全 文 ：收稿日期:2005-05-04。
基金项目:贵州省 “十五 ”科技攻关重大项目子课题 , 项目编号:黔科合
农字(2000)1142号。
作者简介:张明生(1963 ～ ),男 ,在读博士研究生 ,副教授;主要从事药
用植物生物技术研究兼教学工作。 　　通讯作者:杨永华。
药用兰科植物杜鹃兰的组织培养与快速繁殖
张明生 1, 2　戚金亮 1　刘　志 3　谢　波 2　杨永华 1
(1.南京大学生命科学学院　南京　210093;
2.贵州大学农学院　贵阳　550025;　3.湖南农业大学生物技术系　长沙　410128)
摘要:以带顶芽或不定芽的杜鹃兰假鳞茎切块为外植体进行试
管培养 , 可在短时间内获得大量优质幼苗。经试验筛选出各培
养阶段的最适培养基为:(1)原球茎诱导和增殖培养基:MS+6-
BA2.0mg/L(单位下同)+2, 4-D0.5+杜鹃兰共生真菌提取物
10.0+PVP500.0;(2)芽和根分化及试管苗生长培养基:1/2
MS+NAA0.5+IBA0.5+共生真菌提取物 10.0 +PVP500.0。
上述 2种培养基均加入 3.0%蔗糖和 0.8%琼脂 , pH5.8。培养
温度(25±1)℃, 光照 12h/d,光照度 2 000lx。
关键词　杜鹃兰　假鳞茎　原球茎　组织培养　快速繁殖
杜鹃兰 Cremastraappendiculata(D.Don)Makino
为兰科(Orchidaceae)杜鹃兰属(Cremastra)多年生草
本植物 ,主要分布于东亚地区 ,尤以中国的贵州 、四川
为多。以假鳞茎入药 ,药材称毛慈菇 ,是常用重要中药
材 。味辛 、甘 ,性寒 ,有小毒;有清热解毒 、润肺止咳 、活
血止痛 、消肿散结等功效 ,内用可抗肝癌 、乳腺癌 、子宫
癌等 ,外用于治疮毒 、蛇虫咬伤 、皮肤烫伤或烧伤等。
由于人们长期掠夺式的采挖 ,其野生资源日渐枯竭 ,货
源严重短缺 ,致使价格飞涨 。杜鹃兰不能以种子繁殖 ,
假鳞茎是其唯一的繁殖器官 ,而该植物每个假鳞茎在
1年生长期中只能产生 1个新的假鳞茎 ,故繁殖速度
极其缓慢 ,使人工种植难以规模化进行 。加之该植物
正常生长需要与特定的真菌共生 ,更是增加了人工种
植的难度。笔者在杜鹃兰离体快繁及其共生真菌的分
离 、培养方面获得成功 ,不仅为兰科珍稀植物种质资源
的保存提供了参考依据 ,也为该药材的 GAP种植奠定
了基础 。
1　材料与培养条件
1.1　材料
带顶芽或不定芽的野生杜鹃兰 Cremastraappen-
diculata(D.Don)Makino假鳞茎 。
1.2　培养条件
1.2.1　原球茎诱导和增殖培养基
MS+6-BA2.0mg/L(单位下同)+2, 4-D0.5+共
生真菌提取物 10.0+PVP500.0。
1.2.2　芽和根分化及试管苗生长培养基
1 /2MS+NAA0.5 +IBA0.5+共生真菌提取物
10.0+PVP500.0。上述 2种培养基均加入 3.0%蔗糖
和 0.8%琼脂 , pH值为 5.8。培养室温度为(25±1)℃,
光照 12h/d,光照度 2 000lx左右 。
2　生长与分化情况
2.1　原球茎的诱导和增殖
将新采集的幼嫩 、健壮的野生杜鹃兰假鳞茎置流
水下冲去泥土后 ,放入烧杯中 ,加几滴洗洁净用水震荡
15 ～ 20min,此间用毛笔刷洗假鳞茎表面 ,再经流水冲
洗 12h。在超净台上 ,先用 70%(V/V)乙醇对假鳞茎
表面消毒 1min,无菌水冲洗 3次 ,再用 0.1%(W/V)
HgCl2溶液浸泡 10min,最后用无菌水冲洗假鳞茎 5
次 ,置无菌滤纸上用无菌刀片将其切成带 1 ～ 2个芽眼
的小块 ,接种到原球茎诱导培养基(1)上。 12d左右 ,
外植体上芽眼开始露白 ,接着萌出不定芽。随着不定
芽的生长 ,约 40d后 ,其基部和表面陆续产生带有白
毛的淡绿色原球茎。将原球茎从基部切下 ,转移到原
球茎增殖培养基(1)上 ,原球茎快速增殖。
2.2　芽和根分化及试管苗生长
选择直径约 0.5cm、生长健壮的原球茎接种到培
养基(2)上 ,约 10d左右原球茎分化出芽 , 3周后开始
出现根 ,随即叶片抽出 ,到 4周时长出 3 ～ 5条粗壮的
根 。此后 ,试管苗生长迅速 , 40d左右即可移栽。
2.3　炼苗及移栽
将培养试管苗的培养容器口敞开 ,室温下放置 1
～ 2d后 ,小心地将试管苗自培养容器中取出 ,用水洗
净其根部残留的培养基 ,栽入盛有棉籽壳(多菌灵浸
泡 2 ～ 3h,自来水冲洗 5次)的花盆中 ,以白色塑料薄
膜覆盖保湿 ,弱光 ,温度控制在 25℃左右 ,每隔 2d浇
水 1次 。约 3周后长出新根 ,此时即可移栽 。移栽时 ,
盆底垫碎石 ,上覆盆土(腐殖质∶蛭石∶沙 =2∶1∶1)并
栽入试管苗 ,成活率可达 90%。
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第 24卷第 8期　　2005年 8月　　　　　　　　　　　种　子　(Seed)　　　　　　　　　　　　Vol.24No.8　Aug.　2005