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分光光度法评价氧化铝对白花檵木浸膏脱色效果的研究



全 文 :JIANGXI JOURNAL OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE

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􀦋 特约栏目 博士达药业
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白花檵木(Loropetalum chinense Oliv.)为金缕梅
科(Hamamelidaeeae)檵木属(Loropetalv R.Br.)植
物,分布在我国中部、南部、西南等各省,是一种常
见的灌木。近些年来,白花檵木的药用价值愈来愈
受到重视。其根、叶、花、果均可入药,具有清热解
毒、通经活络,止咳,消炎,镇痛,止血等功能;可用
于治疗咳嗽,咯血,痢疾,紫斑病,烧伤,子宫出血,
外伤出血等病症[1]。本实验选取白花檵木叶作为研
究对象,黄酮为其主要有效成分 [2]。本文采取超声
提取法对总黄酮进行提取,以比色法测定含量。以
总黄酮脱色前后的含量为指标,分析活性氧化铝对
檵木浸膏进行脱色后其有效成分的回收率,为白花
檵木有效成分提取提供高质量高纯度的原料。
2 实验部分
2.1 仪器和试剂
分析天平(北京赛多利斯天平有限公司),离心
机(飞鸽牌系列离心机 TGL-16G),UV1102紫外分
光光度计(上海天美科学仪器有限公司),超声波清
洗器(上海天美科学仪器有限公司),六两装高速万
能粉碎机(浙江屹立工贸有限公司 220V,1500W);
芦丁标样(上海市松江区生工生物公司),亚硝酸
钠、硝酸铝、氢氧化钠、石油醚、95%无水乙醇、正丁
醇、乙酸乙酯均为国产分析纯,氧化铝(上海市松江
区生工生物公司),活性炭(上海市松江区生工生物
公司),白花檵木购于江西省宜黄县。
2.2 白花檵木浸膏的制备
将清洗干净的白花檵木嫩叶用粉碎机碾磨成
粉末状,再用乙醇索氏回流提取3次,每次1.5小时,
合并提取液,回收乙醇至无醇味,55℃真空干燥,将
白花檵木叶浸膏制备成2g/1mL的水悬浮液。
2.3 总黄酮的测定
2.3.1 标准样品的制备 精密称取120℃干燥至恒重
的芦丁 25mg,60%乙醇热溶解后冷却并定容至
50mL,得到浓度为0.5mg/mL的芦丁标准液备用。
2.3.2 测定波长的选择 精密量取 1mL芦丁标准液
加 1mL5%亚硝酸钠摇匀后放置 6分钟左右,加
1mL10%硝酸铝摇匀后放置 6 分钟左右,加
5mL1.5mol/L氢氧化钠放置 10分钟,再加 60%乙醇
定容至10mL摇匀,显色10分钟后,进行200-600nm
扫描,在 467nm处有最大吸收,故选择 467nm为测
定波长。
2.3.3 标准曲线的制作 精密量取芦丁标准液 0.4、
0.8、1.2、1.6、2.0mL,参照波长测定中的显色程序操
作,测定各显色液在最大吸收波长下的吸光度值,
以各显色液的吸光度为纵坐标,对应的芦丁浓度为
横坐标,计算芦丁浓度-吸光度直线回归方程。
2.4 白花檵木浸膏的脱色
2.4.1 定性研究 用氧化铝对檵木浸膏脱色做定性
研究,观察氧化铝对檵木浸膏脱色效果。取 10mL
分光光度法评价氧化铝对白花檵木浸膏脱色效果的研
究*
★ 管成** 董德刚 王曼莹*** 裘梁 乔贝贝(江西中医学院生物技术研发中心 南昌 330006)
摘要:目的:探讨氧化铝对白花檵木浸膏的脱色效果。方法:先通过索氏提取法法得到白花檵木浸膏,制备成2g/mL的水悬浮
液,然后用分光光度比色法测定总黄酮含量,考察脱色前后总黄酮含量的变化,计算总黄酮的回收率。结果:氧化铝与2g/mL白
花檵木浸膏水悬浮液质量比为1:1时,脱色效果较为明显,脱色后,总黄酮回收率达到55.01%。结论:氧化铝作为白花檵木浸膏
脱色剂,效果明显,脱色过程中,其主要有效成分总黄酮并没有大量流失。
关键词:白花檵木;总黄酮;分光光度比色法;氧化铝;脱色
中图分类号:R927.2 Q964 文献标识码:A
*基金项目:国家自然科学基金(项目编号:81260604)。
**作者简介:管成,男,河南省信阳市人,硕士研究生,主要从事生物技术研究,Tel:15070967915,E-mail:1468733536@qq.com。
***通讯作者:王曼莹,Tel:0791-87119663,E-mail:wangmy8888@sina.com。
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江西中医药2013年6月第6期总44卷第366期

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檵木浸膏水悬浮液置于烧杯中添加5g活性氧化铝,
震荡吸附约5分钟后,抽滤获得滤液,与原液进行比
较,观察其对浸膏脱色效果。
2.4.2 脱色试验的优化 各取15mL檵木浸膏水悬浮
液于A、B、C 3个烧杯中,分别加入 10、15、20 g氧化
铝于檵木原液中,搅拌静置一段时间,抽滤观察其
脱色效果。
2.4.3 脱色前后总黄酮的测定 取檵木浸膏20mL加
入 20g氧化铝,脱色一段时间后抽滤得滤液。各取
脱色前后的檵木浸膏液 1mL于离心机中离心。取
脱色后并经离心的檵木浸膏液 100μL,加入 900μL
蒸馏水(即将檵木浸膏液稀释10倍);取离心的檵木
浸膏原液100μL,加入900μL蒸馏水(即将檵木浸膏
原液稀释 10倍),按照芦丁标准曲线制作的显色程
序各取 3份进行平行测定,最大吸收波长处测定其
吸光度,代入标准曲线方程计算出脱色前后檵木浸
膏中总黄酮的含量,计算出总黄酮的回收率R。
R=W1/W2×100%
其中W1为脱色后溶液所含总黄酮的质量,W2
为脱色前溶液所含总黄酮的质量。
3 结果
3.1 标准曲线制备
以吸光值(Y)与浓度(X)绘制标准曲线,回归方
程为Y=0.3762X+0.0142,r=0.9993,说明芦丁在此浓
度范围内呈现良好的线性关系。
3.2 白花檵木浸膏脱色
定性研究表明,氧化铝对檵木浸膏脱色效果明
显;当加入 15 g氧化铝时,即物料比为 1:1时,脱色
效果较为明显,继续加入氧化铝,颜色并没有太大
改变。故选用1:1的物料比对檵木浸膏进行脱色。
3.3 脱色前后总黄酮的测定
脱色前后檵木浸膏溶液测定吸光值,均值分别
为 0.923和 0.514。由标准曲线计算脱色前原液总
黄酮含量W2为 24.16 mg/mL,脱色后的总黄酮含量
W1为 13.29mg/mL,总黄酮的回收率 R为 55.01%。
在脱色过程中,总黄酮并没有大量流失,氧化铝可
作为白花檵木浸膏的脱色剂。
4 结论
在进行檵木浸膏的脱色过程中,曾用活性炭和
氧化铝两种脱色剂进行对比。虽然用活性炭脱色
后颜色也变得较浅,但是由于活性炭本身就是黑色
的细小颗粒,在脱去檵木浸膏色素的同时又加入了
自身的颜色,掺入了新的杂质。故综合分析后,决
定采用氧化铝作为檵木浸膏的脱色剂。
为定量分析活性氧化铝对浸膏脱色效果,本文
通过分光光度法比较脱色前后的总黄酮含量来评
价。实验表明,总黄酮的回收率为 55.01%,在脱色
过程中,总黄酮并没有大量流失。本实验为使用氧
化铝法对中药浸膏脱色提供了相关数据,在今后的
实验中可重点研究如何提高总黄酮的回收率。
参考文献
[1]中华人民共和国卫生部.中药新药临床研究指导原则[M].北京:
中国医药科技出版社,2002:139-143.
[2]魏希颖,何悦,蒋立锋,等.泡桐花体外抑菌作用及黄酮含量的测
定[J].天然产物研究与开发,2OO6,(18):401-404.
(收稿日期:2012-12-19)
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