全 文 ：2006年 11月
November 2006
色 谱
Chinese Journal o f Chromatogra phy
Vo l. 24 No. 6
656
收稿日期:2006-01-06
第一作者:郭治安 ,男 ,副研究员 , Tel:(029)88302604 , E-mai l:xiaoh uiyeah@ey ou . com.
基金项目:陕西省教委基金资助项目(No. 03JK075).
离子抑制色谱法测定棘豆属植物提取物中的苦马豆素
郭治安 , 　张小辉 , 　赵景婵 , 　袁红安 , 　梁小云
(西北大学化学系 , 陕西 西安 710069)
关键词:离子抑制色谱法(ion suppression ch rom atography);苦马豆素(sw ain sonine);植物提取物(plan t ext ract);棘豆属植物
(Ox ytro pis.)
中图分类号:O658　　文献标识码:B　　文章编号:1000-8713(2006)06-0656-01　　栏目类别:技术与应用
　　苦马豆素(sw ainsonine , SW)属吲哚兹定生物碱 , 是植物
引起疯草中毒特征症状的唯一毒素[ 1] 。研究发现 , SW 除有
毒性外 ,还具有很强的抗癌活性和免疫增强功能[ 2] 。目前其
测定方法有α-甘露糖苷酶抑制分光光度法[ 3] 、薄层色谱扫描
法[ 4] 、气相色谱法[ 5] 、液相色谱 /质谱联用法[ 6]等 。但分光光
度法样品基体干扰大 ,线性范围窄;薄层色谱扫描法 、气相色
谱法需经衍生化处理 , 操作繁琐 , 难以准确测定;液相色谱 /
质谱联用法仪器价格高 ,不易推广使用。本文建立的离子抑
制色谱法分析 SW , 样品不经过衍生化 , 紫外检测器直接检
测 ,操作简便 , 通用性强 , 为进一步研究动物疯草中毒和 SW
的抗癌作用奠定了基础。
1　实验部分
1. 1　仪器与试剂
　　HP 1100高效液相色谱仪 ,G1315A 二极管阵列检测器, HP
Chemstation化学工作站。SW对照品(西北农林科技大学);乙
腈为色谱纯(天津市四友生物医学技术有限公司);磷酸二氢钾 、
氢氧化钾为分析纯(西安化学试剂厂);水为二次蒸馏水。
1. 2　色谱条件
　　Zorbax C18柱(150 mm ×4. 6 mm i. d. , 5 μm)。 流动相
为 25 mmol /L 磷酸二氢钾缓冲液(pH 7. 5)-乙腈(体积比为
97∶3),流速 0. 8 mL /min , 柱温 25 ℃, 检测波长 205 nm。 在
上述条件下 SW的保留时间为 5. 19 min(见图 1)。
图 1　(a)苦马豆素标准品和(b)样品的色谱图
2　结果与讨论
2. 1　流动相的选择
　　以不同配比的水-甲醇 、水-乙腈 、磷酸二氢钾-甲醇为流
动相且在不同的 pH 条件下对 SW 进行分离 , 但分离效果均
不理想。以0. 1%三氟乙酸 、6 mmo l /L 庚烷磺酸钠 、6 mmo l /
L高氯酸铵作离子对试剂 ,在 pH 3. 0条件下进行分离 ,但检
测不到吸收峰。采用 25 mmol /L 磷酸二氢钾(pH 7. 5)-乙腈
(体积比为 97∶3)作流动相 , 结果表明 SW 色谱峰纯度高 , 且
峰形对称。
2. 2　检测波长的选择
　　从结构上分析 , SW 分子中桥氮原子上的孤对电子可以
发生 n→σ*跃迁 ,加上两个环状结构的助色作用 , 其在紫外
短波长区应有一定的吸收。 二极管阵列检测器光谱扫描显
示 , SW 在200 nm 有一弱吸收峰 , 但此波长下基线噪声很大 ,
检出限高。为了既能减小基线噪声 , 同时保证 SW 有高的检
测灵敏度 ,实验确定 205 nm 为最佳检测波长。
2. 3　标准曲线和灵敏度
　　将质量浓度为 2. 467 g /L 的 SW 标准储备液用流动相
分别稀释成 0. 123 4 ～ 1. 234 g / L的溶液进行测定 ,以 SW 的
质量浓度 C(g / L)为横坐标 , 峰面积 A 为纵坐标绘制标准曲
线 ,得回归方程为 A=264. 5C+21. 73 , r=0. 999 6 , 表明 SW
在上述质量浓度范围内线性良好。采用逐步稀释法测得 SW
的最低检出限为 29 ng(S /N=3), 表明该方法对于 SW 的检
测具有较高的灵敏度。
2. 4　回收率及精密度测定
　　于已知含量的样品中添加高 、中 、低 3 个水平(分别为
0. 986 8 , 0. 493 4 , 0. 246 7 g /L)的标准溶液 ,在上述色谱条件
下进样分析 ,计算 SW 的加标回收率为 99. 3%～ 100. 6%。吸
取质量浓度为 0. 493 4 g / L的标准溶液 5 μL , 重复进样6 次 ,
以峰面积计算精密度 ,相对标准偏差为 0. 88%。
2. 5　样品测定
　　取甘肃棘豆和黄花棘豆各 200 g , 甲醇渗漉 , 回收甲醇浸
膏后用 1 mo l /L HCl溶解 ,调 pH 至 5. 0 , 过滤后滤液上 732
型阳离子交换柱(自装 , 长度 50 cm), 水洗至无色后 , 用 1
mol /L NH3 H2O 洗脱。收集 NH 3 H2O 洗脱液后挥干 ,
先用甲醇溶解 ,挥干后再用氨性氯仿溶解 , 回收氯仿后得到
总生物碱提取物。精密称取两种棘豆属植物提取物各 25
mg , 加流动相稀释成质量浓度为1 g / L。精密量取 10 μL 该
溶液进样分析 ,记录主峰面积;另取 SW对照品适量 , 制备对
照品系列溶液 ,同法测定 , 外标法计算样品含量。平行测定 3
次 ,得甘肃棘豆提取物中 SW 含量为 57%, 黄花棘豆提取物
中 SW含量为 28%。
参考文献:
[ 1] 　杨鸣琦 , 曹光荣. 动物医学进展 , 1997 , 18(4):20
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[ 5] 　张黎 , 杨鸣琦 , 周宏超 , 蒲鹏 , 曹光荣. 西北农林科技大学学
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[ 6] 　Gardner D R , Molyneux R J , Ralphs M H . J Ag ric Food
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