全 文 ：广 西植物 Gu ih ai a16 ( 3) :28 7一砚9 1 19 6
三七叶试含量测定方法比较
梁小燕 陈海珊 陈秀珍 成桂仁
(广西植物研究夙 桂林 541 以拓)
摘 要 本文报道了采用 ( l )澳加成法 , ( 2) 分光光度比色法侧定三七叶贰含里的方法并对其进行
比较。 结果 ( 1) 法所侧结果 比 ( )z 法高 7 . 1% ~ 19 .7 % , 其标准偏差分别为 .3 26 (% ) 和 .0 90
(% )
。 认为分光光度比色法侧定三七叶贰含盆较佳
关镶词 澳加成法 ; 分光光度比色法 ; 三七叶贰 ; 方法
C O M P A R I T I V E S T U D IE S O N T H E D E T E R h 4 1N A T IO N O F
S A P O N I N S IN P A N A X N O T O G IN S E N G L E A V E S
L ia n g X ia o ay n C h e n H a is h a n C he n X l u hz e n C h e n g G u ir e n
(G四奄x 日如 3 i`t uet of oB t a ny , G u恤 54 1以巧 )
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三七叶贰为从五加科人参属植物三七沙。朋 x on tgo i n se gn a( u k)r E H . C he 川 的茎叶提取的总
贰 , 经化学分析证明主要含人参皂贰 R蚝、 R e 、 R bl 、 七叶胆贰议 、 三七皂贰 cF 、 aF 、 eF 等成
分 , 它们都是以原人参二醇为贰元的系列皂贰 ( ’ 〕 . 对于三七叶贰的含量测定 , 前人已做了不少
工作 , 目前采用较多的有比色法 〔卜 3) 和澳加成法 〔 4 〕两种 . 为了三七叶资源的开发利用 , 作者
对此两种三七叶贰的含量侧定方法进行了比较研究 , 现分述如下 :
1 仪器与药品
三七叶武 本所 自制
人参皂武 R bl 对照品 购自中国药品生物制品检定所 . 编号 703 一名 80 .2
1望场刊M一四 收稿
第一作者简介: 梁小燕, 女 , 1% 2 年出生 助理研究员 , 植化专业 .
2 8 8 广 西 植 物 1 6卷
盐酸 A R , 广东省廉江安铺化工厂 .
氛仿 A R , 广东西陇化工厂 .
甲醉 A R , 广州化学试剂厂 .
香芙兰醛 C R , 广州化学试剂厂 .
高氛酸 A R , 上海桃浦化工厂 .
冰醋酸 A R , 南宁第二化工厂 .
大孔树脂 1 l o D A , 2 01 型 , 上海医药工业研究院南汇树脂厂 .
硫代硫酸钠 A R , 广州化学试剂厂 .
无水碳酸钠 A R , 上海虹光化工厂 .
涣酸钾 C R , 广州化学试剂厂 .
碘化钾 A R , 广州化学试剂厂 .
仅器 岛津 U V 一2 1OA 紫外分光光度计 .
2 澳加成法
2
.
1 溶液配制
硫代硫酸钠液 : 称取硫代硫酸钠 26 9 和无水碳酸钠 0 . 2 9 , 加新沸过的蒸馏水适量溶解 , 然
后配成 1 0 0 m L 溶液 , 摇匀 , 放置半个月备用 (滤过 ) , 标定 .
澳液 : 取澳酸钾 .3 0 9 与澳化钾 巧 g , 加水适量使溶解成 1 00 m L , 摇匀 , 标定 .
碘化钾试液 : 取碘化钾 16 .5 9 , 加水使溶解成 1 00 m L , 即得 。
淀粉指示液 : 取可溶性淀粉 .0 5 9 , 加水 5 m L 搅匀后 , 缓缓倾人 10 m L 沸水中 , 随加随搅
拌 , 继续煮沸 2 m in , 放冷 , 倾取上层清液 , 即得 .
.2 2 样品测定
取三七叶贰样品 0 . 1 9 , 精密称定 , 置 25 0 m L 碘量瓶中 , 加 25 m L 水溶解 , 精密加人澳液
( 0
.
1 mo l/ L ) 5 m L
, 加盐酸 5 m L , 立即避光超声振荡 30 m in (超声时水温保持在 15 ~ 20 ℃ ) ,
取 出 , 立 即加碘化钾试液 5 m L , 放置暗处 15 m in , 加氯仿 Z m L , 用硫代硫酸钠 液 ( 0 . 1
mo l/ L ) 滴定至近终点时 , 加人淀粉指示液 2 m L , 继续滴定至蓝色消失 , 并将滴定的结果用空
白试验校正 , 每 l m L 的硫代硫酸钠液 ( 0 . l m of / L ) 相 当于 26 . 98 m g 的人参皂贰 R姚
( C 53 H 90 劝 〔4 〕 .
3 分光光度比色法
三七叶所含皂贰主要为人参皂贰 , 故可采用树脂吸附加分光光度法 , 以人参皂贰 R b ; 为对
照进行含量测定 .
.3 1 标准溶液的配制
精密称取人参皂贰 R bl 对照品 10 m g , 置于 10 m L 容量瓶 , 用甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 吸 4
m L 至 25 m L 容量瓶 , 用甲醇稀释至刻度 , 浓度为 0 . 16 m g / .L
3
.
2 测定波长的选择
精密吸取上述标准溶液 0 . 5 m L 及同样浓度的三七叶贰样品溶液 .0 5 m L 分别置于具塞磨 口
试管 , 沸水浴中蒸干甲醇 , 加人 5% 香英兰醛冰醋酸溶液 .0 2 m L , 高氯酸 0 . 8 m L , 摇匀 , 密
塞 , 于 60 ℃水浴加热 巧 m in , 取出后用流水冷却 , 再加人冰醋酸 5 m L 摇匀 , 用岛津 U V 一2 10A
3 期 梁小燕等 :三七叶贰含量测定方法比较 2 9 8
型紫外一可见分光光度计于 5 0~ 6 0nm 波长处分别测定其吸收图谱 , 结果在 5 0 n m 波长处均
有最大吸收 , 故选择 550 n m 为测定波长 .
3
.
3 大孔吸附树脂的预处理
大孔吸附树脂使用前 , 先用 8 0% 乙醇浸泡 6 次 , 每次 12 h , 滤净乙醇后 , 用热水漂洗 , 检
查 , 取干树脂 .0 5 9 , 加 80 % 乙醇 5 m L 振摇 , 滤液蒸干不得有残留物 .
3
.
4 装柱
取 .4 5 9 经处理过的大孔树脂 , 以水泡膨胀后倾人小层析柱内 , 俊树脂沉降 , 覆以脱脂棉少
许 , 加中性氧化铝 0 .2 9 , 再添加棉花少许轻压 , 用蒸馏水冲洗 , 并用水浸没备用 .
3
.
5 样品测定
精密称取 10 m g 三七叶贰样品置 50 m L 容量瓶 , 先加甲醇 25 m L , 密塞轻摇 , 并置温水浴
中浸泡 l h , 使皂贰充分溶解 , 冷却后用甲醇稀释至刻度 , 摇匀静置 . 精确吸取 2 m L 上清液至
小蒸发皿内 , 于沸水浴上蒸干甲醇 , 残渣用 2 m L 水溶解 , 加人净化柱 , 俊液面降至棉花层 , 再
取蒸馏水 18 m L 分次洗净上述小蒸发皿 , 加人净化柱中洗柱 , 洗柱水液弃去 , 继用 70 % 乙醇 30
m L 洗脱 , 收集乙醇液于水浴上蒸干 , 残渣用甲醇分次溶人 25 in L 容量瓶 , 加甲醇稀释至刻度
(浓度约 0 . 16 mg / m L ) 摇匀 . 精确吸取此溶液 0
.
5 m L 和人参皂贰 R b ; 对照品的甲醇液 0 . 5
m L
, 分别置于具塞磨 口试管中 , 同时吸 0 . 5 m L 甲醇置另一具塞磨口试管作空白 , 沸水浴中蒸
干甲醇溶液 , 然后加人新配制的 5% 香英兰醛冰醋酸溶液 0 . 2 m L , 高氯酸 0 . 8 m L , 摇匀后密
塞 , 于 60 ℃水浴加热 15 m in , 取出后用流水冷却 , 再加人冰醋酸 5 m L 摇匀 , 用岛津 U V` 2 10A
紫外分光光度计于 5 5 0 n m 波长处测定吸收值 , 通过计算求出百分含量 。
对照品量 x A
样
皂贰含量 (% ) = 一 对样品量 x 10 0
其中: A 样— 样品吸收值 , A 对— 对照品吸收值 ·用此法与澳加成法对照对 10 个批号三七叶贰进行含量测定结果见表 1 .
表 1 两种方法对三七叶试含测结果比较 (% )
批 号方 法— -—9 104 25 9 104 2 8 9 10 5 0 4 9 10 5 10 9 10 520 9 2 10 2 1 9 2 10 2 2 9 2 10 2 3 9 2 1 1 1 5 9 2 1 116澳加成法分光光度比色法 8 5 . 87 7 . 5 9 2 . 9 9 1 . 27 8 . 3 7 6 . 9 8 6 . 3 8 9 . 5 8 6 . 8 9 6 . 07 9一 2 7 6一 5 7 7 . 7 7 6 . 3 8 9 . 5 9 0. 87 7 . 5 7 8一 2将上表数据用统计学方法进行处理 , 求得标准偏差 :S 澳 =S 分 = 公 ’ 一 (众 ) , / 。 = 3 . 2 6 (% )众 ’ 一 (公 ) , / 。 = 0 . 9 0 (% )精密度显著性检甄 F 法 ):澳分Sn澳 = 10n分 = 10 = 3 . 2 6(% )= 0 . 9 0(% )
290 广 西 植 物 1 6卷一 -.一一一一 -一一 - -. - -一F 一 :1 / :几一 :盆/ :卜黔 一 13 . 1查表 :爪 二 n澳一 1 = 9 , 忘 = n「 1 = 9 , 凡 = 3 . 18因 F > 凡 , 故两种方法精密度存在显著性差异 . 作出此判断的置信度为 90 % .两种含侧方法显著性检验 (秩和法 ) :将两种方法的侧定值混合按大小排列 , 次序如下 :
秩 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 1 12 13 14 15 16 17 18 19 加
分光光度法 7 6 . 3 76 . 5 76 . 9 76 . 9 77 . 5 7 . 5 7 . 7 78 . 2 78 ) 79 . 2
澳加成法 85 . 8 8 6 一 3 8 6 . 8 89 . 5 89 . 5 90 . 8 9 1. 2 9 .2 7 9 .2 9 % . 0
分光光度比色法的秩和为 (因 n 澳 = n 分 , 可任选一法的秩和 :)
T = ! +2 +3 十4十.5杨+7 +8 +9 + 10 = 5 5
度收吸查表
, 在 “ = .0 05 , ln = nz = 10 时 ,
T 一= 8 3 , 几 , 1 2 7
T < lT
, 故两种方法之间存在显著性差异 .
气 ` 回收试验
精密称取 105 ℃ 干操至恒重的人参皂
贰 R bl 对照品 25 mg 于 25 m L 容量瓶 ,
甲醉定容 , 精密吸取 4 m L 上清液于小燕
发皿 ; 挥去甲醉 , 用水溶解后上大孔树脂
净化柱 , 先用 20 ID L 水洗 , 水液弃去 ,
继用 7 0% 乙醉 3 0 m L 洗脱 , 收集 乙醉洗
脱液于水浴上燕干 , 残渣用甲醉分次溶人
25 m L 容童瓶并稀释至刻度。 精密吸取此
曰` - - -一鸽一一一一~ ` - ~ 一 对翻
“ 一一一 J . 一~ 一一 J , ~ ~ ~ , , 日` -州一一` - . - 一 三七州
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图 l 吸收度与时间关系
溶液 .0 5 m L 及未过柱的人参皂贰 R bl 对照品的甲醉液 .0 5 m L 按上法比色侧定 . 根据侧定结果
计算回收率为 105 .%0 .
玉 7 显色的德定性
按前比色含盈侧定方法配制溶液 , 显色完毕 , 放置不同时间后侧定吸收值。 结果表明放置
20 ~ 50 m i n 之间 , 对照品、 三七叶贰的吸收度均基本毯定 (图 1 ) .
4 讨 论
( 1) 澳加成法采用三七叶中含量较高的人参皂贰 R可” 作皂贰含量计算标准 , 符合实际 .
而 R b : 与 R b 3 分子结构相近 , 故分光光度比色法采用 R b : 作标准对妞品侧定皂贰含量也切实可
标
( 2) 澳加成法是根据三七叶贰侧链上存在一个烯键 , 通过澳加成反应来侧定三七叶贰含
量 , 有较好的专属性。 本样品经定性检查 , 除三七叶贰外 , 其他主要为糖和多糖类成分 , 也还有
少量黄酮类和叶绿素等含烯键成分的存在 , 这些含烯健成分有可能参与反应 , 因而导致侧试结果
提高。 从表 1 可看出 , 用澳加成法所侧皂贰含量均比分光光度比色法所侧数据高 , 二者相差从
3期 粱小燕等 : 三七叶贰含盈侧定方法比较
7
.
1% 一 1 9. 7% 不等。 显著性检验表明 , 两种方法之间存在显著性差异 , 即存在明显的系统误
差 . 根据侧试结果研究证明 , 分光光度比色法所侧结果比较切合实际 .
( 3 ) 分光光度比色法先用中性氧化铝吸附除去色素黄酮等杂质 , 用大孔树脂吸附总皂贰 ,
水洗去糖和无机盐等水溶性成分 , 去除了杂质千扰 , 侧定结果重现性好 . 用本法显色对皂贰类成
分专属性好 , 用仪器洲定 , 灵敏度商 , 能较客观侧定含童 , 且操作比澳加成法简便。
( 4 ) 根据对 10 批号样品侧试数据的统计学计算结果看 , 分光光度比色法的标准偏差为 .0 90
(% )
, 远远低于澳加成法的 .3 26 (% ) , 两者之间存在显著性差异 。 说明分光光度比色法的侧试
结果精密度较高 , 而后者较差。
致谢 本所仪券纽方宏同志代侧郑分样品 , 在此表示感讹
参 考 文 献
sY . n g ~ “ n ya 绍 et .al O a n ” 团 . n lr 嘴 , 户 . 让. of k巨节 . 的 d 5. 刃 s of 尹口 . x 加`哈加犯心` 月妙盆配触州 , 19 83 , 2双6 ): 147 3~
147 8
章观称 人参的分析n , 人参皂贰的侧定 药学学抵 198 。, 1那:) 175
章观体 人参的化学成分和分析方法研究进屁 药学学抵 198 .0 1那:) 375
中华人民共和国卫生部部硕标准 W S ,田一 147 5 -夕3
吴 明 . 三七茎叶浸青总皂贰的侧忘 中成药研丸 198 8, (2) : 10