全 文 ：图 2　枸杞子多糖与维生素 C清除超氧阴离子结果
3　结论
由正交实验可见 ,在影响枸杞子多糖得率 3个主要因素中 , 温
度的影响最显著 ,其次为提取时间 ,最后为固液比。由正交实验可
知 ,枸杞子多糖水浸提法提取的最佳工艺条件为提取温度 80℃,
固液比 1∶30, 提取时间 3.5 h,提取次数为 2次。在此条件下进行
实验 ,枸杞子多糖得率为 8.34%。对枸杞子多糖抗氧化活性研究
表明 ,枸杞子多糖对羟基自由基的清除效果较好 ,其清除率高于维
生素 C,而对超氧阴离子自由基的清除率低于维生素 C,在实验浓
度范围内 ,其清除能力不随多糖浓度的增加而显著增高。
参考文献:
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收稿日期:2008-02-20;　修订日期:2008-09-10
作者简介:李　莉(1983-),女(汉族),甘肃榆中人 ,现为兰州大学药学院
生药学研究所在读硕士研究生 ,主要从事生药鉴定及其综合利用研究
工作.
＊通讯作者简介:马志刚(1953-), 男(汉族),甘肃兰州人 , 现任兰州大学
药学院教授 ,主要从事生药鉴定及其综合利用方面的研究工作.
甘肃青兰属植物中多糖的含量测定
李　莉 , 徐　杨 , 马志刚＊
(兰州大学药学院生药学研究所 ,甘肃 兰州 730000)
摘要:目的 建立甘肃青兰属植物中多糖的含量测定方法。方法 利用苯酚 -硫酸法显色 , 在 490nm波长处用紫外分光
光度法测定多糖含量。结果 回归方程:Y=0.014 00X+0.000 17 , r= 0.999 6。测得异叶青兰 、香青兰 、岷山毛建草和唐
古特青兰多糖含量分别为 13.38%, 10.42%, 5.795%, 15.07%;平均回收率及其 RSD分别为 95.03%, 3.063% (n= 5);
96.42% , 2.830% (n=5);95.85%, 2.470% (n= 5);101.1%, 2.044% (n=5)。结论 所用方法快速 、准确 、灵敏 , 可
作为青兰属植物中多糖的含量测定方法。
关键词:异叶青兰;　香青兰;　岷山毛建草;　唐古特青兰;　多糖;　苯酚 -硫酸法
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)03-0663-02
ContentDeterminationofPolysaccharidesinDracocephalumGenusPlantsinGansuProv-
ince
LILi, XUYang,MAZhi-gang＊
(PharmacologicalColegeofLanzhouUniversity, GansuLanzhou730000, China)Abstract:ObjectiveTodeterminepolysaccharidesinDracocephalumgenusplantsinGansuProvince.MethodsThecontentof
polysaccharideswasdeterminedbyphenol-sulfuricacidmethodat490nm.ResultsTheregressionequationwasY=0.014 00x
+0.000 17, r=0.999 6.ThecontentsofpolysaccharidesinDracocephalumheterophylumBenth., D.moldavicumL., Draco-
cephalumpurdomiW.W.Smith.andD.tanguticumMaxim.were13.38%, 10.42%, 5.795%, 15.07%.Theaveragerecov-
eryrateandRSDwere95.03%, 3.063% (n= 5);96.42% , 2.830% (n= 5);95.85%, 2.470% (n= 5);101.1%,
2.044% , raspectively(n= 5).ConclusionThemethodisrapid, reliableandsensitive, anditcanbeusedtodeterminethe
polysaccharidesinDracocephalumgenusplants.
Keywords:D.heterophylumBenth.;　D.moldavicumL.;　D.purdomiiW.W.SmithandD.tanguticumMaxim.;　Po-
lysacharide;　Phenol-sulfuricacidmethod
　　异叶青兰 DracocephalumheterophylumBenth., 香青兰 D. moldavicumL., 岷山毛建草 D.purdomiiW.W.Smith.和唐古特青
兰 D.tanguticumMaxim.均为唇形科 Labiatae青兰属(Dracoceph-
alum)多年生草本植物。青兰属是唇形科中分布较广泛的一个
属 , 全球约有 60种 , 主要分布于亚洲温带 ,多在高山干旱地区 , 少
数延至中欧及北欧 , 1种分布于北美 , 我国约 32种 7变种 , 分布
于东北 ,华北 ,西北及西南 [ 1] 。甘肃青兰属植物有 5种 , 其中 4种
可作药用 [ 1, 2] 。多年来该属植物一直被广泛应用 ,有清热 、止咳 、
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.3 时珍国医国药 2009年第 20卷第 3期
凉血的功效 , 主要用于治疗胃病 、肝病 、头痛等。多糖有抗肿瘤 、
抗流感 、清除氧自由基 、增加机体免疫力 、防衰老及抗辐射等作
用。香青兰多糖对活性氧自由基具有良好的清除能力 [ 3] 。本文
对甘肃青兰属 4种植物中的多糖含量进行了测定 ,为开发利用该
属植物资源及进一步研究提供依据。
1 　仪器与材料
1.1 　仪器 UV-2450紫外分光光度计(日本岛津), FA2004B
电子天平(上海精密科学仪器有限公司)。
1.2　 材料 样品均采自甘肃省 , 经兰州大学药学院生药研究所
马志刚教授鉴定分别为唇形科青兰属植物异叶青兰 Dracoceph-
alumheterophyllumBenth., 香青兰 D.moldavicumL., 岷山毛建草
D.purdomiW.W.Smith., 唐古特青兰 D.tanguticumMaxim.,葡
萄糖(中国生物制品检定所 , 批号 20050615), 其他试剂均为分
析纯。
2 　方法与结果
2.1　 溶液的配制
2.1.1　对照品溶液的配制 精密称取 105℃干燥至恒重的无水
葡萄糖 0.100 3 g,置 100 ml容量瓶中 , 加水溶解并稀释至刻度 ,
摇匀 , 作为对照品溶液(每毫升中含无水葡萄糖 1.003 mg)。
2.1.2　 5%苯酚液的配制 取苯酚 100g, 加入 0.1g铝片和 0.05
g碳酸氢钠 ,加热蒸馏 , 收集 182 ℃馏分。精密称取该馏分 5.007
g, 置 100 ml棕色容量瓶中 ,加水溶解并稀释至刻度 , 摇匀 ,备用。
2.1.3 　供试品溶液的制备 分别称取干燥实验材料粉末 5 g,
加蒸馏水 50ml, 回流提取 1 h。过滤 ,滤渣重复上述操作两次 ,
合并提取液 , 浓缩至适量 , 加入乙醇使乙醇含量为 80%放置 12
h,抽滤 , 沉淀依次用无水乙醇 、丙酮 、乙醚反复洗涤 , 干燥 ,精密称
取干燥的粗多糖提取物各 30 mg置 25 ml容量瓶中 , 加水溶解并
稀释至刻度 , 摇匀 ,过滤。唐古特青兰取续滤液 1.0 ml,其余各取
续滤液 2.0 ml分别置 25 ml容量瓶中 , 加水定容 ,即得。
2.2　检测波长的选择 取葡萄糖对照品溶液及 4种供试品溶
液 , 在 400 ～ 800nm波长扫描。结果见图 1, 显色后葡萄糖溶液
及供试品溶液在 490 nm波长处有最大吸收。说明在 490 nm波
长处供试品溶液中其他成分对多糖的显色与吸收无干扰 ,故选定
490nm为测定波长。
a-唐古特青兰;　b-葡萄糖;　c-异叶青兰;
　d-香青兰;　e-岷山毛建草
图 1　葡萄糖溶剂及供试品溶液光谱图
2.3　标准曲线制备 精密量取葡萄糖对照品溶液 0.4, 0.8, 1.2,
1.6, 2.0, 2.4, 2.8ml于 50 ml容量瓶中 , 加水稀释至刻度 , 摇匀。
分别精密量取 2.00 ml分置 7支具塞试管中 , 另精密吸取 2.0ml
水为空白。分别加入 5%苯酚溶液 1 ml, 摇匀 , 加入 5 ml浓硫酸
(加入浓硫酸时 ,应将移液管口悬于试管口 , 使浓硫酸垂直冲入
液面)振摇 5min,置沸水浴加热 15 min, 冷水浴冷却 30 min, 在
490nm处测吸光度 (A)。 绘制标准曲线 , 得线性方程 Y
=0.014 00X+0.000 17, r=0.999 6。结果表明 , 葡萄糖溶液在
8.000 ～ 56.00μg/ml范围内与吸光度值呈良好的线性关系。
2.4　精密度实验 分别精密吸取 4种供试品溶液 2.0 ml于具塞
试管中 ,依 “ 2.3”项下方法显色 , 测定A值 ,求得其 RSD分别为 1.
129%, 0.7079%, 1.140%, 1.632% (n= 5)。
2.5　显色稳定性 将 4种供试品溶液完成显色后 , 2 h内连续测
定 , 得其 A值比较稳定。
2.6　重复性实验 取 4种供试品 ,分别精密称取 6份 ,制备供试
品溶液并测定多糖含量 , 结果异叶青兰 、香青兰 、岷山毛建草 、唐
古特青兰中多糖的含量分别为 13.92%, 10.52%, 5.819%,
15.05%;RSD分别为 1.763%, 1.682%, 1.614%, 2.429% (n=
6)。
2.7　回收率实验 取已知含量的 4种供试品溶液 , 分别加入一
定量的葡萄糖对照品溶液 , 混匀后取 2 ml于具塞试管中 , 依
“ 2.3”项下方法显色 , 测定吸光度 , 计算回收率。 结果异叶青兰 、
香青兰 、岷山毛建草 、唐古特青兰的平均回收率及其 RSD分别为
95.03%, 3.063% (n=5);96.42% , 2.830%(n=5);95.85%,
2.470% (n=5);101.1%, 2.044% (n=5)。
2.8 　样品的测定 按上述 “ 2.1.3”和 “ 2.3”项下方法操作 , 测
定了 12批样品中的多糖。结果见表 1。
表 1　多糖含量测定结果 %
样品 多糖含量
1 2 3
平均含量 RSD
异叶青兰 13.34 13.57 13.23 13.38 1.297
香青兰 9.972 10.57 10.72 10.42 3.798
岷山毛建草 5.927 5.812 5.645 5.795 2.447
唐古特青兰 15.03 14.95 15.22 15.07 0.920 5
3　讨论
3.1　本实验测定方法的原理 利用多糖易溶于热水不溶于
80 %乙醇的性质 , 先用热水提取多糖 , 再用 80 %乙醇沉淀得
到多糖 , 除去单糖 、低聚糖及其他干扰性成分。 提取的多糖制
成水溶液 , 多糖在 H2SO4的作用下 , 先水解成单糖分子 , 并迅
速脱水生成糖醛衍生物 ,然后与苯酚作用生成有色化合物 , 用
比色法测定含量。
3.2　浓硫酸加入方式的选择 实验发现 , 加入浓硫酸的操作方法
是影响显色结果的主要因素。 常规试剂加入方法引起显色结果
不平行 。采取 “移液管悬空 ,垂直加入浓硫酸 ,立即摇匀”的方式
和 “缓慢沿壁加入浓硫酸 ,分层 ,静置一定时间后摇匀”的加入方
式 , 都能得到稳定的显色结果。 但是不同操作方法显色结果不
同。异叶青兰 、香青兰 、岷山毛建草 、唐古特青兰样品与葡萄糖对
照品都在 “垂直加入浓硫酸 、立即摇匀”的操作条件下显色反应
最充分 ,故选择该操作步骤为实验条件。
异叶青兰 、香青兰 、岷山毛建草 、唐古特青兰提取物是组成较
复杂的粗多糖产品 ,本方法以葡萄糖做对照 ,检测结果以葡萄糖
计 , 得到稳定的检测结果。
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