全 文 ：第 29卷 第 6期
2010 年　12 月
华　中　农　业　大　学　学　报
Journal o f Huazhong Ag ricultura l Unive rsity
Vo l.29　No.6
Dec.2010 , 696～ 699
3种桉属植物乙醇抽提物
对爪哇根结线虫的毒杀活性＊
王惠惠　廖金铃　文艳华＊＊
华南农业大学资源与环境学院 ,广州 510642
摘要　采用直接浸泡法 , 测定了桉属(Eucalyp tus)植物柠檬桉(E.citriodora)、杂交桉(E.urophy la×E.
grand)和尾叶桉(E.urophy la)小枝条乙醇抽提物对爪哇根结线虫(Meloidog yne javanica)卵孵化的抑制活性以
及对 2 龄幼虫的毒杀活性。结果表明:柠檬桉 、杂交桉和尾叶桉乙醇抽提物对爪哇根结线虫卵的孵化均有较强
抑制活性 ,以 20 mg/m L乙醇抽提物液处理 24 、48 、72 h 后 , 抑制孵化率均达 94%以上;对爪哇根结线虫 2 龄幼
虫也有较强的毒杀活性 , 3 种桉属植物以 20 mg/m L乙醇抽提物液处理 2 龄幼虫 72 h 后 , 线虫校正死亡率均达
90%以上。将柠檬桉和杂交桉的茎 、叶干粉分别拌土盆栽防治空心菜(I pomoea aquatica)和黄瓜(Cucumis sati-
vus)爪哇根结线虫病。结果表明:柠檬桉和杂交桉茎 、叶干粉对爪哇根结线虫病均有较好的防治效果 , 植株根系
的根结数 、根结内雌虫数和雌虫产卵粒数均下降 ,植株地上部鲜质量增加 , 且均与对照差异显著。
关键词　桉树属植物;爪哇根结线虫;毒杀活性
中图分类号　S 482.3 +9;S 482.5+1　　文献标识码　A　　文章编号　1000-2421(2010)06-0696-04
收稿日期:2010-04-23;修回日期:2010-09-17
＊公益性行业(农业)科研专项经费项目(nyhyzx 07-050-4)和广东省农业攻关项目(2007B020709008)资助
＊＊通讯作者.E-mai l:yhwen@scau.edu.cn
王惠惠 ,女 , 1984年生 ,硕士研究生 ,助理研究员.研究方向:植物线虫学.E-mail:lyacw hh@163.com
　　根结线虫(Meloidogyne spp.)是重要的植物病
原线虫 ,其寄主植物十分广泛 。在我国南方地区蔬
菜地由根结线虫引发的线虫病害发生非常普遍 ,对
蔬菜生产造成严重影响 。目前 ,化学杀线剂存在毒
性大 、残留高 、易污染环境等诸多问题。20世纪 80
年代以来 ,利用植物源活性物质防治植物寄生线虫
的研究逐渐受到重视并引起广泛关注[ 1-2] 。
桉树是桃金娘科桉属(Eucalyptus)植物的总
称。桉属的植物种类多 、生长快 、适应性强 、用途广
泛 ,现中国引种桉树约有 300 多种 ,其中 10多种为
南方人工造林主要树种。从桉属植物中找寻杀线虫
活性物质的研究已有些报道[ 3-10] ,但还未见利用桉
属植物的活性成分防治空心菜(Ipomoea aquat ica)
和黄瓜(Cucumis sat ivus)上爪哇根结线虫(Meloid-
ogyne javanica)病的研究报道。
笔者以 3 种桉属植物为材料 ,在室内测定了桉
属植物乙醇抽提物对爪哇根结线虫卵的孵化抑制活
性和 2龄幼虫的毒杀活性 ,并选用 2种桉属植物的
茎和叶干粉分别拌土进行处理 ,分别观察了盆栽试
验中对空心菜和黄瓜植株上爪哇根结线虫病的防治
效果 。
1　材料与方法
1.1　植物抽提物及植物粉末的制备
柠檬桉(E.citriodora)、杂交桉(E.urophy lla×
E.grand)和尾叶桉(E.urophy lla)枝条及茎秆采自广
东省广州市郊龙洞 ,将小枝条晾干后粉碎 ,得到植物
粉末;将植物粉末用 95%乙醇抽提 ,抽提液经旋转蒸
发仪低压浓缩并晾干后得到植物抽提物 ,用灭菌蒸馏
水稀释至供试浓度备用;盆栽试验植物叶粉末采用
小枝条的叶 ,茎粉末采用茎秆部分 ,分别晾干粉碎成
粉末备用 。
1.2　供试线虫
爪哇根结线虫(Meloidogyne javanica)由华南
农业大学植物线虫研究室提供 ,接种于盆栽辣椒
(Capsicum annuum linn)植株上 。
1.3　卵孵化抑制活性的观察
将辣椒植株上的爪哇根结线虫病根冲洗干净 ,
在解剖境下挑取色泽和大小较一致的卵囊 ,用 1%
次氯酸钠溶液消毒 3 min ,再用无菌水冲洗后置于
直径 3 cm 的培养皿内 ,加入 20 mg/mL 植物抽提
液。每处理重复 4 次 ,以灭菌蒸馏水为对照。将培
　第 6 期 王惠惠 等:3 种桉属植物乙醇抽提物对爪哇根结线虫的毒杀活性 　
养皿置于 25 ℃恒温箱培养 ,分别于处理 24 、48 、72 h
后观察记录线虫卵孵化数量 ,计算卵孵化抑制率。
卵孵化抑制率=对照孵化卵数-处理孵化卵数对照孵化卵数 ×100%
1.4　植物抽提物对幼虫毒杀活性的测定
将辣椒上的爪哇根结线虫病根冲洗干净 ,在解
剖境下摘取卵囊 ,置于 25 ℃恒温培养箱孵化 24 h ,
得到大量纯根结线虫 2龄幼虫 。在直径 3 cm 的培
养皿内 ,加入1 mL 20 mg/mL 的供试植物抽提物溶
液 ,放入供试线虫 30 ～ 50 条。每处理重复 4 次 ,以
灭菌蒸馏水为对照 。将培养皿置于 25 ℃恒温箱培
养 ,分别于处理 24 、48 、72 h 后加清水复苏 12 h ,用
针刺法检查并记录线虫的活虫数和死虫数 ,计算校
正死亡率 。
校正死亡率=处理线虫死亡率-对照线虫死亡率
1-对照线虫死亡率 ×100%
1.5　盆栽试验
将空心菜和黄瓜种子播种于灭菌的盆土中 ,待
长至 3片真叶时移栽。取沙壤土(V沙/V土=1/4)经
121 ℃消毒 1 h后 ,与柠檬桉和杂交桉的茎 、叶干粉
混合 ,充分混匀后再分别分装于直径 16 cm 、高
12 cm的花盆内 ,每盆移栽供试苗 3棵。移苗后 7 d
接种爪哇根结 2龄幼虫 ,每株接虫 1 000 条。每处
理重复 10次 ,以灭菌土接种线虫为对照 。
各处理编号:A.每 1 L 土加入 5(A 1)、10(A 2)、
15(A 3)mL 柠檬桉茎干粉;B:每 1 L 土加入 5
(B1)、10(B2)、15(B3)mL 柠檬桉叶干粉;C:每 1 L
土加入 5(C1)、10(C2)、15(C3)mL 杂交桉茎干粉;
D:每 1 L 土加入 5(D1)、10(D2)、15(D3)mL 杂交
桉叶干粉 。
在空心菜和黄瓜生长期间只浇水 ,接种线虫后
45 d倒盆调查 ,分别记录根结数 、最大根结内雌虫
数(5 ～ 10个根结的平均数),土壤中 2龄幼虫条数 、
产卵粒数 、植株地上部鲜质量 ,并按以下公式计算防
治效果。
防治效果=对照根结数-处理根结数对照根结数 ×100%
2　结果与分析
2.1　抽提物对线虫卵孵化的抑制活性
试验结果表明 ,用20 mg/mL 尾叶桉 、杂交桉和
柠檬桉枝条的乙醇抽提物处理后 ,抽提物对爪哇根
结线虫卵的孵化均有较强的抑制活性 ,处理 24 、48 、
72 h的卵孵化抑制率均达到 94%以上(表 1)。
表 1　桉属植物抽提物对爪哇根结线虫卵孵化的影响1)
Table 1　Effect of twig extraction of Eucalyptus plants
on the egg hatching of M.javanica
处理
T reatment
抑制率/ %　In hibit ion rate
24 h 48 h 72 h
尾叶桉
E.uro phy l la 100±0.00 a 98.50±0.61 a 98.40±0.58 a
杂交桉
E.uro phy l la×
E.grand
100±0.00 a 96.63±0.37 b 96.80±0.59 a
柠檬桉
E.cit riod ora 100±0.00 a 95.51±0.61 b 94.05±0.59 b
　1)同列数值后相同字母表示在 0.05水平差异不显著(下表同)。
Data w i thin a column fol lowed b y the s ame let ter are not signif i
can tly dif ferent at 0.05 level(the same as fol lowing tables).
2.2　抽提物对线虫 2龄幼虫的毒杀活性
试验结果表明 ,用20 mg/mL 尾叶桉 、杂交桉和
柠檬桉枝条的乙醇抽提物处理后 ,抽提物对爪哇根
结线虫 2龄幼虫有较强的毒杀活性 ,并随处理时间
的延长 ,毒杀活性逐步增强 ,处理 48 h 的线虫校正
死亡率均达到 84%以上;处理 72 h的校正死亡率
均达到 90%以上(表 2)。
表 2 　桉属植物抽提物对线虫 2 龄幼虫的毒杀活性
Table 2　Nematicidal activity of twig extraction of Eucalyp tus
plants against second-stage juveniles of M.javanica
处理
T reatment
校正死亡率/ %　Adjust mortali ty
24 h 48 h 72 h
尾叶桉
E.uro phy l la 77.58±0.61 b 90.30±1.00 a 98.19±0.61 a
杂交桉
E.uro phy l la×
E.grand
86.67±1.21 a 87.27±1.16 b 90.30±1.00 b
柠檬桉
E.cit riod ora 73.33±1.00 c 84.85±0.61 b 91.52±0.70 b
2.3　桉属植物干粉对空心菜线虫病的防效
盆栽试验结果表明 ,柠檬桉和杂交桉的茎 、叶干
粉对空心菜上的爪哇根结线虫病均有较好的防治效
果 ,并随干粉处理浓度的增加 ,防治效果逐渐增大 。
各处理组植株根结中的雌虫数和卵囊中的卵粒数均
明显少于对照组 ,地上部鲜质量明显高于对照组 ,但
对土壤中 2龄幼虫的数量影响不大(表 3)。
2.4　桉属植物干粉对黄瓜线虫病的防效
盆栽试验结果表明 ,柠檬桉和杂交桉的茎 、叶干
粉对黄瓜上的爪哇根结线虫病均有较好的防治效
果 ,且防治效果随干粉含量的增加而增强(表 4)。
与对照相比 ,各处理组植株根结中的雌虫 、卵囊中的
卵粒数和土壤中的 2 龄幼虫数量均明显减少 ,但桉
属植物干粉对植株地上部鲜质量的影响不大 。
697
　　 华 中 农 业 大 学 学 报 第 29 卷　
表 3　桉属植物干粉对空心菜上爪哇根结线虫病的防治效果
Table 3　Control effect of dried powder of Eucalyp tus plants on water spinach root-knot disease caused by M.javanica
处理
T reatm ent
地上部鲜质量/ g
Fresh mass
of shoot
每株根结数
Gall s per plant
每根结雌虫数
Females per gall
每卵囊卵粒数
Eggs per
egg mass
每 100 m L土
中 2龄幼虫数
Second-stage
juveniles
per 100 mL soil
防治效果/ %
C ont rol
ef fect
A 1 34.59±0.24 h 248.56±3.22 b 10.89±0.20 b 757.89±3.30 b 535.89±5.83 a 25.46 i
A 2 37.57±0.22 f 178.11±4.39 d 7.11±0.20 d 676.44±5.53 d 535.78±7.10 a 46.58 g
A 3 42.30±0.26c 123.78±3.85 f 3.56±0.18 e 634.56±5.23 e 528.78±5.46 a 62.88 e
B1 37.70±0.20 f 120.44±4.18 fg 7.11±0.20 d 626.44±3.69 e 525.78±6.79 a 63.88 de
B2 45.82±0.12 b 78.44±3.26 i 3.44±0.18 e 573.78±3.77 g 525.56±5.40 a 76.47 b
B3 50.22±0.17 a 47.33±2.70 j 1.33±0.17 f 516.78±4.59 i 523.22±5.41 a 85.80 a
C1 32.04±0.23 i 235.33±4.26 c 10.00±0.24 c 735.22±3.82 c 536.56±3.94 a 29.42 h
C2 36.26±0.13 g 146.44±2.91 e 6.78±0.15 d 674.33±4.09 d 534.67±5.89 a 56.08 f
C3 40.46±0.34 d 113.00±3.77 g 3.67±0.17 e 621.89±3.48 e 532.00±5.66 a 66.11 d
D1 38.49±0.17 e 99.22±3.20 h 6.78±0.15 d 588.67±4.23 f 528.44±5.50 a 70.24 c
D2 46.04±0.20 b 72.00±1.99 i 3.44±0.18 e 536.67±2.94 h 525.33±5.00 a 78.41 b
D3 50.20±0.20 a 40.78±1.94 j 1.11±0.11 f 481.56±5.09 j 522.89±5.08 a 87.77 a
对照 CK 30.60±0.41 j 333.44±4.84 a 12.11±0.26 a 815.78±13.68 a 536.11±5.28 a 　
表 4　桉属植物干粉末对黄瓜上爪哇根结线虫病的防治效果
Table 4　Control effect of dried powder of Eucalyp tus plants on cucumber root-knot disease caused by M.javanica
处理
T reatm ent
地上部鲜质量/ g
Fresh mass
of shoot
每株根结数
Gall s per plant
每根结雌虫数
Females per gall
每卵囊卵粒数
Eggs per
egg mass
每 100 m L土
中 2龄幼虫数
Second-stage
juveniles
per 100 mL soil
防治效果/ %
C ont rol
ef fect
A 1 23.80±0.24 b 170.20±2.46 b 8.60±0.24 b 416.80±3.01 b 351.40±3.75 b 31.20 h
A 2 24.22±0.29 ab 146.20±2.91 c 7.60±0.24 c 372.80±1.77 c 330.00±3.08 d 40.91 g
A 3 24.46±0.37 ab 123.60±2.16 e 6.40±0.24 d 329.00±2.77 e 312.60±2.79 ef 50.04 e
B1 24.28±.32 ab 126.20±2.42 de 5.60±0.24 ef 256.80±3.28 f 339.80±2.15 c 49.39 ef
B2 24.86±.024 a 79.20±2.97 g 3.40±0.24 g 208.60±3.85 h 317.80±2.31 e 67.99 c
B3 24.84±0.34 a 59.20±2.85 h 1.80±0.20 h 149.80±2.29 i 296.40±2.71 g 76.07 b
C1 23.78±0.18 b 148.80±2.48 c 8.60±0.24 b 412.20±3.68 b 348.20±2.35 bc 39.85 g
C2 24.20±0.24 ab 113.60±2.84 d 7.40±0.24 c 356.60±2.38 d 325.80±2.96 d 46.81 f
C3 24.18±0.18 ab 95.20±2.85 f 6.20±0.20 de 325.00±2.12 e 306.20±3.76 f 61.52 d
D1 23.96±0.12 ab 92.80±2.92 f 5.20±0.20 f 247.20±2.35 g 321.60±3.56 de 62.49 d
D2 24.50±0.35 ab 72.60±2.58 g 3.20±0.20 g 202.80±2.85 h 308.40±3.79 f 70.65 c
D3 24.72±0.24 ab 48.00±1.48 i 1.60±2.24 h 145.00±2.28 i 286.60±2.79 h 80.60 a
对照 CK 24.30±0.28 ab 247.40±2.42 a 9.60±0.24 a 484.80±3.17 a 362.20±3.41 a
3　讨　论
室内生测试验结果表明 ,柠檬桉 、杂交桉及尾叶
桉小枝条乙醇抽提物 ,对爪哇根结线虫 2龄幼虫表
现出强杀虫活性 ,并能显著抑制卵的孵化 ,研究结果
与 Shahnaz等[ 3] 的研究报道类似 。Kanta 等[ 7] 研究
表明 ,0.5%桉树叶的甲醇提取物对南方根结线虫 2
龄幼虫的死亡率达到 100%。Pandey 等[ 9] 也发现 ,
柠檬桉精油对南方根结线虫 2龄幼虫具有很强的杀
虫活性 ,防治效果与克百威相仿。
盆栽试验结果表明 ,柠檬桉和杂交桉的茎 、叶干
粉拌土处理空心菜和黄瓜后 ,对其哇根结线虫病均
有很好的防治效果 。Khan等[ 5] 发现柠檬桉乙醇抽
提物可以有效控制木瓜上的南方根结线虫 ,明显减
少土壤中的幼虫数量和根上的卵囊 。Rather 等[ 10]
还发现将剁碎的桉树叶拌入土中也可以降低南方根
结线虫的根结指数。以桉属植物为材料 ,研究对空
心菜及黄瓜爪哇根结线虫病的防治 ,目前国内外还
未见报道 。
本试验研究结果表明 ,桉属植物枝条及茎秆中
存在杀线虫活性成分 ,而桉属植物在我国资源丰富 ,
有望直接利用开发为杀线虫植物资源 ,因此进一步
弄清楚杀线虫活性成分 ,明确该活性成分的杀线机
理 ,为深入研究并开发该杀线虫植物资源 ,具有重要
698
　第 6 期 王惠惠 等:3 种桉属植物乙醇抽提物对爪哇根结线虫的毒杀活性 　
的理论与现实意义。有关这方面的研究工作正在进
行中 。
参　考　文　献
[ 1] 　文艳华 ,冯志新 ,徐汉虹 ,等.植物抽提物对几种植物病原线虫
的杀线活性筛选[ J] .华中农业大学学报, 2001 , 20(3):235-
238.
[ 2] 　CHI TWOOD D J.Phytoch emical based st rategies for nematode
cont rol[ J] .Annual Review of Phytopathology , 2002 , 40:221-
249.
[ 3] 　SHA HNAZ DAWA R YOUN US S M , ZAKI M J.Use of Eu-
calyp tu s sp., in the con t rol of Meloido gyne javan ica root
k not nematode[ J] .Pakistan Jou rnal of Botany , 2007 , 39(6):
2209-2214.
[ 4] 　KHA N A , SAVED M , SHA UKA T S S.Effect of fou r plant
ext ract s on nematodes as sociated w ith mango and i ts yield[ J] .
Pakis tan Journal of Nematology , 2010 , 28(1):123-127.
[ 5] 　KHAN A , SAYED M , SHAUKATS S , et al.Ef ficacy of four
p lan t ex t racts on nematodes as sociated w ith papaya in Sindh ,
Pakis tan[ J] .Nematologia M editerranea , 2008 , 36(1):93-98.
[ 6] 　JAYAKUMAR J , RAMAKRISHNAN S , RAJENDRAN G.
Bioeff icacy of b otanical amendments for the man agemen t of
root-knot nematode , Meloidog yne incogni ta in tomato[ J] .In-
dian Journal of Plan t Protection , 2005 , 33(2):305-306.
[ 7] 　KAM TA GILL MEHT A S K , MALIK M S , MA LIK O P ,
et al.T oxicity of methanolic leaf ex t ract s and essential oi ls
f rom various plan ts to the root-knot nematode Meloidog yne in-
cogni ta[ J] .Nematologia Mediterran ea , 2001, 29(2):219-222.
[ 8] 　PANDEY R C , DWIVEDI B K.C om parat ive study of diff eren t
plan t ext racts for their nemat icidal potent ial[ J] .Current Nem-
atology , 2000 , 11(1/ 2):39-43.
[ 9] 　PAMDEY R , KALRA A , TAMDON S , et al.Essent ial oi ls as
potent s ou rces of n ematicidal com pounds[ J] .Journal of Phyto-
pathology , 2000 , 148(7/ 8):501-502.
[ 10] RAT HER M A , FA HEEM AHM AD S IDDIQUI M A.Nem at i-
cidal ef fect of ch op ped leaves of some selected plants against
root-knot nematode , Meloidog yne inco gni ta on tomato[ J] .In-
t ernat ional Journal of Plan t Sciences , 2008 , 3(2):339-341.
Nematicidal Activity of Ethanol Extracts from Eucalyptus
Plants against Meloidogyne j avanica
WANG Hui-hui　LIAO Jin-ling　WEN Yan-hua
Collegeo f Resource and Env ironment , South China Agricultural University ,
Guangz hou 510642 , China
Abstract 　Ethanol ext racts f rom twig s of Eucalyptus plants (E.citriodora , E.urophy la ×
E.grand , E.urophy la)were assessed for their nematicidal activi ty ag ainst Meloidogyne javanica by
using dipping me thod.The resul ts demonstrated that al l 3 plant ex t racts show ed st rong nemat icidal
activi ty against the second stag e juveniles of Meloidogyne javanicaand inhibi ted its egg hatching;w ith
20 mg/mL concentration and 72 h treatment , the mor tality of juveniles w as about 90%.Cucumber and
w ater spinach pot trial show ed , when 15 mL Eucalyptus plants tw ig s pow der w as applied to 1 L soil ,
the root knot disease caused by Meloidogyne javanica could be ef fectively controlled , and the galls and
the egg s of egg mass we re reduced.
Key words　Eucaly ptus plants;Meloidogyne javanica;nematicidal activity
(责任编辑:陈红叶)
699