗汉果根中分离获得 ，化学
结构如图 1，所有的化合物均有严格的光谱学鉴定
数据 ，并 经 HPLC法 测 定得 出质 量分 数 分 别 为
99．1 、98．9％；乙腈 为色谱纯(美国 TEDIA公 司)；
重蒸蒸馏水为自制，其他试剂均为 AR级 。
2 色谱条件
色谱 柱：ZORBAX SB—Ci8柱 (4．6 mm× 15O
miTt，5肛m)；柱温 ：25℃；流动相 ：乙腈一水 (梯度洗
脱 ：0— 4 min：35 乙腈 ；4— 16 rain：35 — 45 乙
腈)；检测时间：l6 min；流速 ：0．5 mL／min；检测波
长：230 nm；进样量 ：lO L。此条件下检测得到的
典型色谱图见图 2。
3 试验方法与结果
3．1对照品溶液制备
分别精密称取罗汉果酸苷 乙Ⅱ和罗汉果酸苷 甲Ⅱ
各 10．0 mg，各置 1O mL容量瓶 中，加 甲醇溶解并稀
释至刻度，超声使其充分混匀，即得标准品储备液。
3．2供试品溶液制备
精密称定罗汉果根粉末 5．0 g，置于 100 mL具
塞锥形瓶中，精密加入 甲醇溶液 25 mL，摇匀 ，超声
提取 1 h，过滤，滤渣再重复超声提取一次，合并滤
液 ，减压回收甲醇至浸膏状。甲醇溶解浸膏并定容
至 10 mL容量瓶 中，摇匀，过 0．45 m微孔滤膜后
即得样品测试液。
3．3检测波长的选择
对 200~400 nrn扫描的各波长下 的色谱 图进
行分析比较 ，发现 230 nrl处各峰的分离良好 ，且基
线比较平稳 ，两个对照品在此波长下有最大吸收(图
6期 卢凤来等：高效液相色谱法测定罗汉果根中两个降三萜配糖体 893
B
1
L ～ ～，J＼一—己～
1 O
图 2 对照品(A)及样品(B)的 HPLC图 1．罗汉果酸苷乙Ⅱ；2．罗汉果酸苷甲1I。
Fig．2 HI LC chronlatograms of reference standards(A)and sample(B) 1．Siraitic acid 1I B；2．Siraitic acid I A．
一
一 一 ’
～
～
i
图 3 罗汉果酸苷乙 Ⅱ和罗汉果酸苷
甲 Ⅱ在 HPLC中的 3D图
Fig．3 3 D chromatograms of Siraitlc
acid I B and Siraitic acid I A
表 1 不同提取方法对罗汉果酸苷乙Ⅱ
和罗汉果酸苷 甲Ⅱ的提取效果
Table 1 Extractive effect of Siraitic acidⅡB and
Siraitic acid 1 A by different extraction methods
提取方法
Extration
methods
3)，因此选择 230 nm作为检测波长。
3．4提取方法及提取溶剂量的考察
比较了 1()()mL甲醇加热 回流 3 h，重复两次，
15O mL甲醇索氏提取 9 h，1OO mL甲醇超声提取 2
h三种提取方法的提取效果(表 1)。结果表明，超声
提取方便快捷 ，消耗溶剂 少，故选 之作 为提取方法 。
按 3．2方法 ，比较甲醇 、5O 甲醇 、8O％甲醇 、乙醇四
种提取液超声提取的效果，结果表明，甲醇的提取效
果最好。另外 比较 甲醇超声提取罗汉果根粉末 0．5
h、1 h、2 h的提取效果，结果表明，l h后即可把罗
汉果酸苷乙 Ⅱ和罗汉果酸苷甲Ⅱ提取完全。最后分
别比较 5O mL、75 mL、100 mL甲醇溶液作为供试
品制备提取溶液的提取效果 ，结果表明，75 mL甲醇
溶液已经提取完全 。因此确定提取方法为 75 mL
甲醇超声提取 1 h。
3．5标准 曲线的绘制
将罗汉果酸苷乙Ⅱ的标准品储备液稀释为 0．05、
0．10、0．20、0．25、0．30 mg／mL的浓度系列 ，罗汉果酸
苷 甲Ⅱ的标准品储备液稀释为 0．05、0．10、0．15、0．20、
0．25 mg／mL的浓度系列 ，分别进样 1O L，按上述色
谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标 ，标准品浓度
(mg／mL)为横坐标做标准曲线 ，计算得罗汉果酸苷乙
Ⅱ的 回归方 程为 Y一 17494z+56．806，相关 系 r一
0．9999，罗汉果酸苷甲Ⅱ的回归方程为 一8701．3z一
0．3625，相关系数 r=0．9996，表明以上两个标准品分
别在 0．05～0．30 mg／mL和 0．05～0．25 mg／mL之
间，呈现良好的线性关系。
3．6精密度实验
精密吸取罗汉果酸苷乙Ⅱ的对照品溶液 1O L，
按上述色谱条件，连续进样 6次，其峰面积分别 为
3548．83、3385．84、3598．91、3481．53、3487．77、
3523．11，计算峰面积的 RSD为 2．O6 (<5 )，说明
精密度 良好。
3．7稳定性实验
取罗汉果根粉末 5．0 g，精密称定 ，按上述方法
制备供试溶液 ，分别于 72 h内不 同时间段检测，记
录峰面积。计算得罗汉果酸苷乙 Ⅱ和罗汉果酸苷 甲
Ⅱ的 RSD分别为 3．7 和 4．6 (<5 9／6)。表明供
试品溶液在 72 h内稳定 。
∞∞∞∞∞∞∞∞0 6 4 2 O 8 6 4 2
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894 广 西 植 物 3O卷
3．8重现性 实验
精密称定罗汉果根粉末 5．0 g共 6份，分别按
3．2项制备 ，3．1项测定 ，记录峰面积 。计算得罗汉
果酸苷 乙 Ⅱ和 罗汉 果 酸苷 甲 Ⅱ的 RSD 分 别 为
2．6 和 2．2 (<5 )，说明其重现性 良好。
3．9加样回收实验
取已知含量的罗汉果根 4份，精密称定 ，分别加
入罗汉果酸苷乙 Ⅱ和罗汉果 酸苷 甲 Ⅱ标准品适量，
按上述方法制备及检测 ，计算回收率 ，结果见表 2。
表 2 罗汉果酸苷乙 Ⅱ与罗汉果酸苷甲Ⅱ的加样回收率
Table 2 Recoveries of Siraitic acid
ⅡB and Siraitic acid ⅡA
表 3 样品测定结果
Table 3 The results of sample determination
编号 罗汉果酸苷乙Ⅱ 罗汉果酸苷甲Ⅱ
No． Siraitie acid I B(％) Siraitie acid 1I A(V0)
4
平均值
RSD
0．O32
0．031
0．030
0．032
0．030
0．O32
0．031
3．23
0．018
0．020
0．019
0．019
0．019
0．019
0，019
3．82
3．1O样品测定
取罗汉果根粉末 5．0 g共 6份，按上述方法制
备及检测，记录峰面积，按外标法计算样品中罗汉果
酸苷乙 Ⅱ与罗汉果酸苷 甲 Ⅱ的含量，分别为 0．
031 、0．019％(表 3)。
4 结论
随着罗汉果组培苗的推广应用 ，原来经典的罗
汉果压蔓繁殖、种薯繁殖方式已逐渐被淘汰，组培苗
与传统薯苗相比具有种苗不带毒 、繁殖系数高、生长
旺盛 、抗性强等优点 。现阶段 罗汉果 的种殖方式也
由原来的几年一轮作到现在的每年种殖 ，罗汉果组
培苗根系发达，每年收获罗汉果后会 留下大量的根
资源未被利用 。经研究证实罗汉果根尚含有大量对
人体有用的功能性配糖体成分。本研究开发的高效
液相色谱测定方法，精密度好 、重现性好 ，准确度高。
样品处理简单 ，分析快速。可作为罗汉果根中主要
配糖体成分罗汉果酸苷乙Ⅱ与罗汉果酸苷甲Ⅱ含量
的方法，为今后罗汉果根资源的开发利用提供定量
的理论依据 。
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