全 文 ：中国中医药科技 2( X刀年 1 月第 14 卷第 1 期 Jn a. 岌刀7 祠 . 14 N o. 1 25
抗风湿药青藤碱对 UO U小鼠肾间质细胞
表型转化的影响 `
杨汝春 王永钧 周 大为 林京莲 王 军 朱晓玲
(浙江省杭州市中医院肾病实脸室 ·杭州 31 以 ) X7 )
摘 要 目的 :通过杭风沮中药青风藤的提取物青藤碱对单侧精尿管结扎 ( UO U)小及模型肾间质细胞表
型转化的影响 ,探讨其治肾作用及机理 。 方法 :采用小从 UU O模型 ,用不 同剂全青幕碱进行干预 , 用血甘
紧张素转化醉抑制别蒙诺作为对照 。 M暇灿 染色现察肾组织病理及间质纤雄化 ; 份组织 中蛋白质表达采
用免痊组化和 w . t e m 一 u 以` gn 方法检浏 ;基因表达采用逆转录 一 策合阵桩式反应 (叮 一 P CR )方 法。 结
果 : UUO 模型组和青雄碱 、 蒙诺治疗组小筑肾间质纤维化租度 以及 。 一 平清肌肌动蛋白 ( , SM人 ) 、 波形蛋
白 ( V in沈 in in )蛋 白表达和基 因表达水平均较很手术组显著淆 高 , 而各剂黄青膝城和荤诺均可显著降低上
述指标 ,并呈荆童依核性 。 中、 高别童的青膝城对于波形蛋 白的影响显著优于蒙诺。 结论 : 青膝城可显若
抑制肾小管上皮细胞或间质细胞的表型转化 ,提示降低肌成纤维细胞的积来是其防治肾间质纤雄化的重
要机制之一 。
主皿词 肾硬化症 l中医药疗法 青膝碱 /治疗应用 肾硬化症 l病理学 基因表达 小盆
肾小管间质纤维化 (二耐 谕翻如丘己 石b阴 i。 , R】I , )是小管
间质病变最主要的表现和肾小球病变转归的主要因素 ,也是
慢性肾功能衰竭的共同途径与最终归属川 ,现已证实 ,肌成
纤维细胞 (呵面场浏巨 t , M对 )与 RIF 的发生关系最为密切 ,
是 川 F发生的重要效应细胞 ,而肾间质固有成纤维细胞和肾
小管上皮细胞向肌成纤维细胞的表型转化是 M扣F 的主要来
源之一 ,也是导致 m F的重要机制 2[] 。 有研究显示 ,青膝碱
在降低循环免疫复合物 ,减少蛋白尿 ,改善肾功能方面具有
确切疗效 3[J ,对肾小管上皮细胞炎症因子的基因表达有明显
抑制作用 [’J ,青膝碱是否对小管间质损伤亦有保护作用 , 目
前尚无报道。
1 材料与方法
1
.
1 实脸动物 清洁级昆明种小鼠 , 浙江省中医药研究院
提供 , 70 只 ,雄性 , 6 一 8 周龄 ,体重 ( 18 土 2 ) go
1
.
2 药物与试剂 青藤碱纯品 : 西安天成医药生物公司 。
蒙诺片 : 中美施贵宝制药有限公司。 小鼠抗人 a 一 平滑肌肌
动蛋白( d咖一 叨力闭 1 aC it n , 。 一 sMA )单克隆抗体和小鼠抗人
波形蛋白 ( v 加” int n) 单克隆抗体 : BD A 公司 。 抗小鼠够 抗
体 、 A BC (链霉素 一 卵白家 )免疫组化检测试剂盒 : D AB ,均购
自北京 中山生物技术公司 。 ECL : 为讹对.坛川 , n涵口阴 c i a iB 。 -
t汕 , O K 。 醋酸纤维素膜 : 晓~ y
, 阮陇 ic be r & 阮huel 。 -rT
i以 、 逆转录和扩增试剂盒 、 引物合成 :上海生物工程公司 。
1
.
3 方法
1
.
3
.
1 实验分组和 UU O 造模方法 小鼠随机分成 6 组 ,分
别为 : ( a) 假手术组 ; ( b) 模型组 ; ( c) 青藤碱低剂量治疗组 ;
( d) 青膝碱中剂最治疗组 ; ( e) 青藤碱高剂量治疗组 ; ( f) 蒙诺
, 浙江省自然蓦金资助项目 N O . 粗尔娜朋 .
浙江省中医药管理局资助项 目 oN . 2X() 3 c1 24
治疗组 。 参照文献报道方法川 ,小鼠以乙醚麻醉后 ,行左侧
输尿管结扎术 。 假手术组仅游离左侧输尿管 ,不结扎。
1
.
3
.
2 给药方法 青膝碱低 、 中 、高治疗组分别予以青膝碱
18
、
36
、
72m砂纯· d一 ’ (相当于成人用药剂 t 的 5倍 、 10 倍 、劫
倍 )灌胃。 蒙诺治疗组以 2州掩· d一 ’ (相当于成人用药剂 t
的 10 倍 )灌胃。 假手术组和模型组以等 t 生理盐水灌胃。
各组均于手术后第 2天开始给药 ,给药 21 天 。
1
.
3
.
3 标本收集 在 tUI O术后 21 天将各组小鼠处死 ,取术
侧肾组织一半置于 10 % 福尔马林固定液中 ,用作免疫组织
化学和病理切片实验 ;另一半里于液氮中冷冻保存 , 以备提
取总 NB A 和蛋白质 。
1
.
3
.
4 肾组织病理变化观察 将 10 %福尔马林固定的肾组
织常规石蜡包埋切片 ,经 M
~
染色后 ,光镜下观察肾小管
间质的病理改变 ;采用北京航天大学医学图像采集及分析系
统 , ( x 4X() )光镜下采集 Ma 即 n 染色肾脏病理图像 ,蓝色为纤
维化阳性染色区 。 每张切片随机采集 5 个不重盛视野 ,分别
测量每个视野中肾小管间质纤维化阳性染色的相对面积 ,取
平均值 。 肾小管间质纤维化相对面积 二 肾小管间质纤维化
阳性 (蓝色 )面积 /整个视野面积。
1
.
.3 5 肾组织 。 一 SMA 、 V加翻血 蛋白表达 采用 S A习C 法。
2% 牛血清白蛋白和不加一抗作为阴性对照 。 采用北京航天
大学医学图像采集及分析系统 ,每张切片 ( x 4( 洲) )光镜下随
机采集 5 个不重益视野 ,棕黄色为阳性染色区 。 侧 t 棕黄色
阳性染色面积 ,取平均值 。 阳性相对面积 二 阳性面积 l整个
视野面积 。
1
.
3
.
6 肾组织 。 一 SMA 、 iV , n血 蛋白表达
w es t e m 一 b lo币 gn 测定 。 匀浆器充分研磨 、 匀浆肾组织 ,
斑R A 细胞裂解液裂解细胞 ,并提取肾组织细胞浆蛋白 , B CA
2 6 中国中医药科技 2阅 7年 1月第 14 卷第 l期 J, .么刃 7 v d . 14 oN . 1
法侧定蛋白浓度。 在 12 % 的聚丙烯酸胺 ( SDS 一 PAG E )凝胶
上电泳分离蛋白 ,转移至尼龙膜 , 5 %脱脂奶粉封闭 l 小时 ,
加人第一抗体 , 4℃过夜 ,去一抗 , PB盯缓冲液洗 3 次 ,每次
10 分钟 ,再加人相应辣根过氧化物酶标记的第二抗体 ,室沮
孵育 1 . 5 小时 , ECL试剂显色并嗓光成像 , 凝胶成象系统成
像 ,用 ioB Rad 甲皿 1. yt 。 软件对条带进行半定量分析 , 。 -
SM人和 v 加能而 n 蛋白质相对含t 分别用其与 p一 以石n 特异性
条带的积分光密度之比值表示 。
1
.
.3 7 肾组织 。 一 SMA 、 V远曰而 n 园州A 表达 盯 一 P CR 测
定 。 竹场刃L法提取细胞总 NR A 。 两步法进行逆转录和聚合
醉链扩增反应 (附 一 R卫 )石月刃H作为内参照 。 代 R反应条
件为 : 95 弋 5 分钟 ; 95 ℃加秒 , 56 ℃ 30 秒 , 72 ℃ 30 秒 , 35 个循
环 ;花℃ 10 分钟 ;扩增产物经 1 . 7% 琼脂糖凝胶电泳后 ,凝胶
成像系统成像 ,用肠 R目 q~ yt , 软件对条带进行半定 t
分析 , 。 一 SM流 和 V坛曰币 n ln 州 A 的相对含量分别用其与
C习刃H特异性条带的积分光密度之比值表示 。
引物序列
a 一 SM A ( 5加娜 ) 正链 5 , 口陷人人G A以认 TCC GACA C 3 ,
负链 5’ 以C代C ATC CC阳明℃刃认 G 3’
v i肠巴 nt i n (507 坤 ) 正链 5’ c GC I , r代汇C从CT Ac人T 3’
负链 5’ GC AGC 以C g 万们陀A TA C 3’
C人p DH (3O7 饰) 正链 5 ` C C Ac 兀 c C人AA。 陀GA G人们陷 3’
负链 5 , C〔A GA AO以义羌C C AGATGAT 3’
1
.
3
.
8 统计学方法 用 S只弥 11 . 5 软件对数据进行分析处
理 ,计量资料用妥土 : 表示 ,方差齐者 . 多组间采用 , 一 awy
AN OV A
,组间两两比较用 比D 法 。
2 结果
2
.
1 各组肾组织病理观察 模型组肾小管间质纤维化程度
较假手术组显著增高 ,而未观察到肾小球纤维化的显著性改
变。 青膝碱各治疗组肾小管间质纤维化相对面积较模型组
显著减少 ,并随青膝碱剂量增高 ,肾伺质纤维化程度逐渐降
低 ,高剂量青藤碱组的间质纤维化程度显著低于蒙诺组 。 见
表 1和图 1 一 6o
表 1 青膝碱对 u o 小鼠肾小管间质纤维化相对面积的影响` * : )
组别 剂最
n娜kg )
肾皮质 一小管间质
纤维化面积尹视野总面积
假手术组 or 一 .0 0 7 2土 .0 01 2
模型组 12 一 .0 肠 5士 .0 01 护
蒙诺组 12 2 0 翔 北 0 0一8’ *
青膝碱低剂量组 12 18 .0 脚 土 .0 仪场幽 * .
青藤碱中剂盘组 12 36 .0 期 土 .0 “ 刃` * .
青膝碱高剂t 组 12 2 .0 22 8土 。 .0 18’ * . “
与假手术组比较△ 尸 < .0 仍 , ▲ P < 0 . 01 ;与模型组比较☆ P <
.0 仍 ,★ P < .0 01 ;与蒙诺组比较口 P < .0 仍 , . P < .0 01 ;与低荆 t 组
比较O P < .0 仍 , . P < .0 01 ;与中剂t 组比较令 P < .0 仍二 P < .0 01
(下同 )
2
.
2 免痰组化法检洲各组 小民肾组织 。 一 SMA 、 V i此涌 n 的
蛋白质表达
除血管外 , 假手术组小鼠肾小管间质和肾小球几乎无
。 一 SMA 和 V加址幻石n 的蛋白表达 , U UO 模型组小鼠肾组织中
的 。 一 S MA 、 V加笼 nt 加蛋白阳性染色主要在肾小管间质大最
出现 , 而肾小球内 Q 一 SMA 、 V i~ 石n 蛋白阳性表达不明显
。
经青藤碱治疗后 , 肾小管间质中 a 一 SMA 、 v 访妞 n it n 蛋白表
达均显著低于模型组小鼠 , 中、 高剂量青藤碱治疗组 Q -
SMA或 vi 脱 n石n 蛋白表达显著低于蒙诺治疗组 。 见表 2 和
图 7 一 18 。
表 2 免疫组化检侧青膝碱对 U U O 小鼠肾小管间质
。 一翎 A、 vi ~ ` n 蛋白表达的影响 (妥土 : )
组别 剂最
(呵吨)
假手术组
模型组
蒙诺组
青弃喊组 (低)
青蕊碱组 (中)
青膝喊组 (高)
视野总面积 视肠总面积
爪一 洲人阳性面积 vl 认曰尚n 阳性面积
0
.仪犯土0 . 0 13 0 . 0 15出 0 . 0 12
.0 25 1出 .0 叨 ` .0 235 出 .0 必`
0
.
1万 土0 . 0 13么 * 0 . 163 宝 0 . 0 1沪*
0
.
212士0 .心鑫 * . 0 . 18 1出 0 . 0一s` * .
0
.
1又 土0 .叨` * 口 . 0一57 出 0 . 0 1沪* .
0
.
1肠 出 0 .位 l` * . 0 . 1艾 上 0 . 0 13今* . ”
182肠72
or1212
中国中医药科技2) X (7 年 1月第 4 1卷第 1期 知 .2) X (7 vol .4 1N o .1
2
.
3 W以e r U恻吨 检浏各组小抚肾组织 。 一 S MA 、 V访” n I坛 蛋
白质的表达 假手术组小鼠肾组织 。 一 弘认 表达量极低 , UUO
模型组小鼠肾组织 。 一 SMA 的蛋白表达显著增高 ,育膝碱各
剂 t 均可显著降低 。 一 S MA蛋白的表达 ,并表现出剂里依赖
性 。 V ha 即血在假手术组肾组织中也有少量表达 , U O 模型
组 V油即血的蛋白表达显著高于假手术组。 各治疗组均可显
著降低 V in ” 雨 n 的蛋白表达 , 中、高剂童的青藤碱对 V访肥以初
蛋白表达的抑制作用显著强于蒙诺。 见图 19 和表 o3
a b e d e f
. . . . . . . . . . . . . . . .
. 一 S H A
赞KD
3 2 K D
p 一 鹅吐n
图 19 各组肾组织 a 一 SMA 、 v 如口 ` n 的蛋白表达
表 3 W` em 一 u刚叩检侧青膝碱对肾组织 。 一 s MA 、
vi ~
` n蛋白表达的影响` 土 : )
组别 。 般 _ 卜MSA ~(州叼 甲一油 . 胆一血
假手术组 10 一 .0叨 士 .0叨 .0 15 * .0 01 5
棋型组 一2 一 3 .卿士 0 . 137 ▲ 0 .卫一生 0 . 0 1一`
浪诺组 12 2 .2咖 土 .0 137 ` * .0知 土 .0 01沪☆
青井喊组 (低) 12 18 .3川 , .0 135岭 . .0猫 * .0咖`青井喊组(中) 12 肠 .2姚土 .0 115姗口 . .0 脚 , .0 泥 l` *二
青旅碱组 (高 ) 12 几 .2 8 1* .0 1铭` ★ . .0铆 士 .0咖 . ★二
.2 4 BT
一解 R技术检浏各组 小民肾组织 Q 一 SMA 、 V运抢 nt 加
基因表达的变化 与假手术组比较 , UU O 小鼠肾组织中 a -
SMA
、
V加” 而 n ml 州A表达显著上调 ,青膝碱各剂最治疗组和
蒙诺对照组 a 一 SMA 、 Vin肥 nt 加的基因表达均较模型组显著降
低 ,高剂最青藤碱降低 V加此nt 加 n 旧入A表达的作用显著优于
篆诺 。 见图匀和表 4o
M a b e d e f
口亡 . . . . . . . . . . . . .
翎为p 一孤
阅 ,峥 V如 e n公 n
,价` p e妞。 H
图加 盯一 PCR检侧肾组织 。 一 SM人、 Vi m口面 n 的 . n RN A表达
表 4 叮 一代 R检侧青膝旅对小鼠肾组织 Q 一 S M人 、
v如 . 幼n m RN A表达的影响` 含 : )
荆 t 。 一翎 A V谕曰血组别 n . - 一(州掩) 瓜川斗口 /G叮七 H
舰手术组 10 一 .0朔 土 .0 0刃 .0 467 土 .0 05
模型组 12 一 1 . 235 士 .0 U广 .2邓 上 .0 别广
旅诺组 12 2 0 .锐 出 o . l a7 ` * l ,洲 出 0 .叫` *
青蕊孩组 (低) 12 15 0 . 吕13上 0 .晰 . * 1 .期 士 0 .此` * .
青序喊组(中) 12 肠 .0 扔 出 .0 为l` * L 384 , .0 1琳` * .
青班喊组 (高) 12 72 .0叨 出 .0 1脸` ☆ 1.叫 土 .0 叫林“
3 讨论
近年来研究发现 ,不论人类原发性或继发性肾小球疾
病 ,都不同程度的伴随着小管间质的损伤 ,而小管间质病变
的严重程度与肾小球滤过功能的下降密切相关 ,对肾功能损
伤的相关性有时甚至较肾小球病变更为密切 ,决定着肾脏疾
病的预后。 RIF 是小管间质病变的主要表现和最终结果 ,主
要表现为肾小管上皮细胞变性 、 萎缩和消失 ,肾间质单核 /淋
巴细胞浸润 ,同时肾间质中聚集大量的 M orF 和细胞外墓质
(欲甘以犯u血 . 廿认 , cE M ) l,] 。 M y0 F同时具有成纤维细胞和
肌细胞的特性 ,表达波形蛋白 ( vi 服 n t in ) 、 成纤维细胞特异蛋
白一 l (仙m场斌 日卿` C p拍 et i n I J s p 一 l) 和 。 平滑肌肌动蛋
白( a 一
~
山 mUSC l e aC it n
, 。 一 sMA )[
2 ]
。 近年来国内外研究表
明 . M y o F可由肾间质固有成纤维细胞和肾小管上皮细胞转
化而来。 c ur 即 等详细报道了成纤维细胞在细胞培养过程中
转化为 M yo F的过程 I’J ;触 和 Ng 等比 B] 相继在单侧翰尿管
结扎及 5 6/ 肾大部分切除大鼠模型中观察到受损的肾小管
上皮细胞表达肌成纤维细胞的标志蛋白一a 一 SMA ,并向间
质移动。 提示肾间质固有细胞向 Mor 转化是 RIF的主要机
制之一。
本研究采用经典加单侧输尿管结扎 (U o) 致肾间质纤
维化模型 ,术后 21 天也观察到 ,小鼠梗阻肾发生广泛的肾小
管上皮细胞坏死及间质纤维化 ,同时肾小管和间质 。 一 SMA 、
V运 . 正 n 基因和蛋白均大且表达。 提示肾小管上皮细胞或
间质细胞已向 M orF 转化 。 青藤碱可显著减轻 UU o 小鼠梗
阻肾间质纤维化 ,高剂盘青膝碱显著优于蒙诺 ( AO口 )对照
组 ;同时 ,青膝碱及蒙诺治疗组小鼠肾小管和肾间质 。 -
SM人 、 V in 肥n it n 的蛋白表达和基因表达均较模型组显著降低 ,
且对细胞骨架 V油翻如 的抑制作用显著优于蒙诺对照组。
结果说明青藤碱可从基因和蛋白两个水平抑制肾小管 一 间
质细胞的表型转化 ,降低 M扣 F在肾小管 一 间质中的积聚 ,减
轻肾间质纤维化程度 ,并有明显的剂量依赖性 。 愉尿管结扎
肾损伤机理包括肾积水的机械压力 、炎症反应 、 血流动力学
改变等 。 而现代药理研究显示青藤碱有明显的抗炎和免疫
调节作用 ,对体液免疫 、 细胞免疫及 IL 一 1 、 1刊 F 一 Q 、环氧化酶
( Co x )等炎症介质均有抑制作用 [,] , 又有降血压 、 抗血管平
滑肌细胞增殖等作用。 因此 ,青藤碱抑制肾间质 M , o F的积
聚可能从减级肾间质炎症损伤 、 降低肾脏局部血压 、 抑制转
分化细胞的增殖等多方面起作用的。
祖国医学对于肾病的认识早在《家问》的 “风论 ” 、 “ 奇病
论” 、 “评熟病论” 中已有论述 ,提到了水肿时肾气与风邪的相
关性 ,称之谓肾风 。 《诸病源候论》 “ 风邪人于少阴 ,则尿血 ” ,
明确提出风邪内扰于肾 ,可致尿血和水肿 。 风邪又往往可与
湿邪等相兼为患 ,故有 “ 风为六淫之首 ” “ 百病之长 ’之说 ,如
风湿 、 风寒 、风热 、 风毒等 ,其中风湿之邪内扰 ,对肾的形响尤
甚 。 如王氏认为在肾脏疾病的病机发展中往往隐伏着难以
觉察的风邪与湿邪向合 ,导致在湿的慢性过程中隐藏着 “ 风 ”
的活动性病变 。 对这类肾脏局部风湿证 ,应用治风湿药较单
纯应用治湿药更为有效 , 这就是风能胜湿的原因之一〔l0] 。
其实古今医家都有运用祛风除湿治疗肾性水肿的临床经验 ,
如汉代名医张仲景著的《金旺要略 · 痉湿喝病脉证第二》有 ;
“ 风湿 ,脉浮 、 身重 ,汗出恶风者 , 防己黄蔑汤主之。 ” 而在 《金
医要略 · 水气病脉证并治第十三》中又有 : “ 风水 、脉浮 、 身重 、
28 中国中医药科技 2 X (刀年 l月第 14卷第 1期 伽 .么刃 7粗 . 14 N o. 1
汗出恶风者 ,防己黄蔑汤主之。 腹痛加芍药。 ”就是很明显的
证明。 近代中医陈孝伯也善于重用汉防己祛风湿 , 以治肾性
水肿 .行水之效 。 结合现代临床与药理研究 , 更有应用雷公
膝多贰、 火把花根片等多种祛风湿中药治疗肾病蛋白尿 、 水
肿的文献报告。
青风膝亦主要用于抗风湿病的治疗 , (中国药典)l 望沉)年
版记载 :青风膝味苦 、性平 、归肝脾经 ,具有祛风湿 、通经络 、 利
小便 、 止痛之功效 ,是治疗风湿痹痛的良药 ,且肝功能损害、 骨
位抑制 、生殖影响等副作用明显低于其它免疫抑制剂。 青膝
碱是从中提取的活性单体成分 ,有实验表明育膝碱在降低循
环免疫复合物 ,减少蛋白尿 .改善肾功能等方面具有确切疗
效 。 本项研究采用 U U( ) J/ 、鼠模型 ,在病理和分子水平证实青
膝碱具有防治或延缓肾间质纤维化作用 ;亦同时验证了风湿
之邪在肾病致病中的作用以及祛风湿治疗的有效作用 。
, 考文献
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】甲曲`es , . 司 ” 砚川甲幽 . , . 日 d l . d c
`n t` 函 it目 n印曰石d , . ` 山叮 玩 , 1弓书巧; 49 ( s 钾154 ) :里
6 C川即 C , h川曰 . 加` er , J , Cd均 DJ , et 目 .升. 威加回亩. 过 i川粉 俄山】-
听 肠汕 l. O ot 叫浦肠山 . . O in “ otr . ` 山叮 加 , 1期 ; 52 ( 5) : 12为
7 K e H’Y , 叭,团 l h iU BA .而知加i。 加划或 . 刘 1. 试 . 司 倒比阮 喇公比 .
l汕 沈!】. 词 in t e . tiit目 6肠山加如 同洲吨画加 . 目 山 . . 目山如刘 .
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疗 l叭肾病的临床病理研究— 附 , 例重复肾穿刺病理对照研究 .中国中西医结合肾病杂志 .加以口 l ( 5) :醉 1
(收鹅么洲万 一 仍 一 15)
河南祠柏 枯枚 总皂 普舍童的 舍析 `
王 林 龚立雄 ,
(河南省医疗吕械检脸所 · 郑州 月义乃叮 ’ 河南省药品标准所 ·郑 州 4义O X )
1 样晶 、仪 . 与试药
1
.
1 样品 于 加以 年在桐柏县医药公司及采购站采集收购的桔梗
样品 。
1
.
2 仪吕与试药 索氏提取器 : 天津玻璃仪器厂生产 。 叭乃湘人 全
自动电子天平 :上海天平仪器厂生产。 W助山 一 2 46 电热烘箱 :上海
吴淞五金厂制造 。 水裕锅 : 上海医疗器械厂 。 高速粉碎机 : 河北省
黄葬市中兴仪器有限公 司。 甲醉 ,分析纯 , 江苏百林科技有限公司
生产 。 乙陇 :分析纯 ,天津市化学试剂三厂 。
2 实脸方法 随机取样为 7 份 , 各 么刃 g 左右 , 粉碎 , 混合均匀 , 备
用 。 精密称取本品粗粉约 4g , 里索氏提取器中 ,加甲醇 25 d , 浸泡 巧
小时后 ,再加甲醉 ZS d , 加热回流 6小时 ,放置过夜 , 毖过 ,滤液浓缩
至 15 · 么知公,放冷 , 加乙醚 ,阮 d ,振摇 ,放置至澄明 , 弃去上清液 .沉淀
分次加甲醉 (乞玩 d 、 l加臼、 5闹 )加热使溶解 , 放冷 ,滤过 , 合并甲醉液 ,
浓编至 巧 一 么阮日 .放冷 ,加乙醚 只玩d ,振摇 , 同上法处理 ,合并甲醇液 ,
t 已恒重的燕发皿中 , 于水浴上燕发至干 , 在 1仍℃ 干操至恒重 , 计
算 , 即得。
3 实脸绪果 河南桐柏县枯梗收晌样品总皂什含 t 情况 ,见附表。
4 讨论 桐枯授生长历史悠久 ,野生资源丰富 ,药材外部洁白 ,菊心
明显 ,个大质坚 ,被列为上品 ,其性状特点颇似人参 , 又有 “ 桐参 ” 之
关名 ,在国内外市场享有盛名。
我们在桐柏医药公司及其主要种植枯梗的乡镇收购站随机采
, 河南省重点科技攻关项目 No .翻刀仍 l日X)
附表 河南桐柏县桔梗收购样品总皂昔含 t 情况
样品号 样品来源 野生或栽培 生长年限总皂昔含t (% )
1 城郊乡金亭村 , 收购 栽培 1年 .6 75
2 城郊乡龙潭河 , 收购 栽培 2 年 .3 56
3 朱庄乡朱庄村 , 收购 栽培 1年 .6 46
4 毛集镇毛集村 , 收购 野生 3年 .4 67
5 大河镇上河村 , 收购 栽培 2年 10 .2
6 淮源镇固庙村 , 收购 野生 2 一 3年 16 .9
7 朱庄乡朱庄村 , 收购 栽培 2 年 10 .0
样 7个 ,其中野生 2个 ,栽培桔梗 5 个 , 均按照 2以幻年版《中国药典》
(一部 )桔梗项下总皂昔含通侧定方法检验 。 , 个样品中有 5个符合
国家含量不低于 6% 的标准要求 , 4 号 、 6 号样品低于国家标准 。
根据采集的样品外观分析及调查而知 , 1、 3 号样品以 l 年生家
种桔梗为主 ,其来源主要是春季桔梗苗在秋冬移栽时选苗遗留的分
枝多 、有损伤不适宜移栽的种苗。 2 号样品为 I 年 、 2年生家种混和
样品 , 带有 3 一 8. 1 的茎枝 ,或珍杂有桔梗的细小须枝 , 其总皂含 t 最
低。 根据桔梗“ 芦头 ”判定 , 4 号样品主要为 3 · 4 年生野生枯梗 , 在
仓库已放工两年 , 被虫蛀而质轻泡 。 5 、 6 、 , 号样品为当年秋天采收
的 2年生桔梗 ,质 t 明显优于 1 年生桔梗 。
从开展的桔梗种植年限及采收期试脸结果表明 , 2 年生家种桔
梗一般均符合国家质址要求 , 1 年生的枯梗总皂含量一般在 6% 左
右 .且根茎小 , 外观差 ,不宜采收人药 , 出口也达不到高等级的规格。
因此 ,仍应种植 2年 ,至少生长 20 个月左右采收为好。
(收稿 : 2X( 场 一工 一 17)
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