全 文 ：RSD为 1.28%(n =6),说明此方法可行 。
参考文献:
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(收稿日期:2009-12-17)
南板蓝根颗粒微生物限度检查方法
的验证
杨秀成1 ,尹春荣2(1.云南省保山市食品药品检验所 , 云南
保山 678000;2.云南省楚雄州食品药品检验所 , 云南 楚雄
675000)
摘要:目的　建立南板蓝根颗粒的微生物限度检查方法。方
法　根据供试品的微生物限度标准 ,按中国药典 2005 年版一
部附录微生物限度检查法的验证实验指导原则 , 用 3 个批号
的南板蓝根颗粒进行验证实验 , 以考察确定南板蓝根颗粒微
生物限度的检查方法。结果　所采用方法可以有效除去抑菌
成分 ,使实验结果能真实反映污染菌情况。 结论　细菌数检
查采用培养基稀释法 , 霉菌及酵母菌数检查和控制菌检查采
用常规法。
关键词:南板蓝根颗粒;常规法;培养基稀释法;回收率
doi:10.3969/ j.issn.1004-2407.2010.02.026
中图分类号:R927　　　文献标志码:A　　　
文章编号:1004-2407(2010)02-0123-02
　　南板蓝根颗粒主要成分为南板蓝根和大青叶的药
材提取物 ,用于治疗温病发热 、热毒发斑 、风热感冒 、咽
喉肿烂 、流行性乙型脑炎 、肝炎 、腮腺炎[ 1] 。中国药典
2005年版规定[ 2] ,在进行药品微生物限度检查时 ,应对
检查方法进行验证 ,以确认所采用的检查方法适合于
该药品的微生物限度检查。为此 ,笔者对南板蓝根颗
粒的微生物限度检查方法进行了验证实验[ 3] 。
1　实验材料
1.1　供试品　南板蓝根颗粒(云南楚雄云中制药有
限责 任公 司 , 规 格:15 g/袋;批 号 20050102 ,
20050103 ,20050104)。
1.2　稀释剂及培养基　pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨
缓冲液 、9 g · L-1无菌氯化钠溶液(NS)、T TC 营养
琼脂培养基 、玫瑰红钠琼脂培养基 、胆盐乳糖培养基 、
MUG 培养基 、胆盐乳糖发酵培养基 、营养肉汤培养
基 、改良马丁培养基(北京三药科技开发公司生产)。
1.3 　菌种 　金黄色葡萄球菌(Staphy lococcus
aureus)[ CMCC (B) 26003 ] 、 大 肠 埃 希 菌
(Escherichia coli)[ CMCC(B)44102] 、枯草芽孢杆
菌(Baci l lus subt i lis)[ CMCC(B)63501] 、白色念珠
菌(Candida albicans)[ CMCC(F)98001] 、黑曲霉
(Aspergi llus niger)CMCC(F)98003 ,均来源于中
国药品生物制品检定所。
2　方法和结果
2.1　试验菌液的制备　接种金黄色葡萄球菌 、大肠
埃希菌 、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养
基中 ,置 30 ～ 35 ℃培养 18 ～ 24 h。分别取上述培养
物 1 mL ,加 NS 9 mL ,10倍递增稀释制成 1 mL 含菌
数为 50 ～ 100 cfu 的菌悬液 。接种白色念珠菌的新
鲜培养物至改良马丁培养基中 ,置 23 ～ 28 ℃培养 24
～ 48 h ,10倍递增稀释制成 1 mL 含菌数为 50 ～ 100
cfu 的菌悬液。接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改良
马丁琼脂斜面培养基中 ,置 23 ～ 28 ℃培养 5 ～ 7 d ,加
入 NS 3 ～ 5 mL ,将孢子洗脱。然后 ,吸出孢子悬液
至无菌试管内 , 用 NS 制成 1 mL 含孢子数为 50 ～
100 cfu的孢子悬液。
2.2　供试液的制备 　从 4 袋中取样品 10 g , 加
pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至 100 mL ,振摇溶
散混匀 ,制成 1∶10的供试液。
2.3　常规法预验证实验
2.3.1　菌液组　分别取已制备好的金黄色葡萄球
菌 、大肠埃希菌 、枯草芽孢杆菌 、白色念珠菌 、黑曲霉
菌的菌悬液 1 mL(含 50 ～ 100 cfu),加入到 1个平皿
中 ,制备 2个平皿 。含金黄色葡萄球菌 、大肠埃希菌 、
枯草芽孢杆菌的实验平皿倾注营养琼脂培养基 ,置
30 ～ 35 ℃培养 48 h ,计数;含白色念珠菌 、黑曲霉的
实验平皿倾注玫瑰红钠琼脂培养基 ,置 23 ～ 28 ℃培
养 72 h ,计数。
2.3.2　实验组　取 1∶10的供试液 1 mL ,加入到 1
个平皿中 ,平行制备 10个平皿 ,分别加入金黄色葡萄
球菌 、大肠埃希菌 、枯草芽孢杆菌 、白色念珠菌 、黑曲
霉菌的菌悬液 1 mL(含 50 ～ 100 cfu),每种菌平行制
备 2个平皿 ,培养基 、培养时间 、温度 、计数同 2.3.1
项下。
2.3.3　供试品对照组　取 1∶10的供试液 1 mL ,加
入到平皿中 ,平行制备 4个平皿。2个平皿倾注营养
琼脂培养基 ,置 30 ℃～ 35 ℃培养 48 h ,计数;另 2个
平皿倾注玫瑰红钠琼脂培养基 ,置 23 ～ 28 ℃培养 72
h ,计数。
2.3.4　实验组菌回收率计算
菌回收率(%)=〔(实验组平均菌落数 -供试品对照组平均菌落数)/菌液组平均菌落数〕×100%
表 1表明 ,唯枯草芽孢杆菌在供试品的 1∶10稀
释级中菌回收率小于 70%。根据上述情况 ,笔者采
用培养基稀释法进行再实验。
123西北药学杂志　2010 年 4 月　第 25 卷　第 2 期
表 1　常规法进行南板蓝根颗粒微生物限度检查结果
菌种 菌液组 批号 对照组 实验组 实验组菌回收率 %
金黄色葡萄球菌 98 20050102 0 77 78.6
20050103 0 74 75.5
20050104 0 81 82.6
大肠埃希菌 85 20050102 0 68 80.0
20050103 0 71 83.5
20050104 0 72 84.7
枯草芽孢杆菌 102 20050102 0 56 54.9
20050103 0 49 48.0
20050104 0 58 56.9
白色念珠菌 93 20050102 0 78 83.9
20050103 0 81 87.1
20050104 0 84 87.1
黑曲霉 77 20050102 0 69 89.6
20050103 0 69 89.6
20050104 0 75 97.4
2.4　培养基稀释法再验证实验
2.4.1　实验组　取 1∶10的供试液 0.2 mL ,加入到
平皿中 ,加入枯草芽孢杆菌的菌悬液 1 mL ,平行制备
2个平皿 ,倾注营养琼脂培养基 ,置30 ～ 35 ℃培养 48
h ,计数 。
2.4.2　菌液组　取已制备好的枯草芽孢杆菌的菌悬
液 1 mL ,加入到 1个平皿中 ,平行制备 2个平皿 。倾
注营养琼脂培养基 ,置 30 ～ 35 ℃培养 48 h ,计数 。
2.4.3　供试品对照组　同 2.3.3项下 。
表 2　培养基稀释法检查结果
菌种 菌液组 批号 供试品对照组 实验组 实验组菌回收率/ %
枯草芽孢杆菌 91 20050102 0 78 85.7
20050103 0 82 90.1
20050104 0 77 84.6
　　表 2 表明 ,采用培养基稀释法 ,即每皿加入 1∶
10的供试液 0.2 mL 的方法 ,可消除对枯草芽孢杆菌
的抑菌作用。
2.5　大肠埃希菌检查方法的验证实验
2.5.1　实验组　取 1∶10 供试液 10 mL 和大肠埃
希菌的菌悬液 1 mL ,加入到胆盐乳糖增菌液 100 mL
中 ,置于 35 ～ 37 ℃培养 18 ～ 24 h ,按微生物限度检
查法进行检查。
2.5.2　阴性菌对照组　取 1∶10供试液 10 mL 和
金黄色葡萄球菌的菌悬液 1 mL ,加入到胆盐乳糖增
菌液 100 mL 中 ,置 35 ～ 37 ℃培养 18 ～ 24 h ,按微生
物限度检查法进行检查。
2.5.3　供试品对照组　取 1∶10 供试液 10 mL ,加
入到胆盐乳糖增菌液 100 mL 中 ,置 35 ～ 37 ℃培养
18 ～ 24 h ,按微生物限度检查法进行检查 。
表 3　大肠埃希菌检查方法的验证实验结果
批号 供试品对照组 实验组 阴性菌对照组
MUG荧光实验 20050102 未显荧光 呈现荧光 未显荧光
20050103 未显荧光 呈现荧光 未显荧光
20050104 未显荧光 呈现荧光 未显荧光
MUG靛基质实验 20050102 呈试剂本色 呈玫瑰红色 呈试剂色
20050103 呈试剂色 呈玫瑰红色 呈试剂色
20050104 呈试剂色 呈玫瑰红色 呈试剂色
结果 未检出 检出 呈阴性
　　表 3表明 ,供试品的大肠埃希菌检查方法可采用
常规法 。
3　小结
由表 1可知 ,供试品的 1∶10供试液中金黄色葡
萄球菌 、大肠埃希菌 、白色念珠菌 、黑曲霉的菌回收率
大于 70%,枯草芽孢杆菌的菌回收率小于 70%。说
明该药品对细菌具抑菌作用 ,常规法不能用于南板蓝
根颗粒的细菌检查 ,同时又说明该药品对霉菌及酵母
菌无抑菌作用 ,常规法可用于南板蓝根颗粒的霉菌及
酵母菌数检查。
采用了培养基稀释法 ,能消除南板蓝根颗粒对枯
草芽孢杆菌的抑菌作用 ,培养基稀释法可用于南板蓝
根颗粒的细菌检查。
表 3结果表明 ,南板蓝根颗粒的大肠埃希菌检查
方法可采用常规法。
4　验证结论
南板蓝根颗粒的细菌检查可采用培养基稀释法 ,
即:取 1∶10供试液 0.2 mL ,加入到 1个平皿中 ,平
行制备 10个平皿 ,10个平皿菌落数相加之和除以 2 ,
为 1∶10供试液每 1 mL 所含菌数 ,大肠埃希菌的检
查可按中国药典 2005年版一部附录微生物限度检查
法中的常规法进行检验。
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(收稿日期:2009-12-09)
盐酸环丙沙星尿素乳膏微生物限度
检查方法的建立
周修森 ,李道明 ,刘　玲(河南省信阳市食品药品检验所 ,
河南 信阳 464000)
摘要:目的　建立盐酸环丙沙星尿素乳膏微生物限度检查方
法。方法　通过盐析破乳 、离心分离的方法制备供试液 , 采用
薄膜过滤并在培养基中加入中和剂的方法 , 进行细菌数的检
测和控制菌检查。霉菌及酵母菌数的测定 , 可采用常规法。
结果　可以有效的去除盐酸环丙沙星尿素乳膏的抗菌成分 , 5
种阳性菌的回收率均达到70%,符合中国药典 2005 年版的要
求。结论　所建立的方法适用于盐酸环丙沙星尿素乳膏的微
生物限度检查。
关键词:盐酸环丙沙星尿素乳膏;破乳;离心分离;薄膜过滤;
中和剂;
doi:10.3969/ j.issn.1004-2407.2010.02.027
中图分类号:R927　　　文献标志码:A　　　
文章编号:1004-2407(2010)02-0124-03
124 西北药学杂志　2010 年 4 月　第 25 卷　第 2 期