全 文 ：中国医院药学杂志 2 0 0 3年第 2 3卷第 1 1 期 C hi n H(巧I〕 p ha m r J, 2 0 3 N 6v , vol 23
,
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·研究论文·
璋牙菜属及近缘植物中齐墩果酸的高效液相色谱定一分析
陈家春 , “ ,周青“ , 左毅 2 , 李惠 2 , 刘众文 “ , 贾敏如 ` l( . 成都中医药大学 , 四川 成都 61 0 75 ; 2 . 湖北中医学院 ,湖北
武汉 4 300 6 1 )
【摘要 1 目的 : 比较掉牙菜属及近缘植物中齐墩果酸的含量 , 为资源利 用提供依据 。 方法 : 高效液相色语法浏定掉 牙莱属及
其近缘植物不 同部位中的齐墩果酸含量 , Shi m 一 aP ck VP 一 O】万(5 哪 , 4 . 6 ~ x 150 ~ )柱 , 流动相 : 乙晴 一水 (7 8 : 2 2) ,检浏波长 1Z 5 nr , 0 . 0 5 A t JF S , 流速 1 . o m .L m i n 一 ’ , 柱温 40 ℃ 。 结果 : 测定贵州律牙菜中齐墩果酸的平均 回收率为 102 . 1% , 重现性实
验的 RDS 为 1 . 巧% , 符合定量分析要求 。 分别测定了 14 种璋牙菜属及近缘植物不 同部位齐墩果酸的含量 。 14 种植物花 、 叶 、
茎中均含 齐墩果酸 , 其 中花中的含量最高 , 从 0 . 93 7 % 到 1 . 38 6% ; 叶与 茎中的含 量其次 , 且含量差 异很大 , 从 0 . 23 6 % 到
1
.
04 1% ;根中的含量为零 。 结论 :本次实验说明这些在民间作为律牙菜使用的植物中都含有保肝成分齐墩果酸 ,且在花 中的
含量明显高于其他部位 。
〔关键词 〕 璋牙菜属 ; 齐墩果酸 ; 高效液相色谱法
[中图分类号 ] 9R 6 5 . l [文献标识码 〕A [文章编号 ] 10 0 1一 52 13 ( 2 0 0 3 ) 1 1一 0 6 4 1一 0 3
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a n t i t a t i ve a n a ly s i s o f o le a n o l ic a c id i n S w e r t ia g e n us a n d er l a t ive P l a n t s b y H P L C
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K E Y WO R I] 6
: 5 2尤℃ r t故 ; ol ea n o lic a d d ; H l〕 L C
龙胆科璋牙菜属 ( S二 rt ia )多种植物在我国民
间长期以来用作药用 ,尤其是用于治疗肝炎 ,疗效较
好 [` ] 。 所含齐墩果酸 ( o le a on li c a e id )具有护肝 、 降
酶 、抗炎 、增强机体免疫功能及降血脂等作用〔2〕 , 是
其有效成分之一 。 本文建立了贵州璋牙菜中齐墩果
酸的高效液相色谱定量分析方法 , 并对不同产地的
12 种璋牙菜及其 2 种近缘植物进行了含量测定 , 现
报道如下 。
1 仪器和材料
gA i l
e n t 一 1 100 高效液相色谱仪 , G 1 3 l l A 泵 ,
G 1 3 16 A 紫外检测器 , S h im 一 P a e k V l〕 一O D S 柱 ( 5 拜m ,
4
.
6
mrn
只 1 5 0
mrn )
,
gA
i le n t 色谱工作站 ; aS r t o r i u s
B P 2 l l D 分析天平 。
齐墩果酸标准品 (中国药品生物制品检定所 , 归
一法测定含量 > 98 % ) ; 甲醇为分析纯 , 乙睛为色谱
纯 ,水为纯化水 ;生药样品标本存于湖北中医学院标
本中心 ,其原植物均经作者鉴定学名 。
2 方法和结果
2
.
1 色谱条件 流动相 : 乙睛一水 ( 78 : 2 2) , 检测波
长 2一s nr
,
0
.
0 5 A L IF s
, 流速 r . o o m L · m in 一 ’ , 柱温
4 0℃ 。
2
.
2 标准品溶液的制备 精密称取齐墩果酸标准
品约 4 m g , 置于 2 m L 量瓶中 , 以甲醇溶解并稀释至
刻度 ,分卿」精密量取 0 . 1 , 0 . 2 , 0 . 3 , 0 . 4 , 0 . s m L 置于
2 m L 量瓶中 ,加甲醇至刻度后摇匀 ,备用 。
【基金项目」 国家自然科学基金 (项 目批准号 30 2 71 59 0)
【作者简介」 陈家春 ,男 ,博士 ,教授 , 电话 : 0 27 一 6 8 8 8 9 0 6
6 42中国医院药学杂志 0 20 3年第
表 2
1,
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丝壁笙卫塑匹丛业竺吐鱼竺红翌坠全竺立些达 .竺卫
样品中齐墩果酸的含 t
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n t e n t s of o lae on li
e a e id i n
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腼205
编号 植物名称 产地
15 0
1o
巧 0
10 0
齐墩果酸含量角唱 . 9 一 ’
茎 叶 花 全草
r加一n r /m i n
A B
图 1 H PL C色谱图
A
. 齐墩果酸 B .贵州璋牙菜
iF g 1 1护 L C e l l r o ll l a tog ~
A
.
o le a ll O li e a e id B
.
s t乏吧 r t ia ko u i thc e刀 5 15 F r a门 e h
2
.
3 样品溶液的制备 精密称取各璋牙菜样品细
粉约 1 9 , 置于 25 m L 量瓶中 , 加人一定量 的甲醇 ,
室温下超声 30 m in , 取出 , 放冷后定容 , 静置 , 上清
液过滤 ,备用 。
2
.
4 标准曲线的制备 分别取各浓度的标准品溶
液 20 拼(L : = 2 ) ,进样 ,依上述色谱条件测定 , 以浓
度为横坐标 ,峰面积为纵坐标 , 绘制标准曲线 ,并进
行回归计算 , 其 回归方程为 Y = 1 7 430 . 258 X +
7 0 8 4 2
.
9 3 3
, : = 0
.
9 9 9 8
, 进样量在 2 . 23 一 1 1 . 1 5 “ g
范围内线性关系良好 。
2
.
5 精密度实验 取齐墩果酸标准品溶液的中浓
度溶液 , 连续进样 5 次 ,分别测定峰面积 , 计算 R SD
为 1 . 9 6% 。
2
.
6 重现性实验 精密称取同一批号 的贵州璋牙
菜粉末 5 份 ,每份 1 9 , 分别按样品溶液的处理方法
制备样 品液 , 进 样 , 测 定 峰面 积 , 计算 R SD 为
1
.
15 %
。
2
.
7 稳定性实验 将同一样品溶液隔 0 , 1 , 2 , 4 , 6 ,
s h 进样 ,分别测定峰面积 ,计算 R SD 为 1 . 13 % 。
2 , 8 加样回收实验 精密称取已测定齐墩果酸含
量的贵州璋牙菜全草粉末约 0 . 5 9 共 5份 ,分别加人
一定量的标准品 ,按样品处理方法制备样品溶液 ,测
定加样 回收率 , 平均 回收率 为 102 . 1% , R SD 为
2
.
0 6 %
,测定结果见表 1 。
表 1 回收率结果
aT b 1 Rveco
r y of o lea on li
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sam
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l 二叶璋牙菜 四川马尔康 3 . 12 5 . 9 6 9 . 5 4 3 13
S u 吧 rt ia
.
b ifo l ia
2 璋牙菜 湖北建始 一 一 一 3 . 27
5
.
b i n 之a c u勿 at
3 西南璋牙菜 四川沪定 8 . 9 9 . 09 13 . 8 6 8 . 76
5
.
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4 川东璋牙菜 湖北来凤 一 一 一 2 . 8
5
. 〔云之饭 d行
5 北方璋牙菜 四川金川 5 . 9 5 10 . 4 1 10 . 7 7 5 . 5 2
5
.
id l “ at
6 红直璋牙菜 四川马尔康 2 4 2 . 75 12 87 9 . 93
5
. 。咧人or s t i e t a 四川卧龙 2 6 8 2 . 6 9 10 . 9 9 4 . 9 6
7 贵州璋牙菜 湖北建始 2 . 3 6 9 17 1 1 . 9 9 4 . 2 7
5
.
ko u i thc e n s i 、 湖北鹤峰 4 . 1 一 10 . 12 6 . 2 6
8 大籽璋牙菜 四川沪定 3 . 13 4 . 0 9 1 1 . 5 7 3 . 7 8
5
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c 刀乃了泥于r ma 湖北宣恩 - 一 一 4
.
18
9 显脉璋牙菜 湖北建始 一 一 一 5 . 42
5
.
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湖北鹤峰 一 一 一 3 , 95
1 0 祁连璋牙菜 四川巴郎山 2 . 60 2 . 69 9 . 3 7 4 . 3 9
5
.
P犷 z 〔改之` lsk i
1 川西璋牙菜 四川卧龙 一 一 一 12 . 20
5
.
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1 2 紫红璋牙菜 四川沪定 6 . 0 7 9 . 8 10 . 35 6 . 3 2
S
.
P u in 二 湖北建始 - - 一 7 . 74
1 3 椭圆叶花锚 四川康定 3 . 3 8 5 . 4 5 10 . 49 3 . 15
H Zle n i a e l l iP ica
14 辐花 四川金川 8 . 8 1 一 1 4 . 2 9 2 . 9 2
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编号 取样量
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0
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50 1 2
0
.
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0
.
52 3 1
0
.
5 22 4
0
.
5 12 4
含量
n lg
3
.
13
3
.
13
3
.
2 7
加入量
1119
测得量
鳖卜 .
8 7
回收率
%
j R S I)
% %
,.勺ùJ
2 7
2 1
2
.
7 2
2
.
8 2
3
.
7 8
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.
5 5
4
.
7 3
6
.
0 1
7
.
0 9
7
.
0 1
7
.
5 6
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.
7
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.
2
10 1
.
3 1 0 2
.
1 2
.
0 6
10 5
.
6
10 0
.
4
2
.
9 样品含量测定 取样品溶液各 20 拜L , 注人高
效液相色谱仪 , 用外标两点法根据峰面积计算样 品
中齐墩果酸的含量 。 测定结果见表 2 。
3 讨论
自然界中的齐墩果酸以游离或皂昔的形式存
在 , 在龙胆科植物的叶 、花和果中主要以游离的形式
存在 〔2 3〕。 笔者采取了直接以溶剂提取 ,测定游离
齐墩果酸含量的方法 。 比较了无水乙醇回流 、 氯仿
索氏提取及甲醇超声波振荡 3 种提取方法 , 结果无
明显差异 ,但无水乙醇回流提取物中的杂质较多 , 甲
醇超声波振荡操作简便 ,效率较高 , 故采用此方法 。
用超声波分别提取 10 , 2 0 , 30 , 4 0 m i n , 结果 3 om i n
可将有效成分齐墩果酸提取完全 。
选择了不同流动相 : 甲醇 一水 ( 9 : 1 ) ; 乙睛一 0 . 1%
三乙胺水溶液 (稀磷酸调 pH 至 4 . 2 ) ; 甲醇一水一冰醋
酸 ( 8 7 : 13 : 0 . 0 4 ) ; 乙睛一水 ( 7 8 : 2 2 )及不同柱长 ( 1 50 ,
2 0 0
~ )的 0 1) S 柱
。 发现以乙睛 一水 ( 78 : 22) 为流
动相 , 150 ~ 的 。 D S 柱能够得到 良好峰形
,且与众
多杂质分离 。
测定发现 8 种植物 ( S饮 e月放 占式八记故 , 5饮吧rt 故
d n cat
, 反之脚忆故 id lu at , S议 r 尹龙ia e心d Zosrt icat
,
5议” 忆故
走。 “ i以 en is s , 反之r 砚故 刀砚 `叮巧户曰节故 , S仪” 才故 UP in撇 ,
从如故 el i户ca )根中游离齐墩果酸含量接近于零 ,而
14 种植物花 、 叶 、 茎中均含齐墩果酸 , 以花中的含量
最高 ,从 0 . 937 %到 1 . 386 % ;叶与茎中的含量其次 ,且
含量差异很大 , 从 0 . 236 % 到 1 . 041 % , 据此作者认为
在采收过程中 ,应尽量减少花 、叶与果实的损失 ,这一
中国医院药学杂志 2 0 03年第 23卷第 1 1期 C hi n H(〕5 1〕 pa hm r J, 20 0 3 N O v 八 b l 2 3 ,饰一 i 64 3结果支持了以带花全草人药的传统用药习惯 。
前人 已采用 T L C S 法 〔4】、 H P L c 法〔5」对璋牙菜
属主要药用植物中的另 一有效成分樟牙菜苦昔
(
s、 rt ia aln ir n )进行了含量测定 , 本文首次提出了
该类生药中有效成分齐墩果酸 ( o le ~ h c ac id) H PCL
的含量测定方法 ,该法具有快速 、准确 、简便的特点 。
参考文献 :
[ 1」 陈家春 , 难波恒雄 , 万定荣 . 璋牙菜属民族民间药物的整理
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翔率, 几” 2 , 27
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量测定〔J〕. 药物分析杂志 , 1 9 9 7 , 1 7 ( 4 ) : 2 4一
[收稿 日期 ] 20() 3一0 2 一1 5
胰岛素硬脂酸纳米粒的制备与结构分析
吴琼珠 ` ,平其能 2 l( . 第二军医大学南京军医学院 ,江苏 南京 21 00 9 ; 2 . 中国药科大学药剂教研室 , 江苏 南京 21 0 00 9)
〔摘要」 目的 :研究胰岛素硬脂酸纳米粒的结 构及抗消化酶特点 。 方法 : 采用透射电镜和激光散射法测定其形 态和粒径大
小 ; 荧光扫描 、聚丙烯酞胺凝胶电泳和抗消化酶降解等方法研究胰岛素在硬脂酸纳米粒中的包封情况 。 结果 : 胰岛素硬脂酸
纳米粒为球形 , 平均粒径为 5 . 3 nm , 多分散性指数为 0
.
643
。 荧光扫描显 示胰岛素硬脂酸纳米粒中无胰岛素荧光发射峰 ; 聚
丙烯酞胺凝胶电泳图谱中未见胰岛素条带 ;胰岛素硬脂酸纳米粒中的胰岛素可抵抗消化酶降解 。 结论 : 胰岛素被包裹在硬脂
酸纳米粒中。
[关键词〕 胰岛素 ;硬脂酸纳米粒 ; 结构
[中图分类号」R 9 4 3 . 3 [文献标识码 ] A [文章编号 ] 10 0 1一 52 1 3 ( 2 0 0 3 ) 1 1一0 6 4 3一 0 3
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K E Y W ( ) R瑞 : ins u l in ; s t~ e a e id an l l 0 】〕a r t ie les : s tur e t u er
纳米粒给药系统的研究 目的之一是为了解决蛋
白质 、多肤类药物非注射给药的稳定性 、安全性及有
效性等问题 。 药物在纳米粒中的位置不仅影响药物
本身的稳定性 、体 、 内外释药特性 , 而且还影响到药
物在体内的吸收 、分布和排泄【`〕。 在与生物降解型
载体材料构筑的分子聚集体中 , 蛋白质 、多肤类药物
主要以吸附 、镶嵌和包裹等形式存在 〔2 ] 。 胰岛素作
为临床 I 型糖尿病治疗的一线药物 ,解决其 口服给
药问题 ,倍受医药界关注 。 、本文以硬脂酸为载体材
料 ,乳化一溶剂挥发法制备纳米粒 , 通过荧光扫描 、 聚
丙烯酞胺凝胶 电泳和抗消化酶降解等实验 ,研究胰
岛素硬脂酸纳米粒的结构 。
1 材料与仪器
胰岛素 ( I N )S (徐州生化制药厂 , 批号 : 9 8 0 2 0 7 ,
干品效价 : 26 .石 IU · mg 一 ` ) ;硬脂酸 ( sA ) (上海凌峰
化学试剂有限公司 ,批号 : 000 7 2 1 ) ;大豆磷脂 (上海
浦江磷脂有限公司 ,批号 : 001 0 2 5 ) ;泊洛扎姆 P ol ox -
arn
e r 18 8 (
5 1脚 a 公司 ) ; 胃蛋白酶 ( 5 1脚 a 公司 ) ;胰酶
(M
e r e k 公司 , 批号 : 5 176F 0656 7 ) ; 乙睛 (色谱纯 , 美
国 T ed ia 有限公司 ) ;其他试剂均为分析纯 。
L C 一 10 A 型高效液相色谱仪 ( 日本岛津 ) ; S P I) -
10A V 紫外检测器 (日本岛津 ) ; 5 01 型超级恒温水
浴 (上海市实验仪器厂 ) ; 5 804 R 冷冻离心机 (德国
E p p e n加 r f公司 ) ; H 一 6 0 0 电子透射电镜 ( 日本 H i -
t a e h i 公司 ) ; Z e t a s i z e r 3 0 0 0 马尔文粒度仪 (英 国
〔基金项目 1 国家自然科学基金资助项 目 ( 3 9 9 3 0 2 0 0)
[作者简介 ] 吴琼珠 , 女 , 博士 , 副教授 , 电话 : 0 25 一 4 36 4 6 38 -
4 2 4 74