全 文 ：水-磷酸(35∶60∶5);四氢呋喃-5%醋酸溶液(42∶58)
和甲醇-水(其中含 5%的冰醋酸)等 。本实验选用
甲醇-水-冰醋酸(70∶26.5∶3.5)能较好的分离出杂
质峰 ,测定效果较好 。
3.3　样品溶液制备条件的选择　实验过程中曾采
取回流提取和超声波提取 ,经比较发现超声波提取
法时间短 、提取物中杂质少 ,可直接测定 。
参考文献:
[ 1] Lifang L , Congxin X.Shiping F.An animaL experim en tal
s tu dies on the anti-oncotic , antiphLogist ic and anaLgesi s
ef fect s of the Jiexuegao[ J] .Biological ab st ract s , 1992 , 93(7):
AB-889:80504.
[ 2] 　方世平 ,刘芳 ,劳立芳 ,等.中华医学理论与临床[ M ] .北京:中
国医药科技出版社, 1996.10 , 547.
[ 3] 　尤献民 ,邹桂欣 ,姜鸿.HPLC法测定降脂颗粒Ⅰ中姜黄素的含
量[ J] .华西药学杂志 , 2003 , 18(5):371.
[ 4] 　陈逸红 ,张芬娥 ,王慧洁.HPLC法测定如意金黄散中姜黄素的
含量[ J] .中成药 , 2004 , 26(12):1075-1076.
[ 5] 　戚爱棣.HPLC法测定姜黄 ,郁金 ,广西莪术中姜黄素的含量
[ J] .中草药 , 2002 , 33(6):510.
[收稿日期] 2005-06-14
[ 作者简介] 白雪梅 ,女 ,电话:0313-8041644 , E-mail:bxm856@yahoo.com.cn　[ 通讯作者] 付煜荣 ,女 ,硕士 ,副教授 , E-m ail:fy rzhjk@sohu.
com
高效液相色谱法测定大山楂丸和山楂鲜果中齐墩果酸及熊果酸的含量
白雪梅1 ,付煜荣2 ,田嘉铭1 　(1.河北北方学院实验中心 ,河北 张家口 075029;2.河北北方学院基础医学部化学教研室 ,
河北 张家口 075029)
[ 摘要] 　目的:建立测定大山楂丸及山楂鲜果中齐墩果酸和熊果酸含量的高效液相色谱法。方法:色谱柱:Hype rsil BDS C18
(4.6 mm×200 mm , 5 μm);柱温为 25 ℃;检测波长为 210 nm。流动相为甲醇-磷酸水溶液(pH 3.0 , 90∶10), 流速为0.5 m L·
min-1 。结果:齐墩果酸的线形范围12.5～ 220 μg·L-1 , 回归方程为 A =16.86C+43.96 , r=0.9993 , 回收率为99.98%, RSD
为2.69%(n=6);熊果酸的线形范围36.0 ～ 600 μg·L-1 ,回归方程为 , A=15.78C+67.40 , r=0.9994 , 回收率为101.1%, RSD
为2.78%(n=6)。结论:该方法简便 、快捷 、准确 , 重复性好 ,适合于大山楂丸及山楂鲜果中齐墩果酸和熊果酸含量测定。
[ 关键词] 　大山楂丸;山楂;齐墩果酸;熊果酸;高效液相色谱法
[中图分类号] R914　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2006)08-0981-02
Determination of oleanolic acid and ursolic acid in Dashanzha pills and fresh haw by HPLC
BAI Xue-mei1 , FU Yu-rong 2 , TIAN Jia-ming 1(1.Labor atory center o f Hebei No rth Univer sity , Hebei Zhang jiakou
075029 , China;2.Depa rtment of Ba sic Medicine of Hebei No r th Unive rsity ,H ebei Zhang jiakou 075029 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To develop an HPLC method for the quantitative analysis o f oleano lic acid and ursolic acid in Das-
hanzhaw an pills and fre sh haw .METHODS　Oleano lic acid and ursolic acid were analyzed on a H ypersil BDS C18 conlum and de-
tected at 210 nm.The conlum temperature w as 25 ℃ .The mobile phase consisted of methano l-w ater(adjusted to pH =3.0
with H3PO 4)(90∶10)a t a flow ra te o f 0.5 mL·min-1 .RESULTS　Calibr ation g raphs w ere constructed in the range o f 12.5
ng/μ1 ～ 220 ng/μL fo r o leanolic acid and 36.0 ng/μ1 ～ 600 ng/μl for ursolic acid.The linear co rre lation equations w ere A=
16.86C+43.96(r=0.9993)for o leanolic acid and A=15.78C+67.40(r=0.9994)fo r ursolic acid , re spectively.The average
recove ries w ere 99.98%(n=6)fo r o leanolic acid and 101.11% fo r ur so lic acid.The RSD of the me thod was below 3.0%(n=
6).CONCLUSION　This methods is fast , re liable , accura te and suitable for the de te rmination o f o leanolic acid and ursolic acid
in Dashanzhaw an pills and f resh haw .
KEY WORDS:Dashanzhaw an pills;fresh haw;oleano lic acid;ur so lic acid;HPLC
　　大山楂丸由山楂 、六神曲(麸炒)、麦芽(炒)组
成 ,具有开胃消食的作用 ,用于治疗食欲不振 、消化
不良 。其君药山楂中含有齐墩果酸 、熊果酸[ 1] 。本
实验参考齐墩果酸和熊果酸的 HPLC 法[ 2] ,测定了
不同厂家 、不同批号大山楂丸及山楂鲜果中齐墩果
酸 、熊果酸的含量 ,为大山楂丸的质量控制提供依
据。
1　材料
HP 1100型高效液相色谱仪及化学工作站(美
国安捷伦公司);齐墩果酸对照品(批号 110709-
·981·中国医院药学杂志 2006年第 26卷第 8期 Chin H osp Pharm J , 2006 Aug , Vol 26 , No.08
200304),熊果酸对照品(批号 110742-200314)(均
购自中国药品生物制品检定所);不同厂家 、不同批
号的大山楂丸(购自张家口市各药店);原料药材山
楂鲜果(购自张家口市市场);甲醇为色谱纯。
2　方法与结果
2.1 　色谱条件 　色谱柱:Hypersi l BDS C18(4.6
mm×200 mm , 5 μm ,大连伊利特公司);流动相:
甲醇-0.5%磷酸水溶液(90∶10);柱温:25 ℃,检测
波长:210 nm;流速:0.5 mL·min-1 ;进样量:20
μL。
2.2　溶液的制备
2.2.1　对照品溶液　精密称取一定量的齐墩果酸
和熊果酸对照品 ,用甲醇溶解 ,定容配成齐墩果酸
(1.70 g·L-1)和熊果酸(2.33 g·L -1)储备液 , 过
0.45 μm 滤膜 , 4℃冰箱中备用 。
2.2.2　样品供试液　精密称取各厂家 、各批次的大
山楂丸及原料药材山楂鲜果1.000 g ,加甲醇 5 mL ,
浸泡 2.5 h ,45℃超声提取 1 h ,吸取上清液 ,残渣加
5 mL 甲醇 ,再超声提取 40 min ,合并两次上清提取
液 ,用甲醇定容至 10 mL ,过 0.45 μm 滤膜 , 4℃冰
箱中备用 。
2.2.3　阴性对照溶液　按照大山楂丸的配方 ,不加
入山楂 ,自制阴性对照样品 ,按“2.2.2”项制备阴性
对照液 ,按“2.1”项进行测定。
2.3　标准曲线的绘制　将齐墩果酸对照品储备液
作 1∶1稀释后与熊果酸对照品储备液等量混合 ,制
成对照品混合液 ,将对照品混合液按 2 , 4 , 8 , 16 , 32
倍稀释 ,分别按“2.1”项下进行测定 ,以峰面积为纵
坐标(A),浓度为横坐标(C)作标准曲线 ,得回归方
程如下 , 齐墩果酸:A = 16.86 C +43.96 , r =
0.999 3 , 线形范围为12.5 ～ 220 μg·L -1 ;熊果酸:A
=15.78C+67.40 , r=0.999 4 , 线形范围为36.0 ～
600 μg·L-1 。
2.4　精密度试验　取对照品溶液按“2.1”项进行测
定 ,连续进样 6 次 ,记录其峰面积 ,计算得 RSD <
2%。
2.5　重复性试验　取北京产大山楂丸 ,按“2.2.2”
项制备供试液 6份 ,按“2.1”项进样测定齐冬果酸 、
熊果酸的含量 ,齐墩果酸的 RSD为2.78%(n=6),
熊果酸的 RSD为2.35%(n=6)。
2.6　稳定性试验　取北京产大山楂丸供试液 ,按
“2.1”项分别于 1 ,3 ,5 ,8和 24 h 进样进行测定 ,结
果表明 ,齐墩果酸 、熊果酸均在 8 h 内稳定 。
2.7　加样回收率的测定　称取一定量的已知含量
的北京产大山楂丸 ,分别加入一定量的齐墩果酸和
熊果酸对照品溶液 , 按“2.2.2”项制备供试液 , 按
“2.1”项进行测定 ,计算回收率。结果见表 1 。
2.8　样品测定　取样品供试液按“2.1”项进行测
定 ,各产地 、各批次大山楂丸及原料药材山楂鲜果中
齐墩果酸和熊果酸的含量见表 2。
表 1　齐墩果酸 、熊果酸回收率(n=6)
Tab 1　Recovery of o leanolic acid and ursolic acid(n=6)
样品含量
/mg
对照品加入量
/m g
测得量
/mg
回收率
/ %
平均值
/ %
RSD
/ %
齐冬果酸　
0.051 0.030 0.082 101.96
0.049 0.050 0.098 98.00
0.050 0.070 0.121 102.00 99.98 2.69
0.049 0.070 0.118 97.96
0.050 0.050 0.102 104.00
0.050 0.030 0.079 98.00
熊果酸　　
0.040 0.020 0.060 100.00
0.039 0.020 0.059 100.00
0.039 0.040 0.080 102.50 101.11 2.78
0.039 0.040 0.080 102.50
0.041 0.060 0.102 101.67
0.040 0.060 0.100 100.00
3　讨论
因齐墩果酸和熊果酸为同分异构体 ,性质相近 ,
分离难度较大 ,用 YGW C18柱进行分离 ,未能达到
满意效果 。选用 Hype rsil BDS C18柱后 ,达到基线
分离 ,效果满意 ,可用于含量测定 。
本方法测定齐墩果酸及熊果酸简便 、快捷 ,在此
流动相的比例下 ,齐墩果酸及熊果酸分离度最好 ,出
峰时间适中 ,可作为普通实验室测定大山楂丸及其
原料药材山楂鲜果中齐墩果酸及熊果酸含量的方
法 ,为建立大山楂丸的质量标准提供依据。
表 2　不同样品中齐墩果酸和熊果酸的含量
Tab 2　The contents of oleano lic acid and ur so lic acid in dif-
ferent samples
产地及批号 齐墩果酸含量/mg·g -1
熊果酸含量
/mg·g -1
大山楂丸河北 1(030903) 0.26 1.09
大山楂丸河北 2(041142) 0.53 2.40
大山楂丸河北 3(041036) 0.24 0.88
大山楂丸北京(4015575) 0.51 2.18
原料药材山楂鲜果 0.32 1.16
　　从表 2可以看出 ,不同厂家生产的大山楂丸中
齐墩果酸及熊果酸的含量相差较大 ,可能与原材料
的产地 、采摘及制药工艺有关 ,建议国家建立一套统
一的质控标准 。
参考文献:
[ 1] 　杨云 ,张晶 ,陈玉婷.天然药物化学成分提取分离手册[ M] .中
国中医药出版社 , 北京:第 2版 , 2003.51-52.
[ 2] 　王向红 ,刘孟军.HPLC 法测定不同品种枣及酸枣中的齐墩果
酸和熊果酸[ J] .食品科学 , 2002.23(6):137-138.
[收稿日期] 2005-04-30
·982· 中国医院药学杂志 2006年第 26卷第 8期 Chin H osp Pharm J , 2006 Aug , Vol 26 , No.08