全 文 ：高效液相梯度洗脱法同时测定复方救必应胶囊中
紫丁香苷、长梗冬青苷、圆柚酮和 α －香附酮含量
班小军1，杨雪梅2，赵翠琴1
(1 甘肃省张掖市食品药品检验检测中心 ·甘肃 张掖 734000;2 甘肃省金昌市药品检验检测中心 ·甘肃 金昌 737100)
摘 要 目的:建立同时测定复方救必应胶囊中紫丁香苷、长梗冬青苷、圆柚酮和 α －香附酮含量的高效
液相色谱法。方法:采用 Phenomenex C18色谱柱(250 mm ×4. 6 mm，5 μm)，以乙腈(A)－水(B)为流动相
进行梯度洗脱;柱温为 35℃;流速为 0. 9 mL /min;进样量为 20 μL;紫丁香苷和长梗冬青苷检测波长为 210
nm，圆柚酮和 α －香附酮检测波长为 242 nm。结果:紫丁香苷、长梗冬青苷、圆柚酮和 α －香附酮在给定
浓度范围内线性范围分别为 21. 16 ～ 423. 20 mg /L(r = 0. 9997)、33. 31 ～ 666. 20 mg /L(r = 0. 9992)、5. 25 ～
105. 00 mg /L(r = 0. 9999)、3. 39 ～ 67. 80 mg /L(r = 0. 9995)，线性关系良好;平均加样回收率(n = 6)和
ＲSD值分别为 96. 92%(0. 94%)、98. 55%(0. 85%)、98. 68%(1. 51%)、99. 13%(1. 24%)。结论:本文建
立的 HPLC梯度洗脱法同时测定复方救必应胶囊中紫丁香苷、长梗冬青苷、圆柚酮和 α －香附酮含量，方
法准确、重现性好、灵敏度高，为评价复方救必应胶囊质量控制提供可靠方法。
关键词 复方救必应胶囊;紫丁香苷;长梗冬青苷;圆柚酮;α －香附酮
通讯作者:杨雪梅，E － mail:yangxuemei5096@ 163. com
复方救必应胶囊为复方制剂，处方由香附、救必应、东风
桔等 3 味中药材组成，收载于卫生部药品标准中药成方制剂
第 10 册［1］;其功效为清热解毒、利湿止痛，用于腹泻、胃肠炎
等。该制剂现行的质量标准仅对复方救必应胶囊的性状、鉴
别及胶囊剂通则项［2］下作了规定，标准相对简单，不能较全
面控制药品质量。本研究采用高效液相梯度洗脱法，同时对
制剂中救必应药材中所含紫丁香苷、长梗冬青苷和香附药材
所含 α －香附酮、圆柚酮进行测定，为复方救必应胶囊的质
量控制提供参考依据。
1 实验材料 Ultimate3000 型高效液相色谱仪;Waters2787
可变波长检测器;CQF － I － 6 型超声波清洗仪:上海音波电
科技公司;Bp211DAG 电子天平 :德国 Sartorius 公司。
圆柚酮对照品(4674 － 50 － 4，纯度以 98. 0%计):购于
美国 Sigma 公司;α －香附酮对照品(58546 － 55 － 7，纯度以
98. 0%计):购于成都普菲德生物技术有限公司;紫丁香苷对
照品(118 － 34 － 3，纯度以 98. 0%计):购于中国药品生物制
品检定所;长梗冬青苷对照品(42719 － 32 － 4，纯度以
98. 0%计):购于成都普菲德生物技术有限公司;复方救必应
胶囊 3 批样品(规格:每粒 0. 3 g，批号:KG40010、LG40004、
MG40001):购于广州白云山星群(药业)股份有限公司。乙
腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件与系统适用性实验 色谱柱:Phenomenex C18
色谱柱(250 mm ×4. 6 mm，5 μm);乙腈(A)－水(B)为流动
相，梯度洗脱［3 － 6］;检测波长(0 ～ 31 min，λ1 = 210 nm［7］，31
～ 65 min，λ2 = 242 nm［8 － 9］);流速为 0. 9 mL /min;柱温为
35℃;进样量 20 μL。理论塔板数均不低于 3 500，此系统条
件下各组分分离效果良好。梯度洗脱程序见表 1。
表 1 流动相梯度洗脱程序
时间(min) A(%) B(%)
0 ～ 12 26. 0 74. 0
12 ～ 31 26. 0→47. 0 74. 0→53. 0
31 ～ 50 47. 0→60. 0 53. 0→40. 0
50 ～ 65 60. 0→26. 0 40. 0→74. 0
2. 2 对照品溶液的制备 分别精密称取各对照品适量，分
别用甲醇溶解制成每 mL 中含紫丁香苷、长梗冬青苷、圆柚
酮和 α －香附酮 2. 116、3. 331、0. 525、0. 339 mg 的对照品储
备液。再分别精密量取各对照品储备液 5. 0、5. 0、1. 0、5. 0
mL，置 50 mL量瓶中，用甲醇溶液稀释至刻度，制成紫丁香
苷、长梗冬青苷、圆柚酮和 α － 香附酮分别为 0. 2116、
0. 3331、0. 0105、0. 0339 g /L的混合对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备 取复方救必应胶囊适量，研成细
粉，取约 0. 2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇溶
液 25 mL，密塞，称定总重量，超声处理 30 min，取出放冷，用
甲醇溶液补足减失的重量，摇匀后，用 0. 45 μm 微孔滤膜滤
过，取续滤液，即得供试品溶液。
2. 4 阴性对照溶液的制备 按照复方救必应胶囊质量标准
中规定的药味比例，严格按卫生部药品标准中药成方制剂第
10 册中收载的复方救必应胶囊工艺分别制备香附空白样品
和救必应空白样品。按照“2. 3”项下供试品溶液的制备方
法，分别制成香附阴性对照溶液和救必应阴性对照溶液。
2. 5 专属性实验 分别精密吸取复方救必应胶囊供试品溶
液、混合对照品溶液以及上述制备的 2 种阴性对照溶液各
20 μL，注入液相色谱仪，测定，结果显示阴性对照无干扰。
结果见图 1。
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2. 6 线性关系考察 精密吸取“2. 2”项下制备的对照品储
备液 0. 1、0. 2、0. 5、1. 0、2. 0 mL，分别置 10 mL 量瓶中，分别
用甲醇溶液稀释成系列浓度的混合对照品溶液。以峰面积
y为纵坐标，各对照品浓度 x 为横坐标，建立线性方程，线性
关系实验结果见表 2。
表 2 线性关系实验结果
所测组份 回归方程 线性范围 r
紫丁香苷 y = 1. 0163 × 106x + 491. 6 21. 16 ～ 423. 20 mg /L 0. 9997
长梗冬青苷 y = 1. 3416 × 106x － 105. 3 33. 31 ～ 666. 20 mg /L 0. 9992
圆柚酮 y = 9. 1952 × 105x － 123. 9 5. 25 ～ 105. 00 mg /L 0. 9999
α －香附酮 y = 8. 1957 × 105x － 289. 1 3. 39 ～ 67. 80 mg /L 0. 9995
2. 7 精密度试验 精密吸取“2. 2”项下混合对照品溶液 20
μL，连续进样 6 次，按上述色谱条件测定，记录色谱图，计算
峰面积的 ＲSD 值分别为紫丁香苷 0. 99%、长梗冬青苷
1. 02%、圆柚酮 1. 12%、α － 香附酮 0. 95%。表明精密度
良好。
2. 8 重复性试验 精密称取同一批供试品复方救必应胶囊
样品，按 2. 3 项下方法制备供试品溶液 6 份，依法测定，记录
紫丁香苷、长梗冬青苷、圆柚酮和 α －香附酮峰面积，计算各
组分含量，结果所测各组分含量的 ＲSD 值分别为紫丁香苷
0. 91%、长梗冬青苷 1. 18%、圆柚酮 1. 06%、α － 香附酮
0. 98%。表明重复性良好。
2. 9 稳定性试验 取同一批号的复方救必应胶囊供试品溶
液各 20 μL，分别于 0、4、8、12、24 h进样依法测定，计算紫丁
香苷、长梗冬青苷、圆柚酮和 α －香附酮峰面积的 ＲSD值，分
别为 0. 83%、1. 05%、1. 11%、0. 92%，结果显示 24 h 内供试
品溶液稳定。
2. 10 加样回收率试验 取已知含量的复方救必应胶囊(紫
丁香苷 26. 34 mg /g、长梗冬青苷 43. 19 mg /g、圆柚酮 1. 239
mg / g和 α －香附酮 4. 127 mg /g)6 份，研成细粉，取约 0. 1 g，
精密称定，置于 25 mL容量瓶中，精密加入 12 mL 混合对照
品溶液、甲醇溶液 13 mL，按“2. 3”项下操作，制得加样供试
品溶液。记录色谱图，计算各组分回收率，结果 3 个成份的
平均加样回收率(n = 6)分别为 96. 92%(0. 94%)、98. 55%
(0. 85%)、98. 68%(1. 51%)、99. 13%(1. 24%)。
表 3 复方救必应胶囊中的紫丁香苷、长梗冬青苷
圆柚酮、α －香附酮回收率测定
称取量
(mg)
样品中含量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均值
(%)
ＲSD
(%)
紫丁
香苷
0. 1009 2. 6577 2. 5392 5. 0967 96. 05
0. 0987 2. 5998 2. 5392 5. 1021 98. 55
0. 1013 2. 6682 2. 5392 5. 1346 97. 13
0. 1005 2. 6472 2. 5392 5. 0914 96. 26
0. 0995 2. 6208 2. 5392 5. 0701 96. 46
0. 1011 2. 6630 2. 5392 5. 1275 97. 06
96. 92 0. 94
长梗
冬青
苷
0. 1009 4. 3579 3. 9972 8. 2956 98. 51
0. 0987 4. 2629 3. 9972 8. 2017 98. 54
0. 1013 4. 3751 3. 9972 8. 3759 100. 09
0. 1005 4. 3406 3. 9972 8. 2674 98. 24
0. 0995 4. 2974 3. 9972 8. 1968 97. 55
0. 1011 4. 3665 3. 9972 8. 2983 98. 36
98. 55 0. 85
圆柚
酮
0. 1009 0. 1250 0. 1260 0. 2493 98. 65
0. 0987 0. 1223 0. 1260 0. 2485 100. 16
0. 1013 0. 1255 0. 1260 0. 2467 96. 19
0. 1005 0. 1245 0. 1260 0. 2479 97. 94
0. 0995 0. 1233 0. 1260 0. 2494 100. 08
0. 1011 0. 1253 0. 1260 0. 2501 99. 05
98. 68 1. 51
α －香
附酮
0. 1009 0. 4164 0. 4068 0. 8157 98. 16
0. 0987 0. 4073 0. 4068 0. 8171 100. 74
0. 1013 0. 4181 0. 4068 0. 8159 97. 79
0. 1005 0. 4148 0. 4068 0. 8207 99. 78
0. 0995 0. 4107 0. 4068 0. 8179 100. 12
0. 1011 0. 4172 0. 4068 0. 8167 98. 21
99. 13 1. 24
表 4 样品含量测定结果(n = 3，mg /g)
批号 紫丁香苷 长梗冬青苷 圆柚酮 α －香附酮
KG40010 26. 34 43. 19 1. 239 4. 127
LG40004 26. 28 43. 02 1. 242 4. 136
MG40001 26. 45 43. 29 1. 225 4. 119
2. 11 样品含量测定 取不同批号复方救必应胶囊样品 3
批，照“2. 3”项下方法制备供试品溶液，依法进样测定计算样
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品中紫丁香苷、长梗冬青苷、圆柚酮和 α －香附酮含量。结
果见表 4。
3 讨论
3. 1 流动相的选择 试验选择了甲醇 －水(68:32)、乙腈 －
水(10:90)、乙腈 －甲醇(1:3)与水 3 种流动相不同比例梯
度洗脱进行比对，结果显示，甲醇 －水 (68:32)与乙腈 －水
(10:90)溶液为流动相分离效果好，峰形好。
3. 2 提取溶剂及时间的考察 试验分别对提取溶剂(甲醇、
70%甲醇溶液、50%甲醇溶液)，提取时间(20、30、40 min)，
进行考察比较，结果显示甲醇溶液超声处理 30 min 效果
最佳。
3. 3 检测波长的选择 分别取圆柚酮、α －香附酮、紫丁香
苷和长梗冬青苷对照品溶液，进行紫外色谱扫描，结果紫丁
香苷和长梗冬青苷在 210 nm 波长处有较好吸收，圆柚酮、α
－香附酮在 242 nm波长处有较好吸收，故选用 210、242 nm
双波长进行测定。
3. 4 结论 高效液相色谱梯度洗脱法能有效地测定复方救
必应胶囊中 4 种主要成分的含量，样品中各组分能较好分
离，方法简便、准确、重现性好，可用于复方救必应胶囊相应
指标的质量控制。
参考文献
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药材中香附烯酮、圆柚酮和 α －香附酮［J］. 中成药，2015，37
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讨［J］. 中国医院药学杂志，2015，35 (5):389 － 392.
(修回日期:2016 － 03 － 29)
高效液相色谱法测定抗栓通络丸中丹酚酸 B的含量
谢长宏1，杨慈海2，宋 军2，左小明1
(1 荆门市中医医院(石化医院)·湖北 荆门 448000;2 荆门市食品药品监督检验所·湖北 荆门 448124)
摘 要 目的:建立高效液相色谱法测定抗栓通络丸中丹酚酸 B含量的方法。方法:色谱柱 Lichrom C18
柱(250 mm ×4. 6 mm，5 μm)，流动相为甲醇 －乙腈 －甲酸 －水 (30:10:1:59)，检测波长 286 nm，流速
1. 0 mL·min －1，柱温:25℃。结果:丹酚酸 B在 0. 1548 ～ 4. 9536 μg范围内峰面积与浓度呈良好的线性
关系，相关系数 r = 0. 9998;回收率为 98. 69%，相对标准偏差 ＲSD为 1. 12%。结论:本法灵敏、准确、专
属性强、重现性好，可作为抗栓通络丸中丹酚酸 B的含量测定方法。
关键词 @抗栓通络丸;丹酚酸 B
基金项目:2014 年湖北省荆门市科技计划项目
通讯作者:杨慈海，E － mail:1447558970@ qq. com
抗栓通络丸由黄芪、丹参、赤芍、刘寄奴、桑枝、何首乌、
桂枝、法半夏等 21 种中药材组成，系湖北省荆门市中医医院
专科建设的传统制剂，具有益气活血、化瘀通络的作用，更兼
有耐缺氧、抗疲劳、调节阴阳、增强免疫力等功效，二十多年
的实践证明对心血管疾病治疗效果切实可靠。其制法为丹
参、赤芍、刘寄奴、桑枝、何首乌、桂枝、法半夏、山楂等 8 味加
水煎煮浓缩后与其余当归等 13 味原药材细粉再与适量炼蜜
混合制丸，原报批标准中只有大黄和丹参的薄层鉴别，没有
含量测定，标准过于简单。丹参在抗栓通络丸中为君药，具
有活血去瘀、通经止痛、清心除烦、凉血消痈作用，其主要化
学成分有脂溶性的丹参酮类化合物和水溶性的酚酸类化合
物［1］，而丹酚酸 B在水溶性酚酸类成分中含量高且较稳定，
由此，参考中国药典［2］和相关文献资料［3 － 4］，采用高效液相
色谱法测定制剂中丹酚酸 B 的含量，对控制制剂质量有较
大意义。
1 实验材料
1. 1 仪器 DIONEX Ultimate 3000 高效液相色谱仪;Ulti-
mate3000 Diode Array Detector 紫外检测器;Chromeleon 色谱
工作站;AS51050A超声波清洗仪;德国 Sartorius BP211D 电
子天平。
1. 2 试药 丹酚酸 B对照品:中国药品生物制品检定所，批
号:111562 － 201212;抗栓通络丸:荆门市中医医院生产，批
号:20140415、20140708、20140901;阴性样品:自制。乙腈为
色谱纯，其它试剂为分析纯，水为超纯水。
2 方法与结果
·334·中国中医药科技 2016 年 7 月第 23 卷第 4 期 July 2016 Vol. 23 No. 4