全 文 ：【收稿日期】2009-09-02
【作者简介】孙丽娟(1963-),女 ,副主任药师 ,从事天然药物分析与化
学合成
文章编号:1005-376X(2009)07-0620-02 【论　　著】
心痛宁滴丸中香附的薄层色谱鉴别及 HPLC法测阿魏酸的含量
孙丽娟 ,郭东兰 ,李传兵
(深圳市泰康制药有限公司 ,广东深圳　518110)
　　【摘要】　目的　建立心痛宁滴丸中香附的薄层色谱鉴别和阿魏酸的分析方法。方法　用 TLC法鉴别香附中
的 α-香附酮;用 HPLC法测定川芎中阿魏酸的含量 , HypersilODS-C18分析柱(250 mm×4.6 mm, 5μm)检测 ,波长:
323 nm, 流动相:甲醇-水-冰醋酸(30∶70∶0.7), 流速:lml/min,柱温:室温。结果　薄层法鉴别香附中的香附酮结果
满意;HPLC法测阿魏酸 ,线性范围 0.005 ～ 0.5 μg(r=0.9999), 回收率分别为 98.0%(n=6)。结论　上述方法准
确 、专属性强 , 可作为心痛宁滴丸的香附定性和阿魏酸定量的分析方法。
【关键词】　心痛宁滴丸;香附酮;阿魏酸;薄层色谱法;高效液相色谱法
【中图分类号】TQ460.72　　　　【文献标识码】A
TLCidentificationofRhizomacyperiandHPLCdeterminationofFerulicacidinXin
TongNingPil
SUNLi-juan, GUODong-lan, LIChuan-bing
(ShenzhenTaikangPharmaceuticalCo., LTD, Shenzhen518110, China)
【Abstract】　Objective　ToestablishtheidentificationmethodofRhizomacyperianddeterminationmethodofferulic
acidinXinTongNingpil.Method　TLCwasusedforidentificationofα-cyperoneinRhizomacyperiandHPLCfordeter-
minationofferulicacid.Hypersil-ODS-C18-column(250 mm×4.6 mm, 5 μm)inspectionwavelengthwasat323 nmand
thefolowratewas1ml/min, usingmethanol-water-aceticacid(30∶70∶0.7)asmobilephase.Result　Thequantitativee-
valuationofferulicacidexhibitedalinearrangeof0.005 ～ 0.5 μg(r=0.9999, n=6), withanaveragerecoveryof98.0%
(n=6).TheresultofTLCidentificationwasuptorequirement.Conclusion　Theabovemethodsareaccurateandspecific
foridentificationandofRhizomacyperideterminationofferulicacidinXinTongNingPill.
【Keywords】　XinTongNingpill;α-cyperone;Ferulicacid;TLC;HPLC
　　心痛宁滴丸处方是由川芎 、肉桂和香附(醋炙)
组成 ,主要功能是温经活血 ,理气止痛。用于寒凝气
滞 ,血瘀阻络 ,胸痹心痛 ,遇寒发作 ,舌苔色白 ,有瘀斑
者 。其收载于部颁药品标准 《中成药成方制剂》第十
五册。原标准无香附的定性鉴别 ,也无含量测定。为
了提高产品质量 ,增加市场竟争力 ,制定了香附的定
性鉴别和川芎中阿魏酸的含量测定。
1　材料与方法
1.1　仪器与试药　Agilent1100,硅胶 G(青岛海洋化
工有限公司), METTLER-AG135十万分之一天平 ,香
附对照药材 、α-香附酮对照品和阿魏酸对照品(中国
药品生物制品检定所提供);心痛宁滴丸样品(深圳
市泰康制药有限公司生产), 流动相用甲醇为色谱
纯 ,其他试剂均为分析纯 ,水为自制纯化水 。
1.2　方法
1.2.1　制剂中香附的鉴别
1.2.1.1　对照药材和对照品溶液制备　取香附对照
药材 1g,用乙醇超声提取 15min,滤过 ,滤液蒸干 ,再
用正已烷 10 ml超声处理 10 min,滤过 ,滤液浓缩至
0.5ml。另取 α-香附酮对照品 ,加正已烷制成每 1 ml
含 0.5mg的溶液 ,作为对照品溶液。
1.2.1.2　供试品溶液的制备　取本品 50粒 ,研细 ,
加乙醚 20ml,超声处理 5 min,滤过 ,滤液挥干 ,加正
已烷 10ml,超声处理 10 min,滤过 ,滤液浓缩至 0.5
ml,作为供试品溶液。
1.2.1.3　结果与阴性对照 　按照薄层色谱法 (《中
国药典 》2005版一部附录 Ⅵ B)试验 ,吸取上述供试
品溶液 20 μl,对照品溶液 10 μl,分别点于同一硅胶
G薄层板上 ,以甲苯 -乙酸乙酯(19∶1)为展开剂 ,展
开 ,取出 ,晾干 ,喷以 2, 4-二硝基苯肼甲醇试液。放
置片刻 ,供试品色谱中 ,在与对照品色谱相应的位置
上 ,显相同颜色的斑点 。阴性样品除香附外按处方制
备 ,依照 1.2.1.2项制备阴性对照溶液 ,按上述方法
鉴别 ,结果无干扰 。
1.2.2　阿魏酸的含量测定
1.2.2.1　对照品的制备　取在 105℃干燥至恒重的
阿魏酸对照品 20 mg,精密称定 ,置 50 ml的容量瓶
中 ,用甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,作为储备液 ,取
1.0 ml置 50 ml容量瓶中 ,用甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,
作为对照品溶液。
1.2.2.2　供试品的制备　取供试品 5 g,精密称定 ,
置 50 ml容量瓶中 ,加甲醇 40 ml,超声提取 20 min,
用甲醇稀释至刻度 ,离心(4000 r/min)15 min, 取上
清液 ,即得。
1.2.2.3　阴性对照实验　除川芎外按处方制备阴性
样品 ,依照 1.2.2.2项制备川芎阴性对照溶液。分别
精密吸取对照品溶液 、供试品溶液和阴性对照溶液各
10 μl,注入液相色谱仪 ,测定 ,色谱图见图 1。结果表
明 ,其他药材与辅料不干扰阿魏酸的测定。
1.2.3　线性范围考查　精密量取阿魏酸对照品的储
620 ChineseJournalofMicroecology, Jul.2009, Vol.21No.7
备液 0.1、0.6、1.2、1.5、1.8和 2.5 ml置 50 ml容量
瓶中 ,用甲醇稀释至刻度 ,各取 10 μl、分别注入液相
色谱仪 ,测定峰面积 ,以峰面积为纵坐标 ,对照品进样
量为横坐标 , 进行线性回归 , 回归方程如下:y=
3.7812x+0.1011, 相关系数 r=0.9999, 线 性范
围:0.005 ～ 0.5μg。
1.2.4　最小检出限的确定
1.2.4.1　实验方法　将色谱工作站检测仪的灵敏度
调高 ,用 1∶10倍比稀释处理的系列对照品溶液及空
白溶剂进样 ,进样量为 1 μl,考察对照品与噪声强度
之间的关系 ,以信噪比为 3时确定最小检出限 。
1.2.4.2　实验结果　通过实验 ,可以确定上述图谱
为最低检出限图谱 ,该 HPLC法阿魏酸含量测定的最
低检出限为 1 ng。
1.2.5　精密度试验　精密量取对照品混合溶液 10
μl,连续进样 6次 ,测得阿魏酸的面积 ,计算得 RSD
为 0.3%。
1.2.6　稳定性试验　取同一供试品溶液 ,分别于 0、
2、4、6、8和 10 h各进样 10μl,测定阿魏酸峰面积 ,计
算 RSD分别为 0.34%。表明供试品溶液在 10 h之
内稳定 。
1.2.7　重现性试验　取本品(批号),混匀 ,精密称
取 5份 ,按上述拟定的含量测定方法测定阿魏酸的含
量 , RSD为 2.6%。
1.2.8　回收率试验　分别称取已知含量的样品(批
号 03091001 ,含阿魏酸 56 μg/g)5g,精密称定 ,置锥
形瓶中 , 各精密加入阿魏酸对照品溶液 0.5、 1、
2 μg/ml,按样品含量测定方法处理分析 ,计算得平均
加样回收率为 98.8%, RSD为 1.5%。
1.2.9　样品测定　精密称取不同批次的本品 5g,按
照含量测定方法测定阿魏酸含量 。
表 1　含量测定结果(μg/g, n=2)
批号 含量
07070201 60
08010301 62
08031401 65
2　结果讨论
通过以上实验 ,结果表明 ,用上述薄层层析法鉴
别心痛宁滴丸中的香附及用高效液相色谱条件测定
心痛宁滴丸川芎中含阿魏酸的量是专属 、准确 、可
行的。
2.1　香附酮提取方法　因为心痛宁滴丸的辅料为聚
乙二醇-6000 ,它不溶于乙醚 ,所以我们用乙醚提取药
品的主要成分 ,过滤 ,挥去乙醚 ,因为香附的主要成分
可溶于有机溶剂 ,所以我们选择用正己烷溶出主要成
分 ,过滤 ,滤液浓缩至 1 ml,按照薄层色谱法(《中国
药典》2005版一部附录 Ⅵ B)试验。
2.2　阿魏酸提取方法的选择　取本品 5 g置 50 ml
容量瓶中 ,加甲醇 40 ml,超声提取 20 min,加甲醇稀
释至刻度 ,再离心(4000 r/min)15 min,取上清液 ,用
微孔滤膜(0.45μm)过滤 ,滤液作为供试品溶液 。考
虑到阿魏酸的性质 ,我们曾用甲醇 -甲酸(95∶5)提
取 ,但是供试液的基线漂浮很大 ,影响样品的峰面积 ,
所以我们采用甲醇提取 ,虽然基质 PEG-6000在甲醇
中有悬浮物产生 ,但经过离心处理 ,就可得到供试品
的上清液 。
2.3　展开剂和流动相的选择　取上述 2种溶液 10
μl和 20 μl,分别点于同一硅胶 G薄层板上 ,经过试
验摸索出以甲苯 -乙酸乙酯(19∶1)为展开剂展开效
果好 ,展开后 ,取出 ,晾干 ,因为 2, 4-二硝基苯肼能和
羰基类反应生成具有颜色的 2 , 4-二硝基苯腙 ,所以
我们在展开后的薄层板上喷 2, 4-二硝基苯肼乙醇溶
液 ,放置片刻即显示明显的斑点 [ 1, 2] ,又经空白实验
加以证明 ,使该结果正确 ,结果满意。
用高效液相色谱法对当归中阿魏酸进行分析测
定已有一些报道 [ 3, 4] ,据此经过实验 ,我们对流动相
进行了筛选 ,确定了阿魏酸的最大吸收波长 ,条件如
下:色谱柱:AgilentHypersilODS-C18分析柱 (250
mm×4.6 mm, 5 μm),检测波长:323 nm,流动相:甲
醇 -1%醋酸水溶液(30∶70),流速:1ml/min。
【参考文献】
[ 1]中国药典.一部.2005:212,香附项下.
[ 2]中国药典.一部.2005:424,艾附暖宫丸项下,鉴别(2).
[ 3]陈汉平.高效液相色谱法测定当归及其炮制品中阿魏酸的含量
[ J] .中草药 , 1988, 19(10):15.
[ 4]杨宁莲.高效液相色谱法测定生化汤口服液中阿魏酸含量 [ J] .中
国医院药学杂志 , 1999, 19(2):88.
621中国微生态学杂志　2009年 7月第 21卷第 7期