全 文 ：国大容量注射液细菌内毒素限值原则为0.5 EU·ml-1 , 因
此 ,每毫升胞磷胆碱钠氯化钠注射液细菌内毒素限值不得过
0.5 EU 。
2.2　鲎试剂自凝试验
从 2 批鲎试剂中各取出 4 支 ,分别加入0.5 ml的细菌内
毒素检查用水溶解后各取0.1 ml置鲎试剂反应管中 ,再分别
加入0.1 ml细菌内毒素检查用水轻轻混匀 , 在(37±1)℃水
浴中放置 8 h , 8 支管均未形成凝胶。
2.3　鲎试剂灵敏度复核[ 2]
按照中国药典(2000 年版)二部方法进行 , 结果与标示
灵敏度相符 , 2 批鲎试剂灵敏度均符合。
2.4　干扰试验最大有效稀释倍数
最大有效稀释倍数 MVD=L·λ-1 , 本试验采用 λ为
0.25 EU·ml-1的鲎试剂 , 因此 , 胞磷胆碱钠氯化钠注射液
M VD=2。
2.5　干扰试验的预试验
用细菌内毒素检查用水将供试品按胞磷胆碱钠浓度配
制成 1※1 , 1※2 , 1※4 , 1※8 系列浓度溶液 , 记为 NPC , 另制
备同样系列浓度的供试液 , 并使每一浓度供试液均含有 2 λ
的内毒素 ,记为 PPC , 选择不同厂家的鲎试剂 , 每一浓度分别
取0.1 ml ,加入盛有0.1 ml的鲎试剂的试管中 , 每一浓度作 2
管 ,同时作阴性(NC)和阳性(PC)对照管 , 轻轻混匀封口 ,(37
±1)℃保温(60 ±2)min ,结果表明 , 胞磷胆碱钠氯化钠注射
液用不同厂家的鲎试剂在不同浓度均无干扰作用。见表 1。
表 1　胞磷胆碱钠氯化钠注射液干扰试验预试验
鲎试剂批号 供试品稀释倍数
1※1 1※2 1※4 1※8 PC NC
021119 NPC -- -- -- -- ++ --
021119 PPC ++ ++ ++ ++ ++ --
020703 NPC -- -- -- -- ++ --
020703 PPC ++ ++ ++ ++ ++ --
2.6　干扰试验
2.6.1　细菌内毒素标准对照(Es)溶液的制备[ 2] 　按中国药
典(2000 年版)二部附录细菌内毒素检查法进行。
2.6.2　含供试品内毒素(Et)溶液的制备　用稀释 2 倍供试
品溶液将 细菌内毒素制成0.5λ, 0.25λ, 0.125λ, 0.062 5λ, 用
不同厂家鲎试剂进行干扰试验 , 结果见表 2。
表 2　胞磷胆碱钠氯化钠注射液干扰试验
鲎试剂
批号 供试品
内毒素浓度(EU·ml-1)
0.5λ 0.25λ 0.125λ 0.062 5λ
阴性
对照
E值
(EU·ml-1)
021119 BET 水 ++++++++---------- 0.25(Es)
021119 021013 ++++++++-------- -- 0.25(Et)
021119 021014 ++++++++-------- -- 0.25(Et)
021119 021015 ++++++++-------- -- 0.25(Et)
020703 BET 水 ++++++++---------- 0.25(Es)
020703 021013 ++++++++-------- -- 0.25(Et)
020703 021014 ++++++++-------- -- 0.25(Et)
020703 021015 ++++++++-------- -- 0.25(Et)
　　由表 2 知 Et在0.5 Es～ 2.0 Es(包括0.5 Es和2.0 Es)之
间 , 说明供试品在该条件下不干扰试验。
2.7　供试品的细菌内毒素检测
用灵敏度为0.25 EU·ml-1(批号:020703)的鲎试剂 , 对
3 批供试品(供试品均在原浓度的基础上用细菌内毒素检查
用水稀释 2 倍)进行细菌内毒素检测 ,结果供试品管 、阴性管
均为阴性 , 供试品阳性管 、阳性管均为阳性。其结果表明 , 本
品用细菌内毒素检查法是可行的。
3　讨论
从试验结果可以看出 , 胞磷胆碱钠氯化钠注射液对
BET 法检查其细菌内毒素不存在干扰 , 可以替代热原法用
于该品种细菌内毒素的检测。 但为了确保试验结果的准确
性 、可靠性 , 检测时使用灵敏度为0.25 EU·ml-1的鲎试剂 ,
将检品 2 倍稀释后进行检测为佳。
参　考　文　献
1　中国药典[ S] .2000年版.二部.附录 XIX F.204
2　中国药典[ S] .2000年版.二部.附录 XI.86
(2003-10-08 收稿　2004-02-05 修回)
不同产地铁苋菜和绒毛龙芽草中没食子酸的含量测定
陈树和　(湖北中医学院附属医院药事部　武汉 430061)　方进波　刘焱文　(湖北中医学院药学系)
摘　要　目的:测定不同产地铁苋菜和绒毛龙芽草中没食子酸的含量 , 并考察不同提取溶剂对没食子酸含量测定结果的影
响。方法:采用 HPLC 法 , Attima C18柱(5 μm , 4.6 mm×250 mm),流动相为乙腈-0.1%三乙胺(稀磷酸调 pH 值至3.5)(1.5∶
98.5),流速1.0 ml·min-1 , 检测波长 212 nm。结果:线性回归方程为 Y =5.09×104+1.77×106X , r=0.999 8 , 线性范围
为0.830 4～ 4.152 0μg。6 个不同产地药材 , 以江西产铁苋菜和绒毛龙芽草中没食子酸含量最高 ,分别为0.545%和0.062%。
不同提取溶剂比较 ,以水为提取溶剂所测铁苋菜和绒毛龙芽草中没食子酸含量最高 , 分别为0.465%和0.036%。结论:不同
产地铁苋菜和绒毛龙芽草中没食子酸含量存在差异。
关键词　铁苋菜　绒毛龙芽草　没食子酸　HPLC
中图分类号:R927.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-049X(2004)10-0783-03
Determination of Gallic acid in Acalypha australisl L.and Agrimonia pi losa Ledeb.Var.nepalensis(D.Don)
783中国药师　　2004 年第 7 卷第 10 期
Nakai from Different Places of Production
Chen Shuhe(Affiliated Hospital of Hubei T raditional Chinese Medical College ,Wuhan 430061 , P.R.China);Fang Jinbo , Liu Yan-
w en (Hubei T raditional Chinese Medical College)
ABSTRACT　Objective:To determine Gallic acid in Acalypha australisl L.and Agrimonia pilosa Ledeb.Var.nepalensis(D.
Don)Nakai from different place of production , and inspect the influence of different solvent on the determining result of Gallic acid.
Method:The column A ttima C18 was used mobile phase:acetonitrilum-0.1% triethy laminum (1.5∶98.5), 0.1% trie thylamium
w hich was regulated to pH 3.5 with phosphoric acid.The flow rate w as 1.0 ml·min-1 , the waveleng th was at 212 nm.Result:The
reg ression equation was Y =5.09×104+1.77×106X (r=0.999 8), a linear range w as within 0.830 4-4.152 0μg.The highest
contents of Gallic acid in Acalypha australisl L.and Agrimonia pilosa Ledeb.Var.nepalensis(D.Don)Nakai from Jiangx i were
0.545% and 0.036%, respectively.In the different solvents , water w as the best solvent w ith that the highest determination of Gallic
acid detemined in Acalypha australisl L.and Agrimonia pilosa Ledeb.Var.nepalensis(D.Don)Nakai w as 0.465% and 0.036%,
respertively.Conclusion:The contents of gallic acid in Acalypha australisl L.and Agrimonia pilosa Ledeb.Var.nepalensis(D.
Don)Nakai which come from different place of origin w ere different.Water was the best solvent w ith that the determined Gallic acid
had the highest content.
KEY WORDS　Acalypha australisl L.;Agrimonia pilosa Ledeb.Var.nepalensis(D.Don)Nakai;Gallic acid;HPLC
　　铁苋菜为大戟科植物铁苋菜(Acalypha australisl L.)的
干燥全草 ,具有清热解毒 、利湿 、收敛 、止血之功效 ,主要含有
生物碱 、鞣质 、铁苋菜素(australisin)、没食子酸(Gallic acid)、
胡萝卜苷(Daucosterol)、β-谷甾醇(β-sitosterol)等成分[ 1 ～ 3] 。
绒毛龙芽草为蔷薇科植物绒毛龙芽草 Agrimonia pilosa
Ledeb.Var.nepalensis(D.Don)Nakai的干燥全草 , 具有收
敛 、止血 、消炎 、止痢之功效 , 其化学成分研究报道较少 , 根据
化学成分预试 , 主要含有鞣质 、有机酸(包括没食子酸)、苷
类 、黄酮 、氨基酸 、多糖等成分。其中没食子酸为铁苋菜和绒
毛龙芽草止血的有效成分 ,能促进血小板的粘附和聚积 , 有
利于血栓的形成 , 并使抗凝血酶(AT Ⅲ)活力降低 , 增加α2-
巨球蛋白(α2-MG)的含量 , 降低纤溶活性而促进血液凝
固[ 4] 。为了了解没食子酸在铁苋菜和绒毛龙芽草中的含量 ,
本文采用 HPLC ,对不同产地铁苋菜和绒毛龙芽草中没食子
酸的含量进行了测定 ,并考察了不同提取溶剂对没食子酸含
量测定结果的影响。
1　仪器与试药
日本 SHIMADZU LC -10AVP 液相色谱系统(LC -
10AVP 泵 , SPD-10A紫外检测器 , CTO-10AVP 柱温箱);
N2000 色谱工作站(浙江大学智能信息研究所);日本 SHI-
MADZU CIV-240IPC 紫外分光光度计;BP211D 电子分析
天平(西德 Sartorious)。
铁苋菜 、绒毛龙芽草购自湖北省药材公司 ,经湖北中医
学院鉴定教研室吴和珍博士鉴定。没食子酸对照品购自中
国药品生物制品检定所 , 纯度为98.87%。 所用试剂均为分
析纯 ,水为双蒸水。
2　方法与结果
2.1　色谱条件与系统适用性试验
色谱柱 Attima C18柱(5 μm , 4.6 mm ×250 mm);流动
相:乙腈-0.1%三乙胺(稀磷酸调 pH 至3.5)(1.5∶98.5);流
速:1.0 ml·min-1;检测波长:212 nm。理论塔板数按没食子
酸峰计算应不低于3 000[ 5] 。
2.2　对照品溶液的制备
精密称取经五氧化二磷减压干燥至恒重的没食子酸对
照品适量 , 加 50%甲醇制成每 1 ml含0.4 mg 的溶液 ,即得。
2.3　供试品溶液的制备
2.3.1　铁苋菜供试品溶液的制备　取铁苋菜粉末0.5 g , 精
密称定 , 精密加入 50 ml蒸馏水 , 精密称定 , 加热回流 2 h , 放
冷 ,精密称定 ,补加水至原重量 , 滤过 ,弃去初滤液 , 残渣中再
精密加入 25 ml蒸馏水 , 重复上述操作 ,合并两次续滤液 , 精
密移取25 ml , 于水浴上蒸干 ,残渣加 50%甲醇适量溶解 , 转
移至 5 ml量瓶中 , 加 50%甲醇至刻度 , 摇匀 ,即得。
2.3.2　绒毛龙芽草供试品溶液的制备　取绒毛龙芽草粉末
5 g ,精密称定 , 照铁苋菜供试品溶液制备方法 , 同法制备 , 即
得。
2.4　标准曲线的绘制
分别精密吸取对照品溶液 2 , 4 , 6 , 8 , 10 μl , 注入液相色
谱仪进行测定 , 以进样量为横坐标 ,峰面积为纵坐标 ,绘制标
准曲线 ,结果表明没食子酸在0.830 4 ～ 4.152 0 μg 范围内
与峰面积呈良好线性关系。 回归方程为 Y =5.09×104 +
1.77×106X , r=0.999 8。
2.5　不同产地铁苋菜和绒毛龙芽草中没食子酸的含量测定
取不同产地铁苋菜和绒毛龙芽草 , 按 2.3 项下方法制
备 ,分别精密吸取铁苋菜供试品溶液 、绒毛龙芽草供试品溶
液与对照品溶液各 20 μl , 注入液相色谱仪。HPLC 图见图
1 ,测定结果见表 1。
A.没食子酸对照品溶液　B.铁苋菜供试品溶液
C.绒毛龙芽草供试品溶液
图 1　没食子酸 HPLC 图
784 China Pharmacist 2004 , Vol.7　No.10
2.6　不同提取溶剂对没食子酸含量测定的影响
取产自湖北黄冈地区的铁苋菜和绒毛龙芽草 ,分别以甲
醇 、50%甲醇 、无水乙醇 、水为提取溶剂 , 按各自供试品溶液
制备方法进行提取和制备 ,分别精密吸取供试品溶液与对照
品溶液各 20 μl ,注入液相色谱仪 , 测定。结果见表 2。
表 1　不同产地铁苋菜和绒毛龙芽草中
没食子酸含量(%, n=2)
药材来源 湖北黄冈 湖北孝感 江苏 江西 安徽亳州安徽太和
铁苋菜 0.468 0.375 0.051 0.545 0.458 0.437
绒毛龙芽草 0.038 0.057 0.033 0.062 0.044 0.051
表 2　不同提取溶剂测得铁苋菜和绒毛
龙芽草中没食子酸含量(%, n=2)
提取溶剂 甲醇 50%甲醇 无水乙醇 水
铁苋菜 0.012 0.031 0.009 0.465
绒毛龙芽草 0.005 0.015 0.003 0.036
3　讨论
3.1　没食子酸为可水解鞣质的结构单元 , 广泛存在于多种
中药中。本文所测铁苋菜和绒毛龙芽草中没食子酸的含量 ,
为样品中所含游离没食子酸和水解出的没食子酸的含量总
和。
3.2　绒毛龙芽草为仙鹤草[ 蔷薇科植物龙芽草 Agrimonia
pilosa Ledeb.Var.Japonica(Miq.)Nakai] 的变种 , 其化学
成分和功效与仙鹤草十分相似 , 但至目前为止 ,还未见有关
绒毛龙芽草化学成分研究的报道。本文采用 HPLC 法 , 证实
了绒毛龙芽草含有没食子酸。
3.3　铁苋菜和绒毛龙芽草中没食子酸的含量因产地不同而
存在一定的差异。本文通过比较 6 个不同产地药材含量 , 结
果以江西产铁苋菜和绒毛龙芽草中没食子酸含量最高 ,分别
为0.545%和0.062%。
3.4　提取溶剂 、提取时间和温度不同 , 对没食子酸的含量测
定结果影响较大。本文通过不同提取溶剂比较 , 以水为提取
溶剂所测得的铁苋菜和绒毛龙芽草中没食子酸的含量最高 ,
表明在以水为溶剂提取过程中 , 铁苋菜和绒毛龙芽草中部分
可水解鞣质水解为没食子酸 , 故本文在测定铁苋菜和绒毛龙
芽草中没食子酸含量时 ,采用水为溶剂提取 , 其测定结果可
以充分反映铁苋菜和绒毛龙芽草中不同药材的内在质量。
参　考　文　献
1　江苏新医学院编.中药大辞典[ M] .上海:上海科学技术出版社.1986.
1853-1855
2　董卫峰 ,林中文 ,孙汉董.铁苋菜中的一个新化合物[ J] .云南植物研究 ,
1994 , 16(4):413-416
3　张秀尧 ,凌罗庆 ,周志锦.铁苋菜的有效成分研究[ J] .现代应用药学 ,
1991 , 8(2):14
4　王美娜 ,林蓉 ,刘俊田 ,等.铁苋菜止血作用机理[ J] .西北药学杂志 ,1996 ,
11(5):209-211
5　方进波 ,杨巧容 ,何再安 ,等.灯心止血糖浆的质量标准研究[ J] .中国中医
药信息杂志 , 2003 ,10(3):36-37
(2003-10-17 收稿　2004-03-26 修回)
糖肾康颗粒多糖提取工艺筛选
陈浩　(安徽中医学院第一附属医院　合肥 230031)
摘　要　目的:确定提取糖肾颗粒中多糖的最佳工艺。方法:采取正交设计法以提取时间(A), 加入水量(B)和提取次数(C)
作为因素。结果:A因素和 C 因素对多糖含量的影响具有显著意义 , B 因素的影响不大。结论:最佳提取工艺为 A 2B1C2 , 即
提取 2 次 ,时间为每次 1 h ,加水量分别为 10 倍量和 8 倍量。
关键词　糖肾康颗粒　多糖类　正交试验　提取工艺
中图分类号:R283;R587.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-049X(2004)10-0785-02
Study on Extracting Craft of Polysaccharides in Tangshenkong Granules
Chen Hao(the First Affiliated hospital of Anhui College of Chinese Medicine , Hefei 230031 , P.R.China)
ABSTRACT　Objective:To define optimum ex tracting craf t of polysaccharides in Tangshenkong granules.Method:The orthogonal
design was used and refluxing time(A), water totalling(B), and extraction time(C)were defined as factors o f the design.Result:
Factor A and facto r C had no table influence on the content of poly saccharides.Conclusion:Optimum ex tracting craft was defined as
follows:A2B1C2.
KEY WORDS　Tangshenkong granules;Po lysaccharide;Orthogonal test;Extracting craft
　　糖尿病性肾病(diabetic nephropathy , DN)是糖尿病最严
重的并发症之一 ,也是糖尿病患者死亡的主要原因。目前治
疗 DN 尚无特效方法 。有效控制血糖是防治 DN 的重要手
段[ 1] 。本院名老中医根据 DN 早期主要表现气阴两虚 , 瘀血
阻络之候 ,故治以益气养阴 ,化瘀通络法而拟科研制剂糖肾
康颗粒 , 临床上不仅能较好地改善早期 DN 的临床症状如乏
力 、短气 、口渴 、尿多 、尿浑浊等 , 而且有显著的降低尿微量蛋
白等效果 , 有预防和治疗早期 DN 的作用。
785中国药师　　2004 年第 7 卷第 10 期