全 文 ：第 33卷　第 10期 西北农林科技大学学报 (自然科学版 ) Vo l. 33 No. 10
2005年 10月 Jour. o f No r th west Sci-Tech Univ . of Ag ri. and Fo r. ( Nat. Sci. Ed. ) Oct. 2005
红豆杉属植物组织与细胞培养影响因素研究进展
李　健 ,宋晓平 ,陈树林
(西北农林科技大学 动物科技学院 ,陕西杨凌 712100)
　　 [摘　要 ]　红豆杉中的紫杉醇具有抗肿瘤活性 ,直接从植物中提取紫杉醇的传统生产方法 ,不仅产量低 ,而且
会对红豆杉野生资源造成严重破坏 ,而组织与细胞培养是一种极具潜力的紫杉醇生产技术。 文章对近年来国内外
红豆杉属植物组织与细胞培养工作中的培养基、培养条件、外植体选择、诱导子以及褐变等影响因素的研究情况进
行了全面系统地综述。
[关键词 ]　红豆杉 ;培养基 ;培养条件 ;外植体 ;诱导子 ;褐变现象
[中图分类号 ]　 S791. 490. 4　　　　 [文献标识码 ]　 A [文章编号 ]　 1671-9387( 2005) 10-0042-05
　　紫杉醇 ( tax ol )是 20世纪 70年代由 Wani从短
叶红豆杉 ( Taxus brevi folia )树皮中提取出来的具
有独特抗癌作用的天然产物。 自 1992-12美国食品
与药品管理局 ( FDA)批准将其用于治疗卵巢癌以
来 ,紫杉醇已在多个国家获准上市 ,中国医学科学院
药物研究所和海口制药厂已于 1995-10获得其新药
证书。但红豆杉属植物的野生资源十分有限 ,且生长
缓慢 ,体内紫杉醇含量亦很低 ,所以紫杉醇的药源问
题一直颇受关注 ,而且至今仍未得到很好的解决。红
豆杉属植物组织与细胞培养技术 ,是一种很有潜力
的紫杉醇生产方法。本文对国内外关于红豆杉属植
物组织与细胞培养方面的研究作以综述。
1　培养基的种类与组成成分
1. 1　培养基的种类
　　刘佳佳等 [1 ]从红豆杉愈伤组织的诱导、继代保
存、生长和紫杉醇的生产等 4个不同方面对培养基
进行了筛选 ,结果表明 ,在红豆杉愈伤组织的诱导方
面 , M S培养基优于 B5 , N6 , SHN ( Schenk & Hilde-
brandt New )等培养基 ,以当年生嫩茎为外植体 ,愈
伤组织诱导率可达 100% ;继代培养时以 B5培养基
为好 ;愈伤组织的生长以 B5和 SHN培养基为好 ;而
紫杉醇的生产以 MS培养基为好。另外 ,有研究者 [ 2]
指出 ,在 MS, Miller, Nagata和 Abou-Man 4种培养
基中 ,红豆杉细胞均生长较快 ;其中在 Abou-Man培
养基上生长的红豆杉细胞干重最高 ,但紫杉醇未被
检出 ; H培养基上的红豆杉细胞中紫杉醇的含量可
高达细胞干重的 0. 11% ,但是生长缓慢。因此 ,建议
以 Abou-Man培养基为其基本生长培养基 ,以 H培
养基为其基本生产培养基。冉懋雄 [3 ]认为 ,红豆杉愈
伤组织的诱导 ,应当以 B5培养基为基础 ,并且液体
培养基比固体培养基更有利于缩短从诱导到悬浮培
养的生产周期。
总的来说 ,关于红豆杉培养物在不同生长阶段
应该采用何种培养基的问题 ,各文献中提出的观点
差异较大 ,这可能与试验所用材料的种属、生理状
态、取材部位、采集时间等多种因素有关 ,在实际操
作中 ,需要根据具体情况进行选择和优化。
1. 2　碳　源
碳源作为植物生长的基质和能量来源 ,对细胞
生长和次级代谢产物的生产有很大影响。 Kim等 [4 ]
在短叶红豆杉细胞悬浮培养中 ,比较了 20 g /L的蔗
糖、乳糖、半乳糖、葡萄糖、果糖对细胞生长的影响 ,
发现半乳糖和蔗糖最有利于细胞生长。 在高起始糖
浓度的培养基中 ,果糖最能刺激紫杉醇的合成 ,与高
起始糖浓度培养的细胞相比 ,采用补糖的方法 ,紫杉
醇产量在静止期可显著增加。元英进等 [5 ]的研究发
现 ,南方红豆杉 ( Taxas chinensis var. mairei Cheng
et L K Fu)细胞对蔗糖的消耗有一个临界点 ,即培
养液中总残留有 1 g /L的蔗糖不能被吸收 ,而培养
[收稿日期 ]　 2005-01-10
[基金项目 ]　国家自然科学基金项目 ( 30170683)
[作者简介 ]　李　健 ( 1980- ) ,男 ,山西大同人 ,在读硕士 ,主要从事中药化学成分及药理作用的研究。
[通讯作者 ]　宋晓平 ( 1963- ) ,男 ,陕西周至人 ,教授 ,博士 ,硕士生导师 ,主要从事中药化学成分及药理作用的研究。 E-mai l: s xpxbnl
@ 163. com
DOI : 10. 13207 /j . cnki . jnwaf u. 2005. 10. 010
液中浓度为 30 g /L的蔗糖对细胞生长和产物合成
最为有利。蔗糖大部分被降解成葡萄糖和果糖 ,其中
葡萄糖有利于细胞的前期生长以获得大量的悬浮细
胞 ,在中期添加果糖有利于细胞培养后期合成紫杉
烷类化合物。
1. 3　氮　源
在氮源组成中 ,较低的 NH+4 /NO-3 比有利于细
胞的快速生长 ,而其他无机盐浓度与细胞生长之间
不存在这种关系。陈永勤等 [6 ]报道 ,培养基中高浓度
的 NO-3 有利于云南红豆杉 ( Taxas yunnanensis
Cheng et L K Fu)愈伤组织的生长 ,而高浓度的
N H
+
4 则抑制愈伤组织的生长 ,但可显著提高紫杉醇
的含量。在无机氮全部为铵态氮的处理中 ,愈伤组织
接种 1周后就变成砖红色 ,增殖较少 ,其生长指数显
著低于对照 ,但紫杉醇含量较对照高 1倍。
1. 4　前体化合物
在红豆杉属植物细胞培养过程中 ,有时培养细
胞不能按理论产率合成紫杉醇 ,其中一个很重要的
原因就是缺少紫杉醇合成的前体 ,此时如在培养物
中加入外源性前体 ,就会增加紫杉醇产量。 因此 ,选
择适当的前体相当重要。胡萍等 [7 ]认为 ,在红豆杉细
胞悬浮培养过程中 ,添加苯丙氨酸对其细胞生长有
利 ,而添加苯甲酸钠对其细胞生长不利 ,这是因为酸
性条件下苯甲酸钠部分以苯甲酸形式存在 ,苯甲酸
能进入细胞内部 ,扰乱细胞内酶的代谢 ,使细胞生长
受到影响。但较低浓度的苯甲酸钠对细胞的生长影
响不大。
但同样一种前体 ,在细胞的不同生长时期加入 ,
对细胞的生长和次生代谢产物合成的作用大不相
同 ,有时甚至还会起抑制作用。 在对中国红豆杉
( Taxus chinensis )细胞紫杉醇合成途径的研究 [8 ]中
发现 ,在培养第 1天添加 0. 2 mmol /L的苯丙氨酸和
苯基甘氨酸 ,到第 15天 ,紫杉醇产量较对照提高 50
% ,但添加更高浓度的前体则不能进一步提高紫杉
醇的积累 ;而在培养第 7天时添加这 2种前体 ,紫杉
醇的产量则没有提高。其可能的原因是 ,细胞中并不
缺乏苯丙氨酸等前体 ,而是缺乏将苯丙氨酸或苯基
甘氨酸转化为苯基异色氨酸的酶 ,该酶活力的变化
导致细胞无法接受更高浓度的前体和在某些时候不
能将前体纳入正确的合成途径。
1. 5　中间代谢产物和植物生长激素
孙彬贤等 [9 ]的研究发现 ,代谢中间产物　牛儿
醇、　牛儿　牛儿醇、蒎烯和甲瓦龙酸在合适的浓度
条件下 ,对南方红豆杉培养细胞的生长没有明显影
响 ,并且蒎烯对其生长还有一定促进作用 ,说明这 4
种代谢中间产物对细胞生长无毒害作用 ,可以被吸
收和利用。在合适的浓度时 ,上述 4种代谢中间产物
对南方红豆杉培养细胞中紫杉醇含量的影响不同。
其中 ,　牛儿醇和　牛儿　牛儿醇对紫杉醇含量的
促进作用最为明显 ,分别比空白对照提高了 73%和
91% ,甲瓦龙酸的作用居中 ( 32% ) ,而蒎烯基本没
有作用。
不同的激素种类及其用量水平直接影响细胞的
生长和分化。盛长忠等 [10 ]对南方红豆杉叶愈伤组织
的诱导结果表明 , 2, 4-D比萘乙酸 ( N AA)更有利于
愈伤组织的形成。培养基中添加适当浓度的水解酪
蛋白 ( CA)、苯丙氨酸 ( Phe)和乙酸钠能促进南方红
豆杉愈伤组织的生长和紫杉醇的积累。
2　培养条件
2. 1　光　照
　　在离体无菌培养条件下 ,细胞处于异养状态 ,且
培养基中已经添加了足够的碳源 ,光照并非用来提
供光合作用的能量 ,但是不同的光照时间和光照强
度仍然会对细胞代谢产生一定的影响。 Fett-Neto
等 [11 ]研究了白光对东北红豆杉愈伤组织和悬浮培
养细胞中紫杉醇积累的影响发现 ,暗培养时悬浮细
胞的生长量是白光培养下的 2～ 3倍 ,紫杉醇的产量
也是白光培养下的 3倍。其原因可能有 2个: 一是紫
杉醇 (二萜 )的远程前体是甲戊二羟酸 ( MV A) ,而
MV A的合成量与甲戊二羟酸酰辅酶 A还原酶
( HM GR)的活性正相关 ,光照会导致 HMGR的活性
降低 ,最终导致紫杉醇积累的降低 ;二是光照会抑制
紫杉醇的胞外分泌 ,从而可能导致胞内合成过程的
反馈性抑制。
2. 2　温　度
虽然大多数植物细胞的适宜生长温度范围较宽
( 22～ 30℃ ) ,但在红豆杉细胞生长和紫杉醇合成过
程中 ,适宜温度还是起着一定作用。 周爱文等 [12 ]研
究了低温处理对红豆杉细胞悬浮培养的影响 ,比较
了分别在 2, 4, 6, 8℃下处理 12, 24, 36 h以及恢复
12, 24, 36 h对红豆杉细胞分裂指数的影响。结果表
明 ,在 2℃下处理 12 h,恢复 12 h ,红豆杉细胞分裂指
数提高了 115% ,说明低温对其细胞生长具有诱导
作用。 Choi等 [ 13]发现 ,中国红豆杉在 24℃下培养一
段时间后 ,升高温度至 29℃ ,再培养 14～ 21 d时 ,紫
杉醇含量可达到 137. 5 mg /L ,如果 21 d后仍持续保
持 29℃ ,紫杉醇含量可在这一峰值保持 42 d。由此
43第 10期 李　健等: 红豆杉属植物组织与细胞培养影响因素研究进展
可见 ,温度与紫杉醇合成途径之间有明显的相关性。
2. 3　 pH值
Fet t-Neto等 [14 ]曾指出 ,培养基 pH值在 4. 8～
7. 8时 ,东北红豆杉愈伤组织的生长没有明显差异。
但是盛长忠等 [15 ]研究了培养基 pH值对东北红豆杉
和南方红豆杉愈伤组织生长、紫杉醇含量与苯丙氨
酸解氨酶 ( PAL)活性的影响后 ,提出了不同的观点 ,
认为 pH值的高低对红豆杉愈伤组织生长及紫杉醇
含量影响很大 ,且 PAL活性的大小与紫杉醇含量呈
正相关 ,即 PAL活性高 ,紫杉醇含量往往也高。这可
能是因为:在 PAL的作用下 ,由苯丙氨酸脱氨基而
形成的肉桂酸参与了 Wintersein酸的形成 ,而 Win-
tersein酸是紫杉醇合成的前体。值得注意的是 ,有
利于愈伤组织生长的 pH值却不利于紫杉醇的积
累 ,而且往往是愈伤组织生长越好 ,紫杉醇含量越
低 ;生长状态较差的 ,紫杉醇含量反而可能增高。
2. 4　气　体
植物细胞在悬浮培养时需要氧气 ( O2 ) ,同时也
能非光合地固定一定浓度的二氧化碳 ( CO2 ) ,只有
O2和 CO2的浓度达到某一平衡点时 ,细胞才会很好
地生长。乙烯是植物细胞在不良刺激下产生的一种
防御性气体 ,对紫杉醇产量的提高不利。丁如贤
等 [16 ]报道 ,对于浆果红豆杉 ( Taxus baccata )的悬浮
培养细胞 ,在培养基中维持低浓度的 CO2并移走乙
烯 ,同时提供充足的 O2能够促进细胞生长 ,增加紫
杉醇的产量。
3　外植体的选择
红豆杉属植物细胞培养都是用愈伤组织建立起
来的 ,所以选择适当的外植体就显得十分重要。不同
种属应优选不同的组织作为外植体。陈永勤等 [17 ]比
较了云南红豆杉、南方红豆杉、杂种红豆杉 ( Taxus
media Rehd)和东北红豆杉愈伤组织的诱导情况 ,
结果几乎 100%的云南红豆杉茎段都可以形成愈伤
组织 ,但由于其植株来源不同 ,愈伤组织形成的迟早
和形成可继代愈伤组织的比率差异较大 ,如早春取
样的茎段形成愈伤组织的时间要比秋季取样的早得
多。东北红豆杉在秋季取样时 ,不仅其茎段形成愈伤
组织的时间晚、比率低 ,而且大部分外植体上的愈伤
组织在形成后不久 ,就由淡黄色变成棕红色 ,停止生
长 ,因而较难形成较大的愈伤组织块而进行继代培
养 ;而春、夏季取样的茎段 ,其形成愈伤组织的颜色
浅 ,为淡黄色。南方红豆杉和杂种红豆杉的茎段都比
较容易形成愈伤组织 ,南方红豆杉在含2. 0 mg /L 2,
4-D的培养基上诱导效果最好 ,而杂种红豆杉的茎
段和叶片在愈伤组织形成的时间早晚方面没有差
异 ,但叶片形成愈伤组织的比率要比茎段低得多。
目前 ,在关于红豆杉属植物组织和细胞培养的
文献 [18～ 20 ]中 ,大多都是采用茎段作为外植体来诱导
愈伤组织的。但是 ,以茎段作为外植体 ,材料的污染
率很高 ,给诱导工作带来较大困难。从短叶红豆杉中
分离得到的内生真菌至少就有 300多种 ,因此 ,外植
体特别是老的外植体受到真菌污染的情况经常出
现。杨礼香等 [21 ]发现 ,以芽作为外植体 ,可以解决这
个问题 ,而且由芽诱导的愈伤组织生长速度较快。
4　诱导子
4. 1　生物源性诱导子
　　孙彬贤等 [9 ]证明 ,不同浓度茉莉酸甲酯对红豆
杉细胞生长的影响虽然轻微 ,但对紫杉醇合成有明
显的促进作用。其中 ,在起始培养时加入浓度为 100
μmol /L茉莉酸甲酯时 ,培养细胞中紫杉醇含量增加
10倍 ,达到 5. 38 mg /L。另外 ,系统中甲基茉莉酮酸
酯 ( M JA)和乙烯的相互作用对紫杉醇的积累很重
要 ,只有当乙烯浓度达饱和后 , M JA才表现出诱导
植物细胞 Osmo tin启动子的能力 ,促进紫杉醇的积
累 [22 ]。
花生四烯酸 ( Arachidonic Acid)是另一种能显
著提高紫杉醇积累的诱导子。 在中国红豆杉悬浮细
胞培养中 ,对每克接种细胞在培养第 1天添加 5μg
的花生四烯酸 ,紫杉醇产量比对照提高了 9倍多 [23 ]。
孙彬贤等 [9 ]的研究指出 ,不同浓度的花生四烯酸对
南方红豆杉培养细胞的生长与紫杉醇含量的影响基
本相似 ,即轻微抑制细胞生长而促进紫杉醇的合成。
其中 ,当花生四烯酸浓度为 3. 2μmo l /L时诱导作用
最明显 ,细胞生长是空白对照的 85% ,而紫杉醇含
量增加 1倍。
4. 2　非生物源性诱导子
葛志强等 [24 ]的研究指出 ,在南方红豆杉细胞悬
浮培养体系中加入适当浓度的铈 ( Ce4+ ) ,对其增殖
能力、细胞活力及紫杉醇含量均有明显的促进作用 ;
Ce
4+ 的浓度与其对细胞产生的生物效应成正相关 ,
同时细胞自身所处的生理状态也影响稀土离子的作
用结果。李景川等 [25 ]研究了 Ce4+对南方红豆杉细胞
可溶性蛋白合成和细胞活力的影响 ,发现低浓度
Ce
4+ ( 0. 10 mmo l /L)可显著提高可溶性蛋白的合成
强度和细胞活力 ,高浓度 Ce4+ ( 5. 00 mmol /L )对细
胞表现出强伤害作用 , 适宜浓度 Ce4+ ( 1. 00
44 西北农林科技大学学报 (自然科学版 ) 第 33卷
mmol /L )在短期内可大幅度提高紫杉醇的合成速
度 ,达到最高积累。李家儒等 [26 ]在中国红豆杉悬浮
培养中添加 CuCl2 ,证实 Cu2+ 能够促进紫杉醇的形
成 ,最佳加入时期为细胞指数生长末期 ,最适 Cu2+
浓度为 30μmol /L;诱导中培养细胞的可溶性蛋白
质含量、 PAL活性及培养基 pH值均有变化 ,他们认
为 Cu2+ 诱导处理可能促进细胞内与紫杉醇合成相
关的酶的合成 ,但有关 Cu2+ 促进红豆杉培养细胞中
紫杉醇合成的作用机制尚缺少深入的研究。
用超声波处理植物细胞 ,是一种既可保持细胞
正常生长又能有效刺激胞内次生代谢物释放的简易
操作方法。张姝等 [27 ]分析了超声波对悬浮培养的中
国红豆杉细胞的生长、紫杉醇合成及释放的影响后
指出 ,细胞对不同强度及不同作用时间的超声波反
应不同。用 38 kHz的超声波对悬浮细胞作用 120 s,
紫杉醇胞外释放率由对照的约 10%提高到 40%～
50% ,总产量提高了 47% 。
5　褐变现象
传统观点认为 ,植物组织在切割时溢出的一些
酚类物质 ,可被 O2或酶类催化氧化成有毒的醌类 ,
呈现褐色乃至黑色 ,导致细胞死亡 ,这就是褐变现
象。关于褐变现象的原因 ,近年来有人提出了不同的
观点。 陈永勤等 [ 28]在试验中 ,向培养基中添加酚类
物质的吸附剂 (乙烯吡咯烷酮 , PV P)和抗氧化剂 (抗
坏血酸 , Vc)发现 ,这并不能有效地抑制云南红豆杉
愈伤组织系的褐变 ,认为红豆杉属植物愈伤组织的
褐变可能与其细胞中谷氨酰胺 -谷氨酸循环受阻以
及黄酮和类黄酮色素的形成有关。据此 ,他们向培养
体系中添加 0. 30 mg /L的 L-谷氨酰胺 ,用以建立转
移氨基的谷氨酰胺 -谷氨酸循环 ;添加 0. 074～ 0. 22
mg /L的桂皮酸 ,用以抑制苯丙烷类物质代谢的关
键酶- PAL的活性 ,阻止黄酮和类黄酮植物色素的
形成。结果表明 ,添加这 2种物质可以改善愈伤组织
的严重褐变现象 ,使其能长期继代培养。
盛长忠等 [29 ]研究表明 ,在培养红豆杉愈伤组织
时 ,培养基中添加一定量的 Vc、活性炭、水解酪蛋白
( CA)、赤霉素 ( GA3 )、脱落酸 ( ABA)、果糖和葡萄糖
等外源物质 ,能较明显地抑制过氧化物酶和多酚氧
化酶活性 ,减轻愈伤组织和培养基褐变的程度 ,从而
促进愈伤组织的生长。梅兴国等 [30 ]研究了活性炭对
红豆杉细胞悬浮培养褐变的抑制作用 ,指出活性炭
主要是通过吸附分泌到细胞外的有害代谢产物而发
挥作用 ,并优化了活性炭培养基 ,确定活性炭加入的
最佳时间是对数生长期。黄浩等 [31 ]研究了 8种药剂
对红豆杉愈伤组织的抗褐变作用 ,证实活性炭
( 1 000 g /L)、水解乳蛋白 ( 600 mg /L )和植酸 ( 100
mg /L) 3种药剂的抗褐变效果最好 ,且对多酚氧化
酶的抑制效果也最好。
6　小　结
目前 ,从红豆杉组织与细胞培养中获得的紫杉
醇含量已经很高 ,具备了规模化、工业化生产的条
件。 但从实验室研究到工业化生产 ,其间仍有许多
“瓶颈”问题需要解决。如用离体培养方法生产的紫
杉醇 ,产量和稳定性还都不尽如人意 ,许多反应机制
需要进一步研究 ,包括由前体物质生成紫杉醇的过
程中有哪些限速酶类 ,诱导子作用的分子机制以及
各种中间产物相互作用的机理等 ,都有待于从分子
水平上进行阐明。紫杉醇属于红豆杉属植物细胞的
次生代谢产物 ,其产量随细胞生长条件的改善而有
所下降 ,这样就造成了细胞生长和紫杉醇积累之间
的矛盾。因此 ,建立反映细胞生长与紫杉醇积累关系
的数学模型 ,找到二者的最佳平衡点 ,是实现工业化
生产的必要条件。
[参考文献 ]
[1 ]　刘佳佳 ,郭　勇 .红豆杉细胞培养生产紫杉醇研究进展 [ J] .经济林研究 , 1999, 17( 2): 46- 48.
[2 ]　叶　勤 .现代生物技术原理及其应用 [M ] .北京:中国轻工业出版社 , 2003.
[3 ]　冉懋雄 .中药组织培养实用技术 [M ] .北京:科学技术文献出版社 , 2004.
[4 ]　 Kim J H, Yun J H, Hw ang Y S, et al. Production of taxol and related taxan es in Ta xus brevifol ia cell cul tures: ef fect of s ugar [ J] . Biotech-
nol Let t , 1995, 17: 101- 106.
[5 ]　元英进 ,李　春 ,胡宗定 .南方红豆杉悬浮培养细胞中糖代谢的波动性及其与紫杉烷合成关系的研究 [ J] .石河子大学学报 (自然科学版 ) ,
2001, 5( 2): 109- 112.
[6 ]　陈永勤 ,朱蔚华 ,吴蕴祺 ,等 .组培条件对云南红豆杉愈伤组织生长和形成紫杉醇的影响 [ J] .中国中药杂志 , 2000, 25( 5): 269- 272.
[7 ]　胡　萍 ,元英进 .诱导子和前体物质对红豆杉细胞培养的影响 [ J ].中国医药工业杂志 , 2002, 33( 5): 223- 225.
45第 10期 李　健等: 红豆杉属植物组织与细胞培养影响因素研究进展
[8 ]　 Srinivas an V, Ciddi V , Bringi V, et al. Metabolic inhibi tors, elici tors , and precurso rs as tools for probing yield limi tat ion in taxane produc-
tion by Taxus chinensis cell cul tu re[ J] . Biotech nol Prog, 1996, 12: 457- 465.
[9 ]　孙彬贤 ,翁颖琦 ,刘　涤 ,等 .代谢中间产物和诱导子对南方红豆杉培养细胞生长和紫杉醇含量的影响 [ J] .上海中医药大学学报 , 2000, 14
( 3): 54- 56.
[10 ]　盛长忠 ,王淑芳 ,王宁宁 ,等 .南方红豆杉愈伤组织培养的研究 [ J ].中草药 , 2000, 31( 2): 130- 132.
[11 ]　 Fet t-Neto A G, Pennington J J, Dicosm o F. Effect of whi te ligh t on tax ol and baccatinⅢ accumulat ion in cel l cultures of Taxus cusp id ate
Sieb and Zucc[ J ]. J Ph ysiol, 1995, 146: 584- 590.
[12 ]　周爱文 ,梅兴国 ,柯　铁 ,等 .低温诱导红豆杉细胞同步化的研究 [ J ].武汉化工学院学报 , 2001, 23( 1): 12- 14.
[13 ]　 Choi H, Kim S, Son J, et al. Enhancement of paclit ax el production b y tem perature shi f t in suspension cul tu re of Taxus chinensis [ J ]. En-
zyne and Microb Tech nol, 2000, 27( 8): 593- 598.
[14 ]　 Fet t-Neto A G, M elanson S J, Sakata K, et al. Improved grow th and taxol yield in dev eloping calli of Taxus cuspid ate b y medium compo-
si ti on m odi fication [ J ]. Bio /Technology, 1993, 11: 731- 734.
[15 ]　盛长忠 ,王淑芳 . pH对红豆杉愈伤组织生长、 PAL活性和紫杉醇含量的影响 [ J ].中草药 , 2001, 32(10): 929- 931.
[16 ]　丁如贤 ,王　昊 .红豆杉的生物工程研究进展 [ J] .药学实践杂志 , 2000, 18( 5): 274- 276.
[17 ]　陈永勤 ,朱蔚华 ,吴蕴祺 ,等 .不同种类红豆杉愈伤组织的诱导及紫杉醇含量的差异 [ J] .中草药 , 2000, 31( 3): 216- 218.
[18 ]　 Hirasuna T J, Pestchank er L J, S riniv san V, et al. Tax ol production in su spension cultures of Tax usbaccata [ J] . Plan t Cell Tis sue and Or-
gan Cul tu re, 1996, 44: 95- 102.
[ 19 ]　 Jazi ri M , Zhi ri A, Guo Y W , et al. Tax us sp. cel l, tis sue and organ cu ltures as alternative sou rces for taxoids production: a li teratu re
survey [ J] . Plant Cell Tissue and Organ Cul tu re, 1996, 45: 59- 75.
[20 ]　甘烦远 ,郑光植 ,彭丽萍 ,等 .云南红豆杉细胞的悬浮培养 [ J].植物生理学报 , 1997, 23( 1): 43- 46.
[21 ]　杨礼香 ,周诗毅 .南方红豆杉组织培养和紫杉醇含量测定 [ J].华中师范大学学报 (自然科学版 ) , 2001, 34( 4): 453- 455.
[22 ]　Xu Y, Chang P, Liu D, et al. Plant defense genes are s ynergi st ically induced by eth ylene and meth yl jasmonate[ J ]. Plant Cel l, 1994, ( 6):
1077- 1085.
[23 ]　 Ciddi V , Srinivasan V, Shuler M L. Elici tatio r of Tax us sp. cell cul tures for production of tax ol [ J] . Biotech nol Let t, 1995, 17: 1343-
1346.
[24 ]　葛志强 ,李景川 ,元英进 ,等 . Ce4+对悬浮培养南方红豆杉细胞 DN A含量和 PAL活性的影响 [ J].稀土 , 2000, 21( 5): 35- 37.
[25]　李景川 ,马忠海 ,孙安慈 ,等 .铈对悬浮培养南方红豆杉细胞可溶性蛋白和紫杉醇合成动态的影响 [ J] .中国稀土学报 , 2001, 19 ( 2):
162- 166.
[26 ]　李家儒 ,管志勇 ,刘曼西 ,等 . Cu2+ 对红豆杉培养细胞中紫杉醇形成的影响 [ J] .华中农业大学学报 , 1999, 18( 2): 117- 120.
[27 ]　张　姝 ,王传贵 ,梅兴国 ,等 .超声波对红豆杉悬浮细胞生长及紫杉醇释放的研究 [ J] .生物技术 , 2001, 11( 2): 14- 17.
[28 ]　陈永勤 ,朱蔚华 ,吴蕴棋 ,等 . L-谷氨酰胺和桂皮酸对云南红豆杉愈伤组织生长的影响 [ J ].中草药 , 1999, 30( 7): 542- 544.
[29 ]　盛长忠 ,王淑芳 ,王宁宁 ,等 .红豆杉愈伤组织培养中褐变现象的初探 [ J ].南开大学学报 (自然科学版 ) , 2001, 34( 4): 120- 121.
[30 ]　梅兴国 ,董妍玲 ,潘学武 .活性炭对红豆杉细胞褐变的抑制 [ J].海峡药学 , 2001, 13( 2): 51- 53.
[31 ]　黄　浩 ,鲁明波 ,梅兴国 .红豆杉细胞培养中抗褐变剂的筛选 [ J ].华中理工大学学报 , 1999, 27( 4): 107- 109.
Advances in research on affecting facto rs of tissue
and cell culture o f Taxus
LI Jian, SONG Xiao-ping, CHEN Shu-lin
(College of Animal Science and Technology ,Northwest A & F Uni versity , Yangling, Shaanxi 712100,China)
Abstract: The taxo l in the Taxus is a kind o f anti tumo r active composi tion. The t radi tional production
method draw n from the plants di rect ly has low producing ra te, and dest ro ys w ild resources of the Taxus.
The tissue and cel l culture is a kind o f ex t remely po tential techno logy in tax ol production. This paper gives
a sy stematic review on the resea rch o f the inf luencing facto rs, such as cul ture medium , culture condi tions,
prosoma, elici to r and brow ning , in ti ssue and cell culture o f Taxus in the recent years.
Key words: Taxus; culture medium; culture condi tions; prosoma; elici to r; brow ning
46 西北农林科技大学学报 (自然科学版 ) 第 33卷