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双波长薄层扫描法定量测定二至丸中齐墩果酸与熊果酸
胡俊明1， 蒋晓煌2， 蒋孟良2*
(1． 湖南省平江县大坪乡卫生院，湖南 平江 414509;2． 湖南中医药大学，湖南 长沙 410208)
收稿日期:2012-05-14
作者简介:胡俊明 (1969—) ，男，主管中药师，主要从事中药制剂与质量研究。Tel:13787843388，E-mail:290454761@ qq. com
* 通信作者:蒋孟良 (1954—) ，男，教授，硕士生导师，主要从事中药炮制与制剂研究。
摘要:目的 建立同时测定二至丸中齐墩果酸与熊果酸的方法。方法 采用双波长薄层扫描法，吸附剂为硅胶 G，展
开剂为环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-冰乙酸 (20∶ 5∶ 8∶ 0. 1) ，显色剂为 10%硫酸乙醇溶液，110 ℃加热显色，测定波长
530 nm，参比波长 700 nm。结果 齐墩果酸在 1. 02 ～ 10. 2 μg 范围呈良好的线性关系，平均回收率为 97. 24%，RSD
为 1. 81% (n = 6) ，齐墩果酸的平均质量分数为 10. 73 mg /g;熊果酸在 0. 49 ～ 4. 9 μg范围呈良好的线性关系，平均回
收率为 96. 98%，RSD为 1. 37% (n = 6) ，熊果酸的平均质量分数为 5. 34 mg /g。结论 该方法简便、快速、准确。
关键词:二至丸;齐墩果酸;熊果酸;双波长扫描法
中图分类号:R927. 2 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2013)06-1343-03
doi:10． 3969 / j． issn． 1001-1528． 2013． 06． 058
二至丸始载明代《医便》，由女贞子和墨旱莲等量配伍
组成。具有补益肝肾，滋阴止血。用于肝肾阴虚，眩晕耳
鸣，咽干鼻燥，腰膝酸痛，月经量多［1］。现代研究表明二
至丸具有保肝降酶、滋阴、抗骨质疏松等多种生物活
性［2-6］。《中国药典》2005 年版与 2010 年版一部所载二至
丸均是用双波长扫描法测定其中齐墩果酸量，因女贞子中
既含有齐墩果酸，又含有熊果酸，二者为同分异构体［7］，
在此条件下不能将其二者分离进行薄层定量。故《中国药
典》方法实际上测得的是齐墩果酸与熊果酸二者含有量之
和。经采用严氏方法［8］，将点样后的薄层板预处理，再展
开测定，其测得结果准确，简单快捷，可更好、更准确地
控制二至丸的内在质量标准。
1 实验材料
1. 1 仪器 日本岛津 CS—930 型双波长薄层扫描分析仪;
AB135S型电子分析天平 (分度值0. 000 01 g) (梅特勒-托
利多仪器 (上海)有限公司) ;DK—S22 型电热恒温水浴
锅 (上海精宏实验设备有限公司) ;WGL—65(B)型电热
鼓风干燥箱 (天津市泰斯特仪器有限公司) ;10 μL 微量进
样器 (平头，上海安亭微量进样器厂)。
1. 2 试剂 齐墩果酸与熊果酸对照品，中国药品生物制品
检定所 (批号分别为 110709-200905、110742-200810) ;硅
胶 G 薄层板 (10 cm × 20 cm) :德国默克集团 (Merck
KGaA) ;环己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、冰乙酸、碘、硫
酸、乙醇等均为分析纯。
1. 3 药品 二至丸［1］由江西仁丰药业有限公司提供，批
号:20101203、20110902、20110903。
2 方法与结果
2. 1 对照品溶液的制备 精密称取 105 ℃恒定质量的齐墩
果酸与熊果酸对照品 25. 50 mg 与 12. 25 mg，分别置 25 mL
量瓶中，加甲醇制成每 1 mL 含齐墩果酸 1. 02 mg /mL、含
熊果酸 0. 49 mg /mL的两种溶液，备用。
2. 2 供试品溶液的制备 取本品研细，取约 0. 5 g，精密
称定，置 250 mL索氏提取器中，加乙酸乙酯约 60 mL，加
热回流提取 6 h，提取液回收乙酸乙酯至干，残渣加乙酸乙
酯使溶解，转移至 5 mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作
为供试品溶液。
2. 3 空白溶液的制备 取除去女贞子的二至丸研细，取约
0. 5 g，精密称定，同供试品溶液的制备方法制备，得空白
对照溶液。
2. 4 预处理、层析及测定 精密吸取供试品溶液 2 μL、对
照品溶液 1 μL与 4 μL (叠加点样，先点一种，点完后再点
另一种) ，分别交叉点于同一硅胶 G薄层板上，将薄层板点
样的一端浸入 1%碘-二氯甲烷溶液中约 12 ～ 15 mm，使溶
液没过斑点迅速取出，立即覆以一玻璃板，30 min 后取下
玻璃板，热风吹 2 ～ 3 min，挥去薄层板上残留的溶液。以
环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-冰乙酸 (20∶ 5 ∶ 8 ∶ 0. 1)为展开
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剂，展开，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇溶液，在 110
℃加热至斑点清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻
璃板，周围用透明胶固定，照薄层色谱法 (《中国药典》
2010 年版一部附录Ⅵ B薄层扫描法)进行扫描，波长 λs =
530 nm，λR = 700 nm，测量供试品吸光度积分值与对照品
吸光度积分值，外标两点法计算，即得。
2. 5 线性关系的考察 精密吸取上述齐墩果酸与熊果酸对
照品溶液各 1、2、4、6、8、10 μL，分别点于薄层板上，
按上述 2. 4 项方法测定吸光度积分值，以齐墩果酸与熊果
酸进样量为自变量 (X) ，峰面积积分值为因变量 (Y) ，进
行线性回归，得回归方程 Y齐墩果酸 = 1 120. 1X + 271. 29，r =
0. 998 5;Y熊果酸 = 1 085. 1X + 71. 034，r = 0. 998 2。
实验表明，齐墩果酸与熊果酸在 1. 02 ～ 10. 2 μg 与
0. 49 ～ 4. 9 μg范围内具良好的线性关系。
2. 6 精密度试验 精密吸取齐墩果酸与熊果酸对照品溶液
4 μL，分别点于 2 块薄层板上，各点 6 份，同上述 2. 4 项进
行测定，结果齐墩果酸与熊果酸的 RSD 分别为 1. 87%与
2. 09%，表明仪器精密度良好。
2. 7 空白试验 ( 阴性干扰试验) 精密吸取供试品溶液、
齐墩果酸对照品溶液、熊果酸对照品溶液与空白对照溶液
各 2 μL，分别点于同一块薄层板上，同上述 2. 4 项方法展
开、显色，结果，空白对照无齐墩果酸和熊果酸斑点，故
阴性无干扰，见图 1。
1． 齐墩果酸与熊果酸 2． 熊果酸 3． 二至丸 4 阴性
图 1 二至丸薄层色谱图
2. 8 稳定性试验 精密吸取样品供试液 2 μL 按上述方法
于 0、10、20、40、60 min测定，结果，齐墩果酸与熊果酸
峰面积 RSD分别为 1. 64%与 1. 72%。结果表明样品 60 min
内测定稳定。但文献认为显色后 30 min测定较好［8］。
2. 9 重复性试验 取同一批二至丸样品 5 份，按上述方法
进行提取、展开、显色、测定，齐墩果酸与熊果酸质量分
数平均值为 10. 30 mg /g 与 5. 17 mg /g，RSD 分别为 1. 53%
与 1. 86%，结果表明此方法重复性良好。
2. 10 加样回收试验 取已知含有量 (含齐墩果酸 10. 06
mg /g、熊果酸 5. 00 mg /g)的二至丸样品研细，精密称定
0. 25 g，精密加入 1. 02 mg /mL 齐墩果酸与 0. 49 mg /mL 熊
果酸对照品溶液各 2. 5 mL，同供试品液的制备方法制备样
品供试液，平行 6 份，按上述方法测定，计算回收率，结
果见表 1。
表 1 齐墩果酸与熊果酸加样回收试验结果
对照品
名称
取样量
/g
原有量
/mg
添加量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回
收率 /%
RSD
/%
齐墩果酸
0. 250 1 2. 516 0 2. 550 0 4. 988 5 96. 96
0. 253 2 2. 547 2 2. 550 0 4. 952 6 94. 33
0. 248 6 2. 500 9 2. 550 0 4. 961 3 96. 49
0. 251 3 2. 528 1 2. 550 0 5. 024 5 97. 90
0. 246 4 2. 478 8 2. 550 0 4. 986 4 98. 34
0. 250 7 2. 522 0 2. 550 0 5. 057 5 99. 43
97. 24 1. 81
熊果酸
0. 250 1 1. 250 5 1. 225 0 2. 431 4 96. 40
0. 253 2 1. 266 0 1. 225 0 2. 458 2 97. 32
0. 248 6 1. 243 0 1. 225 0 2. 430 1 96. 91
0. 251 3 1. 256 5 1. 225 0 2. 453 2 97. 69
0. 246 4 1. 232 0 1. 225 0 2. 441 7 98. 75
0. 250 7 1. 253 5 1. 225 0 2. 414 9 94. 81
96. 98 1. 37
2. 11 样品测定 取二至丸 3 批，按照上述方法制备样品
供试液，同法测定，结果见表 2。
表 2 二至丸样品测定结果 (n =3，x ± s)
批号
取样量
/ g
齐墩果酸
/ (mg·g － 1)
熊果酸
/ (mg·g － 1)
20101203 0. 506 2 11. 00 ± 0. 55 5. 30 ± 0. 28
20110902 0. 500 7 10. 57 ± 0. 38 5. 27 ± 0. 32
20110903 0. 501 6 10. 62 ± 0. 46 5. 46 ± 0. 36
均数 10. 73 5. 34
RSD /% 2. 19 1. 91
根据上述 3 批样品测定结果，所测二至丸中齐墩果酸
的量符合《中国药典》不得少于 8. 0 mg的规定。
3 讨论与小结
本测定方法基本参照《中国药典》2010 年版一部二至
丸项下齐墩果酸的含量测定方法，因其不能将齐墩果酸与
熊果酸分离，故测定结果不准确，经改进采用严华等人的
方法［8］预处理后可将二者分离，使测定结果更准确。
1%碘-二氯甲烷溶液浸泡立即取出后，应用玻璃板覆
盖 30 min 以上;预处理后，用《中国药典》环己烷-丙酮-
乙酸乙酯 (5∶ 2∶ 1)为展开剂也行，但是，严华等报道的展
开剂分离效果更好，Rf 值更适当。喷 10% 硫酸乙醇溶液
110 ℃烘至显色清晰后，应立即用等大的玻璃板覆盖，周围
并用透明胶封严，以免斑点氧化褪色。
齐墩果酸与熊果酸的定量测定方法采用 HPLC 法的也
很多［9-10］，但因其为末端吸收，而测定时间长、成本高、
速度慢，而 TLCS法解决了过这些问题，可以在同一块薄层
板上同时测定多个样品，且速度快。
本品中除女贞子含齐墩果酸外，墨旱莲也有［11-12］，但
该制剂墨旱莲为水提取，故墨旱莲中并没有检测到齐墩果
酸。齐墩果酸为植物药中广泛存在的成分，要显示其特异
性，建议《中国药典》下一版，二至丸含量测定项下改为
测定女贞子苷。
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HPLC法快速定量测定硫酸长春新碱
袁 琦， 徐 玫* ， 赵 辉， 杨 浩
(河南大学药学院，河南 开封 475004)
收稿日期:2012-05-28
作者简介:袁 琦 (1974—) ，女，副教授，主要从事药物分析教学及科研。Tel: (0378)3880680，E-mail:yq@ henu. edu. cn
* 通信作者:徐 玫 (1963—) ，女，副教授，主要从事药物分析教学及科研。Tel: (0378)3880680，E-mail:722300@ henu. edu. cn
摘要:目的 运用 HPLC法测定硫酸长春新碱的量，并对其方法学进行验证，以确定最优方法。方法 色谱柱为 Hy-
persil C18 (4. 60 mm ×250 mm，5 μm) ;流动相为甲醇-乙腈-0. 5%三乙胺水溶液 (20∶ 20∶ 60，以冰醋酸调节 pH = 3) ;
检测波长 297 nm;体积流量 1. 00 mL /min;柱温 25 ℃。结果 硫酸长春新碱的质量浓度在 49. 86 ～ 398. 88 μg /mL范围
内，线性关系良好，回归方程为 Y = 2. 300 6X + 2. 385 7，R2 = 0. 998 2。结论 HPLC 法具有较高的分离能力，可用于
注射用硫酸长春新碱的定量测定。
关键词:高效液相色谱法;硫酸长春新碱;长春花
中图分类号:R284. 1 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2013)06-1345-03
doi:10． 3969 / j． issn． 1001-1528． 2013． 06． 059
长春花为夹竹桃科植物长春花 Catharanthus roseus 的全
草，迄今从中已经分离出 70 余种生物碱，其中对长春新碱
和长春碱的应用最为广泛［1］。长春新碱是二聚吲哚类化合
物，主要存在于长春花叶中，是临床常用的一种广谱抗肿
瘤药，主要用于治疗急性淋巴细胞性白血病、霍奇金病和
恶性淋巴瘤等［2］。
长春新碱为白色粉末，具有引湿性，遇光或热易变黄，
2010 年版《中国药典》(二部)用紫外分光光度法测定注
射用硫酸长春新碱粉针剂［3］。目前随着各种新剂型的不断
出现，其所用辅料的不断变化，可能会对紫外分光光度法
定量测定造成一定的干扰。而高效液相法由于其分离效能
高，灵敏度好等优点，可用于硫酸长春新碱类制剂的定量
测定［4-10］。本实验研究了利用高效液相色谱法测定注射用
硫酸长春新碱粉针剂的条件。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 Waters—e2695 高效液相色谱仪 (Waters 公
司) ，Waters—2489 可变波长紫外检测器 (Waters 公司) ，
UV—1600 型紫外可见分光光度计 (北京瑞利) ，BP—211D
电子天平 (德国 Sartorius)。
1. 2 试剂及样品 甲醇为色谱纯，水为二次重蒸水，其他
试剂均为分析纯。粉针剂硫酸长春新碱 (广东岭南制药有
限公司) ;硫酸长春新碱对照品 (中国药品生物制品检定
所，纯度 97. 5%)。
2 方法与结果
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