全 文 ：第４４卷 第２期
２０１６年２月
西北农林科技大学学报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ Ａ＆Ｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔ．Ｓｃｉ．Ｅｄ．）
Ｖｏｌ．４４ Ｎｏ．２
Ｆｅｂ．２０１６
网络出版时间：２０１６－０１－０８ １０：２２ ＤＯＩ：１０．１３２０７／ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｎｗａｆｕ．２０１６．０２．０２２
网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／６１．１３９０．Ｓ．２０１６０１０８．１０２２．０４４．ｈｔｍｌ
基于线粒体ＣＯⅠ和ＣＯⅡ基因的沙果小食心虫与
梨小食心虫的分子鉴定
［收稿日期］ ２０１４－０６－３０
［基金项目］ 国家自然科学基金项目（３１０７１６８７）；教育部高等学校博士学科点专项科研基金（博导类）项目（２０１１０２０４１１０００１）；西北
农林科技大学人才引进项目；国家科技支撑计划项目（２０１２ＢＡＫ１１Ｂ０３）
［作者简介］ 王 康（１９８９－），男，陕西咸阳人，在读硕士，主要从事农业昆虫和害虫防治研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｋａｎｇｗａｎｇ＠ｎｗｓｕａｆ．ｅｄｕ．ｃｎ
［通信作者］ 陈茂华（１９７１－），男，湖北武汉人，教授，博士生导师，主要从事昆虫种群遗传学和分子毒理学研究。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｍａｏｈｕａ．ｃｈｅｎ＠ｎｗｓｕａｆ．ｅｄｕ．ｃｎ
王 康，李玉婷，郑 燕，段辛乐，张 蒙，彭 雄，陈茂华
（西北农林科技大学 植物保护学院，农业部西北黄土高原作物有害生物综合治理重点实验室，
植保资源与病虫害治理教育部重点实验室，陕西 杨凌７１２１００）
［摘 要］ 【目的】建立基于线粒体ＣＯⅠ和ＣＯⅡ基因序列的沙果小食心虫、梨小食心虫分子鉴定方法。【方
法】田间采集试虫，利用ＰＣＲ和基因测序技术，扩增２种食心虫的线粒体ＣＯⅠ和ＣＯⅡ基因，将获得的ＣＯⅠ和ＣＯⅡ
基因序列在ＧｅｎＢａｎｋ中进行ＢＬＡＳＴ比对，并通过ＧｅｎｅＤｏｃ软件分析基因序列相似性，利用 Ｍｅｇａ ５．０５软件分别计
算基于ＣＯⅠ和ＣＯⅡ基因序列的遗传距离，并分别构建ＣＯⅠ和ＣＯⅡ基因的系统发育树。【结果】在分析的２种食心
虫样本中，沙果小食心虫ＣＯⅠ基因的种内相似度在９９．４％以上，梨小食心虫ＣＯⅠ基因的种内相似度在９９．６％以
上，２种食心虫ＣＯⅠ基因的种间相似度为９５．０％～９５．６％；沙果小食心虫ＣＯⅡ基因的种内相似度在９９．０％ 以上，
梨小食心虫ＣＯⅡ基因的种内相似度在９９．３％以上，２种食心虫ＣＯⅡ基因的种间相似度为９４．６％～９５．５％；２种食
心虫ＣＯⅠ基因种间存在３０个稳定变异位点，ＣＯⅡ基因种间有２６个稳定变异位点。２种食心虫种内遗传距离为
０．００１～０．００６（ＣＯⅠ）和０．００１～０．０１０（ＣＯⅡ），种间遗传距离为０．０４６～０．０５２（ＣＯⅠ）和０．０４７～０．０５７（ＣＯⅡ），基于
ＣＯⅠ和ＣＯⅡ基因的种间遗传距离均显著大于种内遗传距离。分别构建ＣＯⅠ和ＣＯⅡ基因单倍型的系统发育树，结
果显示，在２个基因的系统发育树上，２种食心虫的基因序列分别位于不同的进化支，且置信度均达到１００％，同种食
心虫的基因序列位于相同的进化枝。【结论】可以根据本研究所用的ＣＯⅠ和ＣＯⅡ基因序列的差异性，进行沙果小食
心虫和梨小食心虫的分子鉴定。
［关键词］ 沙果小食心虫；梨小食心虫；ＣＯⅠ基因；ＣＯⅡ基因；单倍型；分子鉴定
［中图分类号］ Ｓ７６３．４２；Ｑ７８ ［文献标志码］ Ａ ［文章编号］ １６７１－９３８７（２０１６）０２－０１５６－０９
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａ ｄｉｍｏｒｐｈａ Ｋｏｍａｉ（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ：
Ｔｏｒｔｒｉｃｉｄａｅ）ａｎｄ Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａ ｍｏｌｅｓｔａ Ｂｕｓｃｋ（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ：
Ｔｏｒｔｒｉｃｉｄａｅ）ｂａｓｅｄ ｏｎ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＣＯⅠａｎｄ ＣＯⅡｇｅｎｅｓ
ＷＡＮＧ Ｋａｎｇ，ＬＩ Ｙｕ－ｔｉｎｇ，ＺＨＥＮＧ Ｙａｎ，ＤＵＡＮ Ｘｉｎ－ｌｅ，
ＺＨＡＮＧ Ｍｅｎｇ，ＰＥＮＧ Ｘｉｏｎｇ，ＣＨＥＮ Ｍａｏ－ｈｕａ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｃｒｏｐ Ｐｅｓｔ Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ Ｐｅｓｔ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｎ ｔｈｅ Ｌｏｅｓｓ Ｐｌａｔｅａｕ ｏｆ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ａｎｄ Ｐｅｓｔ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ
Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ Ａ＆Ｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ，Ｓｈａａｎｘｉ ７１２１００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ａｉｍｅｄ ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｉｄｅｎｔｉｆｉｎｇ Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａ ｄｉｍｏｒｐｈａ
Ｋｏｍａｉ ａｎｄ Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａ ｍｏｌｅｓｔａ Ｂｕｓｃｋ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＣＯⅠａｎｄ ＣＯⅡｇｅｎｅｓ．【Ｍｅｔｈｏｄ】ＰＣＲ ａｎｄ
ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｏｂｔａｉｎ ＣＯⅠａｎｄ ＣＯⅡｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｗｏ ｓｐｅ－
ｃｉｅｓ ｃｏｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ａｐｐｌｅ ｏｒｃｈａｒｄｓ．Ｔｈｅ ａｃｑｕｉｒｅｄ ＣＯⅠａｎｄ ＣＯⅡｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｗｅｒｅ ｖｅｒｉｆｉｅｄ ｂｙ ＢＬＡＳＴ ｐｒｏ－
ｇｒａｍ ｉｎ ＧｅｎＢａｎｋ．ＧｅｎｅＤｏｃ ｗａｓ ａｌｓｏ ｕｓｅｄ ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．Ｍｅｇａ
５．０５ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ａｎｄ ｔｏ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ ｔｈｅ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅｓ ｏｆ
ＣＯⅠａｎｄ ＣＯⅡｇｅｎｅ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．【Ｒｅｓｕｌｔ】Ｔｈｅ ｉｎｔｒａｓｐｅｃｉｆｉｃ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ ｏｆ ＣＯⅠｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ
Ｇ．ｄｉｍｏｒｐｈａ ａｎｄ Ｇ．ｍｏｌｅｓｔａ ｗｅｒｅ ａｂｏｖｅ ９９．４％ａｎｄ ９９．６％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｗｈｉｌｓｔ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｆｉｃ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ
ｏｆ ＣＯⅠ ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅｍ ｗａｓ ９５．０％－９５．６％．Ｔｈｅ ｉｎｔｒａｓｐｅｃｉｆｉｃ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ ｏｆ ＣＯⅡｓｅ－
ｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｇ．ｄｉｍｏｒｐｈａａｎｄ Ｇ．ｍｏｌｅｓｔａ ｗｅｒｅ ａｂｏｖｅ ９９．０％ａｎｄ ９９．３％，ｗｈｉｌｅ ｉｔｓ ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｆｉｃ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｂｅ－
ｔｗｅｅｎ ｔｈｅｍ ｗａｓ ９４．６％－９５．５％．Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ３０ｖａｒｉａｂｌｅ ｓｉｔｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ ＣＯⅠｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｆｒｏｍ
ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｗｏ ｓｐｅｃｉｅｓ，ａｎｄ ２６ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ ＣＯⅡｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．Ｔｈｅ ｉｎｔｒａｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅｓ
ｗｅｒｅ ０．００１－０．００６（ＣＯⅠ）ａｎｄ ０．００１－０．０１０（ＣＯⅡ），ｗｈｅｒｅａｓ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅｓ ｗｅｒｅ
０．０４６－０．０５２（ＣＯⅠ）ａｎｄ ０．０４７－０．０５７（ＣＯⅡ）．Ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈ－
ｅｒ ｔｈａｎ ｉｎｔｒａｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅ．Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＣＯⅠ ｇｅｎｅ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ａｎｄ ＣＯⅡ ｇｅｎｅ
ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｓｐｅｃｉｅｓ ｗｅｒｅ ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｂｒａｎｃｈ，ｗｈｅｒｅａｓ
ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｐｅｃｉｅｓ ｗｅｒｅ ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｂｒａｎｃｈｅｓ，ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｂｏｏｔｓｔｒａｐ ｖａｌｕｅ ｏｆ
１００％．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】Ｔｈｅ ＣＯⅠａｎｄ ＣＯⅡｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｃａｎ ｂｅ ａｐｐｌｉｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇ．ｄｉｍｏｒｐｈａａｎｄ Ｇ．ｍｏｌｅｓｔａ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａ ｄｉｍｏｒｐｈａ；Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａ ｍｏｌｅｓｔａ；ＣＯⅠｇｅｎｅ；ＣＯⅡｇｅｎｅ；ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ；ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉ－
ｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
沙果小食心虫（Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａ ｄｉｍｏｒｐｈａ Ｋｏｍａｉ）
和梨小食心虫（Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａ ｍｏｌｅｓｔａ Ｂｕｓｃｋ）是重要
的蛀果害虫，二者均属于鳞翅目（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ）卷蛾
科（Ｔｏｒｔｒｉｃｉｄａｅ）。沙果小食心虫寄主植物为苹果、
沙果、李等，在我国部分地区报道有发生［１－２］。梨小
食心虫又名东方果蛀蛾，寄主植物主要为桃、苹果、
梨、杏、李、山楂等，是世界性的主要蛀果害虫之一，
在我国分布广泛［３］。沙果小食心虫和梨小食心虫经
常混合发生，而且发生期部分重叠，二者幼虫和成虫
外部形态都非常相似，而且性信息素主要成分亦相
似［４－５］，因此在田间调查和监测种群动态时，准确鉴
定这２种食心虫十分困难［１，６－７］。
基于ＰＣＲ技术的分子鉴定可以检测不同物种
间及相同物种内不同个体间的细微差异，这为物种
鉴定提供了新的手段［８－１０］。线粒体ＤＮＡ具有基因
序列相对保守、无重组和单拷贝、进化速率适中、易
于检测等优点，因此常被应用于昆虫的分子鉴定与
系统进化研究之中，其中线粒体细胞色素氧化酶亚
基Ⅰ（ＣＯⅠ）和线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅱ（ＣＯ
Ⅱ）等基因应用较为广泛［１１－１２］。常虹等［１３］基于线粒
体ＣＯⅠ基因构建了齿小蠹属（Ｉｐｓ）昆虫的快速鉴定
方法，很好地解决了植物检疫中截获的齿小蠹幼虫
或残缺成虫的鉴定难问题；游中华等［１４］报道了基于
线粒体ＣＯⅠ基因的９种蓟马的分子鉴定方法；通过
ＣＯⅠ 基 因 序 列 的 分 析 发 现，弄 蝶 （Ａｓｔｒａｐｔｅｓ
ｆｕｌｇｅｒａｔｏｒ）是由多个物种组成的混合种［１５］；王戎疆
等［１６］利用线粒体ＣＯⅡ基因构建蛱蝶属（Ｐｏｌｙｕｒａ）
５种蝴蝶的系统发育树并进行聚类关系分析，结果
和形态学结果相一致；杨飞龙等［１７］通过比较大量中
华按蚊（Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）标本的ＣＯⅠ、ＣＯⅡ基
因及几种核糖体基因序列，建立了该虫基于ＣＯⅡ
等基因的分子鉴定标准。
本研究从田间采集沙果小食心虫和梨小食心虫
试虫，提取试虫的基因组ＤＮＡ，ＰＣＲ扩增试虫的线
粒体ＣＯⅠ和ＣＯⅡ基因序列，并对扩增的序列进行
测序，以此建立沙果小食心虫和梨小食心虫分子鉴
定方法，为这２种害虫的准确鉴定及预测预报提供
了重要依据。
１ 材料与方法
１．１ 样本采集
利用 沙 果 小 食 心 虫 （Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａ ｄｉｍｏｒｐｈａ
Ｋｏｍａｉ）和梨小食心虫（Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａ ｍｏｌｅｓｔａ Ｂｕｓｃｋ）
信息素诱捕器（诱捕器为三角胶粘式，购自北京中捷
四方生物科技公司），在２种害虫的发生期，于陕西
省的５个苹果园，分别诱集２种食心虫成虫样本（表
１）。诱芯的载体中空，由硅橡胶制成，每个质量
０．３～０．５ｇ，每个诱芯的性信息素含量不低于０．００１
７５１第２期 王 康，等：基于线粒体ＣＯⅠ和ＣＯⅡ基因的沙果小食心虫与梨小食心虫的分子鉴定
ｇ，纯度９０％～９７％。选择较为完整的试虫，在实验
室利用体视显微镜进行准确的形态学鉴定，鉴定后
的样本保存于无水乙醇中，置于－２０℃冰箱中保存
备用。
表１ 沙果小食心虫和梨小食心虫样本的采集信息
Ｔａｂｌｅ １ Ｓａｍｐｌｉｎｇ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａ ｄｉｍｏｒｐｈａ ａｎｄ Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａ ｍｏｌｅｓｔａ
采集地点
Ｓａｍｐｌｉｎｇ ｌｏｃａｔｉｏｎ
样本代码
Ｓａｍｐｌｅ ｃｏｄｅ
经纬度
Ｇｅｏ－ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅ
采集日期
Ｓａｍｐｌｉｎｇ ｄａｔｅ
供试样本量
Ｎｏ．ｏｆ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｔｅｓｔｅｄ
沙果小食心虫
Ｇ．ｄｉｍｏｒｐｈａ
梨小食心虫
Ｇ．ｍｏｌｅｓｔａ
咸阳武功 Ｗｕｇｏｎｇ，Ｘｉａｎｙａｎｇ ＸＷ ３４．４５°Ｎ，１０８．１０°Ｅ ２０１２－０８ ５ ５
咸阳乾县 Ｑｉａｎｘｉａｎ，Ｘｉａｎｙａｎｇ ＸＱ ３４．５２°Ｎ，１０８．０８°Ｅ ２０１２－０８ １０ １０
咸阳淳化Ｃｈｕｎｈｕａ，Ｘｉａｎｙａｎｇ ＸＣ ３４．８７°Ｎ，１０８．５２°Ｅ ２０１２－０８ ７ ７
咸阳礼泉Ｌｉｑｕａｎ，Ｘｉａｎｙａｎｇ ＸＬ ３４．５０°Ｎ，１０８．５５°Ｅ ２０１２－０８ ８ ８
宝鸡凤翔Ｆｅｎｇｘｉａｎｇ，Ｂａｏｊｉ ＢＦ ３４．５２°Ｎ，１０８．４０°Ｅ ２０１２－０８ ４ ４
１．２ 基因组ＤＮＡ提取
在采集的样本中，随机选取沙果小食心虫和梨
小食心虫样本，利用ＥａｓｙＰｕｒｅＴＭ Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ Ｋｉｔ
（北京全式金生物技术有限公司）提取单头试虫基因
组ＤＮＡ，基因组ＤＮＡ的提取方法按照试剂盒说明
书步骤进行，用１％琼脂糖凝胶电泳检测提取的
ＤＮＡ质量，提取的基因组ＤＮＡ置于－２０℃冰箱保
存备用。
１．３ ＰＣＲ扩增及序列测定
参照已有的报道，选用扩增２种食心虫ＣＯⅠ和
ＣＯⅡ 基因的引物［１８］，稍作修改。扩增 ２ 种食
心虫ＣＯⅠ基因的上、下游引物序列分别为：５′－ＣＡＡ－
ＣＡＴＴＴＡＴＴＴＴＧＡＴＴＴＴＴＴＧＧ－３′，５′－ＴＣＣＡＡＴ－
ＧＣＡＣＴＡＡＴＣＴＧＣＣＡＴＡＴＴＡ－３′；扩增２种食心
虫ＣＯⅡ基因的上、下游引物序列分别为：５′－ＡＴＧ－
ＧＣＡＧＡＴＴＡＴＡＴＧＴＡＡＴＧＧ－３′，５′－ＧＴＴＴＡＡＧ－
ＡＧＡＣＣＡＧＴＡＣＴＴＧ－３′。
ＰＣＲ扩增反应总体系为２５μＬ，其中含２×ＰＣＲ
ｍａｓｔｅｒ ｍｉｘ １２．５μＬ，上、下游引物各３μＬ，ＤＮＡ模板
２μＬ（含２０～５０ｎｇ ＤＮＡ），加ｄｄＨ２Ｏ至２５μＬ。ＰＣＲ
扩增程序为：９４℃预变性２ｍｉｎ；９４℃变性３０ｓ，
（ＣＯⅠ基因：５２℃／ＣＯⅡ基因：５７℃）退火延伸３０ｓ，
７２℃延伸３０ｓ，共３５个循环；循环结束后７２℃延伸５
ｍｉｎ。利用１％琼脂糖凝胶电泳检测ＰＣＲ扩增产物。
将扩增的ＰＣＲ产物直接进行测序，测序由生工
生物工程（上海）有限公司完成。
１．４ 序列分析
将所测２种食心虫ＣＯⅠ和ＣＯⅡ基因在Ｇｅｎ－
Ｂａｎｋ中进行 ＢＬＡＳＴ 搜索，并将获得的 ＣＯⅠ和
ＣＯⅡ基因登录到ＧｅｎＢａｎｋ。通过ＧｅｎｅＤｏｃ软件分
析基因序列相似性，利用 Ｍｅｇａ ５．０５软件中的
Ｋｉｍｕｒａ２－ｐａｒａｍｅｔｅｒ（Ｋ２Ｐ）双参数模型计算遗传距
离，并利用邻接法（Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ，ＮＪ）构建系统
发育树［１９］。
２ 结果与分析
２．１ ２种试虫线粒体ＣＯⅠ和ＣＯⅡ基因序列分析
在所有沙果小食心虫和梨小食心虫试虫中都成
功扩增到线粒体ＣＯⅠ和ＣＯⅡ基因序列，其中ＣＯⅠ
基因序列长度为７２０ｂｐ，ＣＯⅡ基因序列长度为６８２
ｂｐ，所有序列均无碱基插入和缺失。将所获得的序
列在ＧｅｎＢａｎｋ中进行ＢＬＡＳＴ分析，结果显示，本
研究获得的沙果小食心虫ＣＯⅠ基因和ＣＯⅡ基因
序列与ＧｅｎＢａｎｋ中登录的沙果小食心虫ＣＯⅠ基因
（登 录 号：ＡＢ６０３５２２）和 ＣＯⅡ 基 因 （登 录 号：
ＪＱ４０４４３８）对应序列的相似性分别为９９．１７％～
９９．３１％和９９．１９％～１００％；测序获得的梨小食心
虫ＣＯⅠ基因和ＣＯⅡ基因序列与ＧｅｎＢａｎｋ中登录
的 梨 小 食 心 虫 线 粒 体 全 基 因 组 （登 录 号：
ＨＱ１１６４１６）上对应的ＣＯⅠ基因和ＣＯⅡ基因序列
的相似性分别为 ９９．７２％～１００％和 ９９．５６％～
１００％。
沙果小食心虫和梨小食心虫ＣＯⅠ和ＣＯⅡ基
因序列的比对结果分别见图１和图２。供试样本共
获得３个沙果小食心虫ＣＯⅠ基因单倍型（ＧｅｎＢａｎｋ
登录号：ＫＣ９２３１９７～ＫＣ９２３１９９），这３个单倍型在４
个碱基位点上具有多态性，３个单倍型之间的相似
度在９９．４％以上。供试样本共获得６个梨小食心
虫 ＣＯ Ⅰ 基 因 单 倍 型 （ＧｅｎＢａｎｋ 登 录 号：
ＫＣ９２３２００～ＫＣ９２３２０５），６个单倍型在５个碱基位
点上具有多态性，６ 个单倍型之间的相似度在
９９．６％以上。沙果小食心虫和梨小食心虫ＣＯⅠ基
因种间的相似度在９５．０％～９５．６％，ＣＯⅠ基因在２
种食心虫之间存在３０个变异位点（图１，表２）。
供试样本共获得４个沙果小食心虫ＣＯⅡ基因
单倍型（ＧｅｎＢａｎｋ登录号：ＫＣ９２３２０６～ＫＣ９２３２０９），
８５１ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第４４卷
这４个单倍型在７个碱基位点上具有多态性，４个 单倍型之间的相度在９９．０％以上（表３）。
图１ 沙果小食心虫和梨小食心虫ＣＯⅠ基因序列比对
黑色显示种间变异位点，下图同
Ｆｉｇ．１ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｏｆ ＣＯⅠｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａ ｄｉｍｏｒｐｈａ ａｎｄ Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａ ｍｏｌｅｓｔａ
Ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｆｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｌｏｃｉ ａｒｅ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｂｙ ｂｌａｃｋ ｃｏｌｏｒ．ｔｈｅ ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗ
图２ 沙果小食心虫和梨小食心虫ＣＯⅡ基因序列比对
Ｆｉｇ．２ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｏｆ ＣＯⅡｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａ ｄｉｍｏｒｐｈａ ａｎｄ Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａ ｍｏｌｅｓｔａ
９５１第２期 王 康，等：基于线粒体ＣＯⅠ和ＣＯⅡ基因的沙果小食心虫与梨小食心虫的分子鉴定
供试样本共获得８个梨小食心虫ＣＯⅡ基因单
倍型（ＧｅｎＢａｎｋ登录号：ＫＣ９２３２１０～ＫＣ９２３２１７），这
８个单倍型在８个碱基位点上具有多态性，８个单倍
型之间的相似度在９９．３％以上。沙果小食心虫和
梨小食心虫ＣＯⅡ基因种间的相似度在９４．６％～
９５．５％，种间存在２６个变异位点（图２，表３）。
２．２ ２种试虫遗传距离及系统发育树的构建
由表２可以看出，沙果小食心虫ＣＯⅠ基因序列
间的遗传距离在０．００１～０．００６，梨小食心虫ＣＯⅠ
基因序列间的遗传距离在０．００１～０．００４，２种食心
虫ＣＯⅠ基因种间遗传距离为０．０４６～０．０５２，种间
遗传距离显著高于种内遗传距离（ｄｆ＝２９，ｔ＝２．０５，
Ｐ＜０．００１）。
由表３可以看出，ＣＯⅡ基因中，沙果小食心虫
序列间遗传距离在０．００１～０．０１０，梨小食心虫序列
间遗传距离在０．００１～０．００７，２种食心虫ＣＯⅡ基因
种间序列遗传距离在０．０４７～０．０５７，种间遗传距离
显著高于种内遗传距离（ｄｆ＝５８，ｔ＝２．００，Ｐ＜
０．００１）。
表２ 沙果小食心虫和梨小食心虫ＣＯⅠ基因单倍型间的相似度和遗传距离
Ｔａｂｌｅ ２ Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ ＣＯⅠｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍＧｒａｐｈｏｌｉｔａ ｄｉｍｏｒｐｈａ ａｎｄ Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａ ｍｏｌｅｓｔａ
类型
Ｔｙｐｅ ＧＤ１ ＧＤ２ ＧＤ３ ＧＭ１ ＧＭ２ ＧＭ３ ＧＭ４ ＧＭ５ ＧＭ６
ＧＤ１ ９９．９ ９９．６ ９５．３ ９５．４ ９５．４ ９５．１ ９５．１ ９５．６
ＧＤ２ ０．００１ ９９．４ ９５．１ ９５．３ ９５．３ ９５．０ ９５．０ ９５．４
ＧＤ３ ０．００４ ０．００６ ９５．１ ９５．３ ９５．３ ９５．０ ９５．０ ９５．４
ＧＭ１ ０．０４９ ０．０５１ ０．０５１ ９９．９ ９９．９ ９９．９ ９９．９ ９９．７
ＧＭ２ ０．０４８ ０．０４９ ０．０４９ ０．００１ ９９．７ ９９．９ ９９．９ ９９．９
ＧＭ３ ０．０４７ ０．０４９ ０．０４９ ０．００１ ０．００３ ９９．７ ９９．７ ９９．６
ＧＭ４ ０．０５１ ０．０５２ ０．０５２ ０．００１ ０．００３ ０．００３ ９９．７ ９９．６
ＧＭ５ ０．０５１ ０．０５２ ０．０５２ ０．００１ ０．００３ ０．００３ ０．００３ ９９．６
ＧＭ６ ０．０４６ ０．０４８ ０．０４８ ０．００３ ０．００１ ０．００４ ０．００４ ０．００４
注：对角线上方为单倍型间相似度（％），对角线下方为单倍型间遗传距离。ＧＤ１～ＧＤ３为沙果小食心虫ＣＯⅠ基因单倍型，其ＧｅｎＢａｎｋ登
录号依次为ＫＣ９２３１９７～ＫＣ９２３１９９；ＧＭ１～ＧＭ６是梨小食心虫ＣＯⅠ基因单倍型，其ＧｅｎＢａｎｋ登录号依次为ＫＣ９２３２００～ＫＣ９２３２０５。
Ｎｏｔｅ：Ｔｈｅ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ（％）ａｒｅ ａｂｏｖｅ ｔｈｅ ｄｉａｇｏｎａｌ，ａｎｄ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ａｒｅ ｂｅｌｏｗ ｔｈｅ ｄｉａｇｏ－
ｎａｌ．ＧＤ１－ＧＤ３ａｒｅ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ｏｆ Ｇ．ｄｉｍｏｒｐｈａＣＯⅠｇｅｎｅ（ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ：ＫＣ９２３１９７－ＫＣ９２３１９９），ａｎｄ ＧＭ１－ＧＭ６ａｒｅ ｔｈｅ
ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ｏｆ Ｇ．ｍｏｌｅｓｔａ ＣＯⅠｇｅｎｅ（ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ：ＫＣ９２３２００－ＫＣ９２３２０５）．
表３ 沙果小食心虫和梨小食心虫ＣＯⅡ基因单倍型间的相似度和遗传距离
Ｔａｂｌｅ ３ Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ ＣＯⅡｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍＧｒａｐｈｏｌｉｔａ ｄｉｍｏｒｐｈａ ａｎｄ Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａ ｍｏｌｅｓｔａ
类型
Ｔｙｐｅ ＧＤ１ ＧＤ２ ＧＤ３ ＧＤ４ ＧＭ１ ＧＭ２ ＧＭ３ ＧＭ４ ＧＭ５ ＧＭ６ ＧＭ７ ＧＭ８
ＧＤ１ ９９．４ ９９．９ ９９．６ ９５．５ ９５．３ ９５．３ ９５．２ ９５．５ ９５．３ ９５．５ ９５．５
ＧＤ２ ０．００６ ９９．３ ９９．０ ９４．９ ９４．７ ９４．７ ９４．６ ９４．９ ９４．７ ９４．９ ９４．９
ＧＤ３ ０．００１ ０．００７ ９９．７ ９５．３ ９５．２ ９５．２ ９５．０ ９５．３ ９５．２ ９５．３ ９５．３
ＧＤ４ ０．００４ ０．０１０ ０．００３ ９５．３ ９５．２ ９５．２ ９５．０ ９５．３ ９５．２ ９５．３ ９５．３
ＧＭ１ ０．０４７ ０．０５４ ０．０４９ ０．０４９ ９９．９ ９９．６ ９９．７ ９９．７ ９９．６ ９９．４ ９９．７
ＧＭ２ ０．０４９ ０．０５５ ０．０５０ ０．０５０ ０．００１ ９９．７ ９９．９ ９９．９ ９９．７ ９９．６ ９９．９
ＧＭ３ ０．０４９ ０．０５５ ０．０５０ ０．０５０ ０．００４ ０．００３ ９９．６ ９９．６ ９９．４ ９９．９ ９９．６
ＧＭ４ ０．０５０ ０．０５７ ０．０５２ ０．０５２ ０．００３ ０．００１ ０．００４ ９９．７ ９９．６ ９９．４ ９９．７
ＧＭ５ ０．０４７ ０．０５４ ０．０４９ ０．０４９ ０．００３ ０．００１ ０．００４ ０．００３ ９９．９ ９９．４ ９９．７
ＧＭ６ ０．０４９ ０．０５５ ０．０５０ ０．０５０ ０．００４ ０．００３ ０．００６ ０．００４ ０．００１ ９９．３ ９９．６
ＧＭ７ ０．０４７ ０．０５４ ０．０４９ ０．０４９ ０．００６ ０．００４ ０．００１ ０．００６ ０．００６ ０．００７ ９９．４
ＧＭ８ ０．０４７ ０．０５４ ０．０４９ ０．０４９ ０．００３ ０．００１ ０．００４ ０．００３ ０．００３ ０．００４ ０．００６
注：对角线上方为单倍型间相似度（％），对角线下方为单倍型间遗传距离。ＧＤ１～ＧＤ４为沙果小食心虫ＣＯⅡ基因单倍型，其ＧｅｎＢａｎｋ登
录号依次为ＫＣ９２３２０６～ＫＣ９２３２０９；ＧＭ１～ＧＭ８是梨小食心虫ＣＯⅡ基因单倍型，ＧｅｎＢａｎｋ登录号依次为ＫＣ９２３２１０～ＫＣ９２３２１７。
Ｎｏｔｅ：Ｔｈｅ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ（％）ａｒｅ ａｂｏｖｅ ｔｈｅ ｄｉａｇｏｎａｌ，ａｎｄ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ａｒｅ ｂｅｌｏｗ ｔｈｅ ｄｉａｇｏ－
ｎａｌ．ＧＤ１－ＧＤ４ａｒｅ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ｏｆ Ｇ．ｄｉｍｏｒｐｈａＣＯⅡｇｅｎｅ（ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ：ＫＣ９２３２０６－ＫＣ９２３２０９），ａｎｄ ＧＭ１－ＧＭ８ａｒｅ ｔｈｅ
ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ｏｆ Ｇ．ｍｏｌｅｓｔａ ＣＯⅡｇｅｎｅ（ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ：ＫＣ９２３２１０－ＫＣ９２３２１７）．
以苹果蠹蛾（Ｃｙｄｉａ ｐｏｍｏｎｅｌｌａ）ＣＯⅠ基因序列
（ＧｅｎＢａｎｋ登录号：ＪＱ９２８７９７）作外类群，将本研究
获得的沙果小食心虫和梨小食心虫ＣＯⅠ基因单倍
型序列和１个已登录的沙果小食心虫ＣＯⅠ基因序
０６１ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第４４卷
列（ＧｅｎＢａｎｋ登录号：ＡＢ６０３５２２），以及３个已登录
的梨小食心虫 ＣＯⅠ基因序列（ＧｅｎＢａｎｋ登录号：
ＡＢ６０３５２１、ＦＪ４４９６６０、ＨＱ７００３３８）构建系统发育树，
结果（图３）显示，沙果小食心虫和梨小食心虫的
ＣＯⅠ基因单倍型各自聚在一支。
以苹果蠹蛾 （Ｃ．ｐｏｍｏｎｅｌｌａ）线粒体全基因
（ＧｅｎＢａｎｋ登录号：ＪＸ４０７１０７）中ＣＯⅡ基因序列作
外类群，将本研究获得的２种食心虫ＣＯⅡ基因单倍
型序列和已登录的相应沙果小食心虫ＣＯⅡ基因序
列（ＧｅｎＢａｎｋ 登录号：ＪＱ４０４４３８）和梨小食心虫
ＣＯⅡ基因序列（ＧｅｎＢａｎｋ登录号：ＥＵ６７１０６０）构建
系统发育树，结果（图４）表明，所有的沙果小食心虫
ＣＯⅡ基因单倍型聚为一支，所有的梨小食心虫单倍
型聚为另外一支。
图３ 基于沙果小食心虫和梨小食心虫ＣＯⅠ基因单倍型的系统发育树
ＧＤ１～ＧＤ３和ＧＭ１～ＧＭ６为本研究获得的沙果小食心虫和梨小食心虫ＣＯⅠ基因单倍型；
ＡＢ６０３５２２为ＧｅｎＢａｎｋ已登录的相应沙果小食心虫ＣＯⅠ基因序列；ＡＢ６０３５２１、ＦＪ４４９６６０、
ＨＱ７００３３８为ＧｅｎＢａｎｋ已登录的相应梨小食心虫ＣＯⅠ序列；
ＪＱ９２８７９７为ＧｅｎＢａｎｋ已登录的相应苹果蠹蛾ＣＯⅠ基因序列
Ｆｉｇ．３ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｏｆ ＣＯⅠｇｅｎｅ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ｆｒｏｍＧｒａｐｈｏｌｉｔａ ｄｉｍｏｒｐｈａ ａｎｄ Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａ ｍｏｌｅｓｔａ
ＧＤ１－ＧＤ３ａｎｄ ＧＭ１－ＧＭ６ａｒｅ ｔｈｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ＣＯⅠｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ｏｆ Ｇ．ｄｉｍｏｒｐｈａａｎｄ Ｇ．ｍｏｌｅｓｔａｉｎ ｃｕｒｒｅｎｔ ｓｔｕｄｙ；
ＡＢ６０３５２２ｉｓ ｔｈｅ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ Ｇ．ｄｉｍｏｒｐｈａ ＣＯⅠｇｅｎｅ ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ ｉｎ ＧｅｎＢａｎｋ；ＡＢ６０３５２１，
ＦＪ４４９６６０，ＨＱ７００３３８ａｒｅ ｔｈｅ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ Ｇ．ｍｏｌｅｓｔａ ＣＯⅠｇｅｎｅ ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ ｉｎ ＧｅｎＢａｎｋ；
ＪＱ９２８７９７ｉｓ ｔｈｅ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ Ｃｙｄｉａ ｐｏｍｏｎｅｌｌａ ＣＯⅠｇｅｎｅ ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ ｉｎ ＧｅｎＢａｎｋ
３ 讨 论
线粒体ＣＯⅠ和ＣＯⅡ基因序列目前已广泛地
应用到昆虫近缘种的鉴定之中［２０］。在利用线粒体
基因进行分子鉴定时，不同物种间相同的线粒体基
因核苷酸序列差异是最重要的标准［２１－２２］。Ｈｅｂｅｒｔ
等［２３］通过分析比较２００种鳞翅目昆虫ＣＯⅠ基因序
列后发现，ＣＯⅠ基因核苷酸序列３％的差异可以作
为鉴定不同物种的标准，即不同物种ＣＯⅠ基因差
异大于３％，同一物种ＣＯⅠ基因序列差异小于３％，
目前大量的相关研究证实了这一标准的准确
性［２４－２５］。本研究中，２种食心虫ＣＯⅠ和ＣＯⅡ基因
种内核苷酸差异小于１．０％，而种间核苷酸差异大
于４．４％，因此本研究的ＣＯⅠ和ＣＯⅡ基因序列可
以准确地应用于沙果小食心虫和梨小食心虫的分子
鉴定中。
Ａｌｉａｂａｄｉａｎ等［２６］研究指出，当种间遗传距离和
种内遗传距离不存在重叠区域，且分离程度较高时，
目标片段能准确鉴定物种。本研究结果显示，基于
ＣＯⅠ和ＣＯⅡ基因的沙果小食心虫和梨小食心虫的
种内遗传距离均小于０．０１０，而种间遗传距离大于
０．０４６，基于ＣＯⅠ和ＣＯⅡ基因的种内遗传距离和
１６１第２期 王 康，等：基于线粒体ＣＯⅠ和ＣＯⅡ基因的沙果小食心虫与梨小食心虫的分子鉴定
种间遗传距离不存在重叠区域，并且种内遗传距离
与种间遗传距离差异显著（Ｐ＜０．００１）。另外，有分
析认为，种间平均遗传距离一般为种内平均遗传距
离的１０倍以上［２７］，本研究基于ＣＯⅠ基因的种间平
均遗传距离 （０．０５０ ０）为种内 平 均 遗 传 距 离
（０．００２ ７）的１８．２倍，基于ＣＯⅡ基因的种间平均遗
传距离（０．０５０ ６）为种内平均遗传距离（０．００３ ８）的
１３．２倍。因此，基于ＣＯⅠ和ＣＯⅡ基因的沙果小食
心虫和的梨小食心虫种间和种内遗传距离分析结果
表明，ＣＯⅠ和ＣＯⅡ基因可以用于这２种食心虫的
分子鉴定。另外，稳定的种间差异位点是确定种的
重要手段。朱振华等［２８］通过比较６种果实蝇ｍｔ－
Ｃｙｔｂ基因序列，发现种间存在３０个比较稳定的变
异位点，并以此作为鉴定不同种的标准。本试验发
现，２种食心虫在ＣＯⅠ基因序列上有３０个稳定变
异位点，ＣＯⅡ基因序列上有２６个稳定差异位点，这
些位点的碱基及其变化可以作为梨小食心虫和沙果
小食心虫分子鉴定时的重要参考。
图４ 基于沙果小食心虫和梨小食心虫ＣＯⅡ基因单倍型的系统发育树
ＧＤ１～ＧＤ４和ＧＭ１～ＧＭ８分别为本研究获得的沙果小食心虫和梨小食心虫ＣＯⅡ基因单倍型；
ＪＱ４０４４３８为ＧｅｎＢａｎｋ已登录的相应沙果小食心虫ＣＯⅡ基因序列，ＥＵ６７１０６０为ＧｅｎＢａｎｋ已登录的相应梨小食心虫ＣＯⅡ序列；
ＪＸ４０７１０７为ＧｅｎＢａｎｋ已登录的相应苹果蠹蛾线粒体全基因
Ｆｉｇ．４ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｏｆ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ｏｆ Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａ ｄｉｍｏｒｐｈａ ａｎｄ Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａ ｍｏｌｅｓｔａ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＣＯⅡｇｅｎｅ
ＧＤ１－ＧＤ４ａｎｄ ＧＭ１－ＧＭ８ａｒｅ ｔｈｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ＣＯⅡｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ｏｆ Ｇ．ｄｉｍｏｒｐｈａａｎｄ Ｇ．ｍｏｌｅｓｔａｉｎ ｃｕｒｒｅｎｔ ｓｔｕｄｙ；
ＪＱ４０４４３８ｉｓ ｔｈｅ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ Ｇ．ｄｉｍｏｒｐｈａ ＣＯⅡｇｅｎｅ ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ ｉｎ ＧｅｎＢａｎｋ；
ＥＵ６７１０６０ｉｓ ｔｈｅ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ Ｇ．ｍｏｌｅｓｔａ ＣＯⅡｇｅｎｅ ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ ｉｎ ＧｅｎＢａｎｋ；
ＪＸ４０７１０７ｉｓ ｔｈｅ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ Ｃｙｄｉａ ｐｏｍｏｎｅｌｌａ ＣＯⅡｇｅｎｅ ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ ｉｎ ＧｅｎＢａｎｋ
４ 结 论
本研究结果表明，沙果小食心虫、梨小食心虫的
ＣＯⅠ和ＣＯⅡ基因种内的相似度在９９．０％以上，种
间相似度在９５．６％以下，且２个基因的种间遗传距
离显著高于种内遗传距离，２种食心虫的ＣＯⅠ基因
单倍型和ＣＯⅡ基因单倍型分别在系统发育树上明
显各自聚为一支，因此，本研究采用的沙果小食心
虫、梨小食心虫的ＣＯⅠ和ＣＯⅡ基因可以用于这２
种害虫的分子鉴定之中。
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ｔｈｅ ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ ｗｅｓｔｅｒｎ ｆｌｏｗｅｒ ｔｈｒｉｐｓ，Ｆｒａｎｋｌｉｎｉｅｌｌａ ｏｃｃｉｄｅｎ－
ｔａｌｓ （Ｐｅｒｇａｎｄｅ）ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｅｉｇｈｔ ｃｏｍｍｏｎ ｔｈｒｉｐｓ ｓｐｅｃｉｅｓ
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［１２］ Ｃａｉ Ｍ Ｚ，Ｗａｎｇ Ｆ Ｍ，Ｌｉ Ｒ Ｆ，ｅｔ ａｌ．Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｎｄ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｏｆ
ｒｏｏｔ ｂｏｒｄｅｒ ｃｅｌｓ ｔｏ ａｌｕｍｉｎｕｍ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｉｎ ｓｏｙｂｅａｎ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ
［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｏｒｇａｎｉｃ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１１，１０５：９６６－９７１．
［１３］ Ｙｕ Ｍ，Ｓｈｅｎ Ｒ Ｆ，Ｌｉｕ Ｊ Ｙ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｒｏｏｔ ｂｏｒｄｅｒ ｃｅｌｓ ｉｎ
ａｌｕｍｉｎｕｍ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ ｐｅａ（Ｐｉｓｕｍ ｓａｔｉｖｕｍ）ｇｒｏｗｎ ｉｎ ｍｉｓｔ
ｃｕｌｔｕｒｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ａｎｄ Ｓｏｉｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ－
Ｚｅｉｔｓｃｈｒｉｆｔ ｆｕｒ Ｐｆｌａｎｚｅｎｅｒｎａｈｒｕ，２００９，１７２：５２８－５３４．
［１４］ Ｗｅｎ Ｆ，ＶａｎＥｔｔｅｎ Ｈ Ｄ，Ｔｓａｐｒａｉｌｉｓ Ｇ，ｅｔ ａｌ．Ｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒ ｐｒｏ－
ｔｅｉｎｓ ｉｎ ｐｅａ ｒｏｏｔ ｔｉｐ ａｎｄ ｂｏｒｄｅｒ ｃｅｌ ｅｘｕｄａｔｅｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉ－
ｏｌｏｇｙ，２００７，１４３：７７３－７８３．
［１５］ Ｈａｗｅｓ Ｍ Ｃ，Ｃｕｒｌａｎｇｏ－Ｒｉｖｅｒａ Ｇ，Ｘｉｏｎｇ Ｚ Ｇ，ｅｔ ａｌ．Ｒｏｌｅｓ ｏｆ ｒｏ－
ｏｔ ｂｏｒｄｅｒ ｃｅｌｓ ｉｎ ｐｌａｎｔ ｄｅｆｅｎｓｅ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ
ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｂｙ ｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒ ＤＮＡ ‘ｔｒａｐｐｉｎｇ’［Ｊ］．
Ｐｌａｎｔ Ｓｏｉｌ，２０１２，３５５：１－１６．
［１６］ 冯英明，喻 敏，温海洋，等．铝对豌豆根边缘细胞存活率和黏
胶层厚度的影响 ［Ｊ］．生态环境，２００５，１４（５）：６９５－６９９．
Ｆｅｎｇ Ｙ Ｍ，Ｙｕ Ｍ，Ｗｅｎ Ｈ Ｙ，ｅｔ ａｌ．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ Ａｌ ｏｎ ｃｅｌ ｖｉａ－
ｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｍｕｃｉｌａｇｅ ｏｆ ｒｏｏｔ ｂｏｒｄｅｒ ｃｅｌｓ ｏｆ ｐｅａ（Ｐｉｓｕｍ ｓａｔｉ－
ｖｕｍ）［Ｊ］．Ｅｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，２００５，１４（５）：６９５－６９９．
（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）
４６１ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第４４卷