全 文 ：文章编号:1007-3213 (2000)01-0054-04
叶下珠属植物体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型的作用
郭卫真1 , 　邓学龙2 , 　董伯振2 , 　朱宇同2
(1.广州中医药大学第一附属医院检验科 , 广州　510405;2.广州中医药大学热带医学研究所 , 广州　
510405)
摘要:为探讨叶下珠属植物对单纯疱疹病毒Ⅱ型的抑制作用 , 采用地鼠肾细胞株 (BHK)和原代兔肾细胞
对8 种叶下珠属植物水提物进行了体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型作用的研究。结果显示:除珠子草延益亚种外 ,
云泰叶下珠 、 云贵叶下珠 、 广东叶下珠 、 余甘子 、 黄珠子草 、 广西叶下珠 、 苦味叶下珠等 7 种叶下珠水提
物在该 2种培养细胞上均有不同程度抑制单纯疱疹病毒Ⅱ型的作用。提示叶下珠属植物对单纯疱疹病毒 Ⅱ
型感染有一定的治疗作用。
主题词:@叶下珠/药理学;　疱疹病毒 2 型 , 人/药物作用;　疱疹 , 生殖器/中药疗法;　体外研究
中图分类号:R373.1+1　　　文献标识码:A
　　单纯疱疹病毒 Ⅱ型 (HSV-Ⅱ)是一种
重要致病病毒 , 能引起生殖器疱疹 , 并与宫
颈癌的发生可能有关 。目前临床尚无有效的
治疗药物 , 较为有效的一线抗 HSV 药物首
选无环岛苷 (ACV)[ 1] , 但无环岛苷只能缓
解症状 , 缩短病程 , 尚不能控制 HSV 的潜
伏感染及其复发[ 2] , 而且早于 1982年就有
无环鸟苷耐药性的报道[ 3] 。目前应用中医药
治疗单纯疱疹病毒感染性疾病正日益受到重
视。叶下珠属植物抗嗜肝病毒的作用已有广
(上接 53 页 , Continued from Page 53)
Effect of Compound Lingzhi Jiangtang Capsule on Morphology
of Islet B Cell in Rats
CHEN Wenliang
1 , 　HUANG Ping2 , 　WU Qinghe2 ,
XU Honghua2 , 　RONG Xianglu2 , 　HAN Jian2
(1.Shenzhen Pharmaceutical Factory of Chinese Materia Medica , Shenzhen 518029, China;2.Guangzhou University of TCM ,
Guangzhou 510405, China)
Abstract:To explore the mechanism of Compound Lingzhi Jiangtang Capsule for diabetes mellitus , the
effect of Compound Lingzhi Jiangtang Capsule on morphology of islet B cell in rats with diabetes mellitus
was studied.Results showed that Compound Lingzhi Jiangtang Capsule could increase the volume density
of islet B cell (P <0.001)and promote the repair and regeneration of the damaged islet B cell.
Key words:@COMPOUND LINGZHI JIANGTANG CAPSULE/pharmacology;
LINGZHI/pharmacology;　ASTRAGALUS MEMBRANACEUS/pharmacology;
DIABETES MELLITUS/TCD therapy;　ISLETS OF LANGERHANS/drug eff.;
DISEASE MODELS , ANIMAL
收稿日期:1999-06-25;
作者简介:第一作者 , 女 , 1970年 3月出生 , 检验师
54
　　　　　　　　　　广州中医药大学学报　　　　　　　　　2000年 3月第 17卷第 1期
　Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine　　 March 2000, Vol.17 ,No.1
DOI :10.13359/j.cnki.gzxbtcm.2000.01.014
泛报道 , 但对单纯疱疹病毒Ⅱ型抑制作用的
报道尚不多 。我们采用地鼠肾细胞株
(BHK)和原代兔肾细胞对 8种叶下珠水提
物体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型作用进行了实验
研究 , 现报道如下。
1　实验材料
1.1　药物
云泰叶下珠 、 云贵叶下珠 、广东叶下珠 、
余甘子 、黄珠子草 、广西叶下珠 、苦味叶下
珠 、珠子草延益亚种等 8种叶下珠属植物水
提物由广州中医药大学热带医学研究所病毒
室提供 , 制备方法为 60℃水浴提取 2 h , 不
时振荡 , 将上清液离心沉淀 , 取上清无菌过
滤后 -20℃保存备用;无环鸟苷 (ACV)为
湖北医药工业研究所生产 , 用Hank s缓冲液
配制而成 1 g/L , 4℃保存备用。
1.2　病毒株　
单纯疱疹病毒 Ⅱ型 (HSV -Ⅱ), 由广
州市儿童医院病毒实验室提供 , 在 BHK细
胞和原代兔肾细胞上传代与检测 , 冻存于
-70℃, 测定其组织培养半数感染病毒量
(TCID50)在 BHK 细胞和原代兔肾细胞上分
别为 4.5和 6.23 , 实验时用维持液稀释成
病毒浓度为每 0.1mL 含 100 TCID50 。
1.3　细胞　
①原代兔肾单层细胞 , 细胞取自 5日龄
之内乳兔 , 剪碎加胰蛋白酶 4 ℃消化过夜。
先去胰酶后加入生长液置 37 ℃、 5%CO2孵
箱中培养 3 d , 再滴 96孔细胞板 , 待长至单
层后待用;②地鼠肾细胞株 (BHK), 由广
州市儿童医院病毒实验室提供 。
1.4　细胞培养液和维持液　
各为含 10%、 2%小牛血清 , 100 kU/L
青 、链霉素的杜布可改良的伊格尔培养基
(DMEM), GIBCO产品。
2　方法
2.1　细胞毒性实验　
试验在 96 孔微量板上进行 , 细胞数为
50×109/L , 0.1 mL /孔 , 待细胞长至单层
后 , 换成含2%小牛血清的维持液 , 加入用
维持液倍比稀释成不同浓度的药物 , 37℃、
5%CO2孵箱中培养 96 h , 每天观察细胞的形
态变化以及有无细胞病变 (CPE)。
2.2　药物抗病毒实验[ 4] 　
对病毒所致细胞病变的抑制作用:细胞
长至单层后 , 将药物用 2%的小牛血清维持
液进行倍比稀释 , 每一浓度接种 4 个细胞
孔 , 0.1 mL /孔 , 以细胞不出现病变的最小
稀释度为该药液对细胞无毒界限 , 同时 100
TCID50 HSV_Ⅱ , 37℃、 5%CO2孵箱中培养
96 h , 观察 CPE 情况 。实验均设病毒对照 、
药物对照 、 细胞对照 , 并以 ACV 作为药物
阳性对照 , 置 37℃CO2培养箱内 , 每天在倒
置显微镜下观察病变并记录。当病毒对照孔
细胞出现+++病变时 , 继续观察 4 d 则终
止。细胞出现病变的程度按以下 6级标准记
录:-:细胞生长正常 , 无病变出现;±:
细胞病变小于整个单层细胞的 10% ;+:
细胞病变约占整个单层细胞的 25%;++:
细胞病变约占整个单层细胞的 50%;++
+:细胞病变约占整个单层细胞的 75%;
++++:细胞病变约占整个单层细胞的
90%以上。
3　结果
3.1　叶下珠属植物对细胞毒性作用　
结果见表 1。
　表 1　8种叶下珠属植物水提物对细胞毒性作用
药　　物 ρ细胞无毒界限浓度/(g·L-1)
BHK细胞株　　原代兔肾单层细胞
云贵叶下珠 10 /
广东叶下珠 5 /
广西叶下珠 1.25 20
云泰叶下珠 1.25 20
黄珠子草 1.25 20
余甘子 1.25 20
苦味叶子珠 / 20
珠子草延益亚种 / 20
无环鸟苷 >0.0125 0.05
　　/ :未做(下同)
55第 1期　　　　　　　　　　　郭卫真 ,等.叶下珠属植物体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型的作用
3.2　叶下珠属植物在 BHK和原代兔肾细胞
上抗单纯疱疹病毒Ⅱ型作用
表2 结果表明 ,该 6种叶下珠属植物在
BHK细胞上均有不同程度抑制单纯疱疹病
毒 Ⅱ型的作用 , 最低有效抑制浓度均为
0.625 g/L ,但都未做出最低抑制浓度 ,因此
我们改用对 HSV_Ⅱ较敏感的原代兔肾细胞
继续试验 ,结果见表 3。表 3结果表明 ,该 6
种叶下珠属植物中除珠子草延益亚种外 ,原
代兔肾细胞上均有不同程度抑制单纯疱疹病
毒Ⅱ型的作用 ,其中苦味叶下珠和余甘子的
有效抑制浓度均为 10 g/L ,云泰叶下珠和黄
珠子草的有效抑制浓度均为 20 g/L ,广西叶
下珠的有效抑制浓度范围为2.0 ～ 2.5 g/L ,
仍未做出最低抑制浓度 , 故以广西叶下珠的
效果较好 。
4　讨论
单纯疱疹病毒 Ⅱ型主要引起生殖器疱
疹 , 为通过性行为传播的复发性疾病。在过
去 20年中 , 美国生殖器疱疹增加了 16倍 ,
世界卫生组织估计全球每年新发生殖器疱疹
病例达 2 000万 。我国生殖器疱疹病毒感染
患病人数近年急剧上升 , 而妇女除了局部感
染以外 , 也可能是子宫颈癌发生的原因之
一。主要用无环鸟苷 、更昔洛韦等核苷类抗
病毒药物治疗 , 也有采用干扰素与聚肌胞等
干扰素诱生剂 , 但均未能解决病毒复发问
题 , 且有一定毒副作用与耐药性产生。
祖国医学在治疗疱疹病毒感染方面有广
阔的前景 。我们在多年的中草药筛选中 , 发
现一些确有广谱抗病毒作用 , 且能消炎抑
菌 、调经扶正 、 保护粘膜的有效成份 。近
年来西方也采用过甘草酸喷剂 (商品名 Epi-
gen), 但抗病毒作用效果较差。国内也有诸
如洁尔阴等阴部冲洗用品 , 但未见能防止病
毒感染的药效介绍 。
表 2　叶下珠属植物在 BHK上抗单纯疱疹病毒Ⅱ型作用
药　物 不同药物稀释浓度(ρ)抗病毒作用　ρ1=20 g·L -1　ρ2=10 g·L-1　ρ3=5 g·L-1　ρ4=2.5 g·L-1　ρ5=1.25 g·L-1　ρ6=0.625 g·L -1
病毒对照 细胞对照
云贵叶下珠 + - - - - - ++++ -
广东叶下珠 + + - - - - ++++ -
广西叶下珠 + + + + - - ++++ -
云泰叶下珠 + + + + - - ++++ -
黄珠子草 + + + + - - ++++ -
余甘子 + + + + - - ++++ -
无环鸟苷＊ / / / / / / ++++ -
　　＊:ACV 最低有效浓度为 0.0125 g/L ,细胞无毒界限浓度为 0.05 g/ L
表 3　叶下珠属植物在原代兔肾细胞上抗单纯疱疹病毒Ⅱ型作用
药　物 不同药物稀释浓度(ρ)抗病毒作用　ρ1=20 g·L -1　　　　ρ2=10 g·L-1　　　　ρ3=5 g·L-1　　　ρ4=2.5 g·L -1　
病毒对照 细胞对照
苦味叶下珠 - - + +++ ++++ -
珠子草延益亚种 + ++ +++ ++++ ++++ -
广西叶下珠 - - - - ++++ -
云泰叶下珠 - +++ +++ ++++ ++++ -
黄珠子草 - ± ± ++ ++++ -
余甘子 - - + + ++++ -
无环鸟苷＊ / / / / ++++ -
　　＊:ACV 最低有效浓度为0.0125 g/L ,细胞无毒界限浓度为0.05 g/ L
56 　　　广州中医药大学学报　　　　　　　　　　　　　　2000年第 17卷
　　叶下珠属在全世界约有 600多个品种 ,
我国有 6 亚属 、 7 组 、 33 种 、 4 变种 。自
1988年报道叶下珠治疗乙型肝炎以来[ 5] , 10
多年来有关这方面的研究文章已有多篇[ 6] 。
但有关对单纯疱疹病毒 Ⅱ型 (HSV-2)拮
抗作用的报道尚不多见。山东省药物研究所
曾发现从叶下珠分离的去氢诃子酸甲酯
(methyl dehydrochebulate)[ 7] 和短叶苏木酚酸
甲酯 (methyl brevifolincarboxylate)具有体外
抗单纯疱疹病毒 Ⅰ型 (HSV-1)的作用[ 8] ,
但未见该两种单体对 HSV-2作用的报道。
本研究发现云泰叶下珠 、 云贵叶下珠 、
广东叶下珠 、余甘子 、黄珠子草 、 广西叶下
珠 、 苦味叶下珠 、珠子草延益亚种等 8种叶
下珠属植物水提物中 , 除珠子草延益亚种外
均有抑制HSV-2作用 , 对治疗单纯疱疹病
毒Ⅱ型感染有着一定作用 , 值得进一步深入
研究其有效成分 。
参考文献:
[ 1] 　吴志华.现代性病学 [M] , 广州:广东人民出版
社 , 1996.16～ 177
[ 2] 　张杰.中草药抗单纯疱疹病毒作用的研究进展
[ J] .中医药信息 , 1995, 1:31
[ 3] 　Bums W H , Saral R, Santos G W , et al.Isolation and
characterisation of resi stant herpes simplex virus after acy-
clovi r therapy [ J] .The Lancet , 1982, 1 (8269):421
[ 4] 　王秋娟 , 李运曼 , 王 , 等.家蚕细胞基因工程人
α-干扰素注射液抗Ⅱ型单纯疱疹病毒作用 [ J] .
中国药科大学学报 , 1996 , 27 (9):557
[ 5] 　Thyagarajan S.P , Subramanian S , Thirunalasundari T ,
et al.Effect of Phyllanthus amarus on chronic carriers of
hepatitis B virus [ J] .The Lancet , 1988 , 1:764
[ 6] 　朱宇同 , 方宏勋 , 容秉培 , 等.叶下珠治疗病毒性
肝炎研究的简况及其发展策略 [ J] .广州中医药大
学学报 , 1998 , 15(增刊):63
[ 7] 　Zuo Chunxu , Li Fengqin , Yao Qingqiang.Antiviral de-
hydrochebulic acid methyl and it s preparation.CA ,
1996, 124:18553/ u
[ 8 ] Zuo Chunxu , Li Fengqin , Yao Qingqiang.Antiviral
methyl brevifolincarboxylate and its preparation.CA ,
1996 , 124:66574/ a
Anti_HSV_Ⅱ Effect of Eight kinds of Phyllanthus Plants in Vitro
GUO Weizhen1 , 　DENGXuelong2 , 　DONG Bozhen2 , 　ZHU Yutong2
(1.Clinical Laboratory , the First Aff iliated Hospital , Guangzhou University of TCM , Guangzhou 510405 , China;2.Tropical Medicine
Institute , Guangzhou University of TCM , Guangzhou 510405 , China)
Abstract:BHK and primary rabbit kidney cell lines were used to study the anti_HSV_Ⅱ effect of 8
kinds of water extracts of phyllanthus plants in vitro.The result showed that the water extracts of 7 kinds
of phyllanthus plant had an inhibitory effect on HSV-Ⅱ to various degrees and only one kind of phyllan-
thus plant showed no anti-HSV-Ⅱ action.
Key words:@PHYLLANTHUS PLANT/pharmacology;　HERPESVIRUS-2 HUMAN/drug effects;
HERPES GENITALIS/TCD therapy;　IN VITRO
57第 1期　　　　　　　　　郭卫真 ,等.叶下珠属植物体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型的作用