全 文 ：反相高效液相色谱法测定不同产地虎刺中
齐墩果酸和熊果酸的含量
蔡晔芬，黄清松*
( 广州医学院附属肿瘤医院药学部，广东 广州 510095)
摘要 目的:建立反相高效液相色谱法测定不同产地虎刺中齐墩果酸和熊果酸的含量。方法: 虎刺样品以
95 %乙醇溶液超声提取，分析柱选用 Kromasil C18色谱柱，以甲醇-2. 0 %磷酸水溶液( 90∶ 10，v /v) 进行洗脱，柱温:
25 ℃，流速: 0. 8 mL /min，检测波长: 210 nm。结果:齐墩果酸在 0. 124 ～ 1. 24 μg范围内，与峰面积呈良好的线性关
系( r = 0. 9997) ，平均回收率为 97. 6 % ( RSD = 2. 2 % ) ;熊果酸在 0. 192 ～ 1. 92 μg范围内，与峰面积呈良好的线性
关系( r = 0. 9999) ，平均回收率为 102. 4 % ( RSD = 1. 9 % ) 。结论:该二种成分均以湖北产虎刺中含量最高，方法操
作简便，精密度高，可为虎刺的质量控制和开发利用提供实验依据。
关键词 虎刺;齐墩果酸;熊果酸;反相高效液相色谱法
中图分类号: R284. 2 文献标识码: A 文章编号: 1001-4454( 2011) 05-0694-03
Determination of Oleanolic Acid and Ursolic Acid in Damnacanthus indicus
from Different Places by RP-HPLC
CAI Ye-fen，HUANG Qing-song
( Department of Pharmacy，Guangzhou Medical University Cancer Institute Hospital，Guangzhou 510095，China)
Abstract Objective: To establish A RP-HPLC method for determination of oleanolic acid and ursolic acid in Damnacanthus indi-
cus from different places. Methods: After ultrasonic extraction with 95% ethanol，the separation was achieved on a Kromasil C18 column
at 25 ℃ using methanol-2. 0 % phosphoric acid solution ( 90∶ 10，v /v) as the mobile phase at a flow rate of 0. 8 mL /min. The detection
wavelength was 210 nm. Results: Oleanolic acid showed good linear at the range of 0. 124 ～ 1. 24 μg ( r = 0. 9997) . The recovery was
97. 6 % and RSD was 2. 2 % . Ursolic acid showed good linear at the range of 0. 192 ～ 1. 92 μg ( r = 0. 9999 ) . The recovery was
102. 4 % and RSD was 1. 9 % . Conclusion: The proposed method is simple and accurate. It can provide reliable evidence for quality
control，development and utilization of Damnacanthus indicus.
Key words Damnacanthus indicus Gaertn. f. ; Oleanolic Acid; Ursolic Acid; RP-HPLC
收稿日期: 2011-12-19
作者简介:蔡晔芬( 1975-) ，女，主管药师，主要从事医院药学研究; E-mail: 553852698@ qq. com。
* 通讯作者:黄清松，Tel: 13416349399，E-mail: p84188896@ 163. com。
虎刺为茜草科植物虎刺 Damnacanthus indicus
Gaertn. f. 的全草，俗名绣花针、黄脚鸡等，江西等地
亦称雀不踏，曾被载入 1977 年版药典〔1〕。虎刺主要
分布于我国长江以南各地，较喜肥沃的砂质或粘质
土壤，生长在山间林下及溪畔灌木中〔2〕。虎刺性
寒、味苦，具有祛风利湿、活血消肿的功效，含有多种
黄酮类、三萜类和蒽醌类化学成分〔3〕，主要用于治
疗肝炎、黄疸水肿、痰饮咳嗽、劳伤脱力、风湿痹痛等
症。民间还用于治疗毒蛇咬伤，以其全草或根入药。
近年来，虎刺在一些地方用于清热排毒、治疗肝炎及
其他内科杂病，具有良好效果。虎刺化学成分的研
究报道较少，且多集中在黄酮和多糖成分的提取及
测定〔3，4〕，本文采用 RP-HPLC 对江西、湖南和湖北
等产地的虎刺样品中齐墩果酸和熊果酸的含量进行
测定比较，可为虎刺的质量控制和开发利用提供实
验依据。
1 仪器与试剂
Waters高效液相色谱系统( 515 泵，2996 紫外检
测器，Empower 色谱数据处理站，色谱柱恒温箱，美
国) ; CP225D双量程分析天平 ( 北京塞多利斯天平
有限公司) ; SB25-12DTN 超声波清洗机 ( 宁波新芝
生物科技股份有限公司) ; RO-MB-10D 高纯水制备
系统( 杭州永洁达膜分离设备厂) 。甲醇 ( 色谱纯，
江苏汉邦科技有限公司) ; 乙醇、磷酸均为分析纯;
齐墩果酸、熊果酸对照品 ( 均购自中国药品生物制
品检定所，含量测定用。齐墩果酸批号: 110709-
200311，熊果酸批号: 110742-200314 ) ; 虎刺药材分
别采自江西、湖南和湖北，经鉴定为茜草科植物
Damnacanthus indicus Gaertn. f. 的全草。
2 方法与结果
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DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2012.05.030
2. 1 对照品溶液配制 齐墩果酸、熊果酸对照品
干燥至恒重，分别精密称取 3. 10、4. 80 mg，用甲醇
溶解后转至 50 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇
匀后即得。混合对照品溶液中齐墩果酸浓度为
0. 062 mg /mL，熊果酸的浓度为 0. 096 mg /mL。
2. 2 样品溶液配制 虎刺样品于 60 ℃干燥，用高
速粉碎机粉碎后过筛。取虎刺粉末约 5. 0 g 分别置
于 50 mL具塞锥形瓶中，加入 50 mL 95 %乙醇并称
重，超声提取 45 min 后放冷，称定后用乙醇补足减
失的质量，振荡均匀，用 0. 45 μm 针式过滤器过滤，
得不同产地的虎刺样品溶液。
2. 3 色谱条件 Kromasil C18色谱柱 ( 4. 6 mm ×
250 mm，5 μm) ，流动相: 甲醇-磷酸水溶液( 90 ∶ 10，
v /v) ;流速: 0. 8 mL /min，紫外检测波长: 210 nm，分
析柱温: 25 ℃。齐墩果酸和熊果酸的分离度为
1. 82，色谱峰对称因子分别为 1. 02、1. 01。对照品
混合溶液和湖北产的虎刺样品色谱见图 1。
图 1 对照品( A)和虎刺样品( B) 的 HPLC图
2. 4 线性关系考察 准确吸取齐墩果酸和熊果酸
对照品混合溶液 2、6、10、15、20 μL，分别注入高效
液相色谱仪，进样分析，以对照品的进样量( μg) 为
横坐标( X轴) ，对照品色谱峰面积( μV·s) 为纵坐
标( Y轴) ，进行线性拟合并绘制标准曲线。齐墩果
酸的回归线性方程为: Y = 3. 67 × 105X － 2. 43 × 104
( r = 0. 9997) ，熊果酸回归线性方程为: Y = 4. 46 ×
105X － 1. 71 × 104 ( r = 0. 9999) 。两组分线性相关系
数 r ＞ 0. 999，表明齐墩果酸和熊果酸分别在 0. 124
～ 1. 24 μg和 0. 192 ～ 1. 92 μg进样范围内具有良好
的线性关系。
2. 5 精密度试验 同一份对照品混合溶液进样 20
μL，重复进样测定 5 次，计算出各峰面积的 RSD。
齐墩果酸峰面积的 RSD 为 0. 7%，熊果酸峰面积的
RSD为 0. 9%，测试结果表明仪器的性能和进样方
法均稳定可靠。
2. 6 稳定性试验 同一份对照品混合溶液分别在
0、2、4、8、16、24 h 进样 20 μL，计算出各峰面积的
RSD。齐墩果酸峰面积的 RSD 为 1. 2%，熊果酸峰
面积的 RSD为 1. 6%，表明所测组分在 24 h 内稳定
性良好。
2. 7 重复性试验 取同一批江西赣州产虎刺样品
5 份，按“2. 2”项下方法制备样品溶液，进样测定峰
面积，外标法计算的各待测组分含量的 RSD，分别
为齐墩果酸 2. 1 %和熊果酸 1. 8 %，表明样品制备
方法重复性良好。
2. 8 加样回收率试验 称取湖北产的虎刺样品 6
份( 已知齐墩果酸和熊果酸含量) ，每份约 3. 0 g，分
别加入适量的标准对照品，制备成样品溶液，进样测
定含量并计算回收率。结果齐墩果酸平均加样回收
率为 97. 6%，RSD为 2. 2% ;熊果酸平均加样回收率
为 102. 4%，RSD为 1. 9%。
2. 9 样品含量测定 准确吸取制备的江西、湖南
和湖北等地的 5 份虎刺样品溶液各 20 μL，注入液
相色谱仪，测定齐墩果酸和熊果酸峰面积积分值，利
用外标法分别计算齐墩果酸和熊果酸的含量。不同
产地虎刺样品中齐墩果酸和熊果酸的含量测定结果
见表 1。
表 1 不同产地虎刺样品含量测定结果( n =3)
产地 齐墩果酸/ ( mg /g)
RSD
/%
熊果酸
/ ( mg /g)
RSD
/%
江西( 赣州) 0. 0831 1. 5 0. 1709 1. 2
江西( 抚州) 0. 0696 1. 2 0. 1641 0. 9
江西( 上饶) 0. 0894 1. 7 0. 1866 1. 2
湖南 0. 0644 1. 5 0. 1335 1. 1
湖北 0. 0950 0. 8 0. 1849 1. 0
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3 讨论
3. 1 由表 1 可以看出，江西、湖南和湖北等地所产
的虎刺药材中均含有齐墩果酸和熊果酸，但两种三
萜酸的含量均有所差异，其中湖北产虎刺中两者含
量最高。在同一产地虎刺样品中熊果酸的含量均高
于齐墩果酸，约为齐墩果酸含量的 2 倍。虎刺在民
间常用于治疗肝炎、黄疸水肿，可能与所含的活性组
分齐墩果酸和熊果酸具有相关的功效存在一定的联
系，值得进一步研究。
3. 2 齐墩果酸和熊果酸互为同分异构体，结构上
只是一个甲基连接位置不同，且在大多天然产物中
共生互存，分离测定较为困难。本文建立的定量分
析方法可同时测定虎刺中两种三萜酸( 齐墩果酸和
熊果酸) 的含量，样品溶液可直接进样分析，操作简
便，保留时间适中，待测组分实现基线分离。
参 考 文 献
［1］晁志，张宏伟 . 虎刺的本草考证［J］. 中药材，2003，26
( 10) : 762-763.
［2］江苏新医学院 . 中药大辞典［M］. 上海:上海人民出版
社，1977: 1331.
［3］周蓉，邹怀波，陈三宝 . 超声波提取虎刺中总黄酮的工
艺研究［J］. 食品科学，2008，29( 11) : 176-178.
［4］盛家荣，曾桂声，洪艳艳 . 均匀设计优选绣花针多糖的
提取工艺［J］. 时珍国医国药，2006，17( 7) : 1221-1222.
市售当药的质量考察与资源状况分析
李建晨，贾玉捷，杨晓婧，郝培培
( 河北科技大学化学与制药工程学院，河北 石家庄 050018)
摘要 目的:调查目前市场上当药的实际质量状况。方法: 以正品当药作为对照药材，獐牙菜苦苷作为对照
品，通过薄层色谱和高效液相色谱法对收集的多份市售当药样品进行定性和定量比较。结果: 7 种市售当药在成分
组成和主要成分含量上各不相同，与正品当药比较均有不同程度的差异，其中 4 号样品可以判断不是规定的植物
来源。结论:市售当药的质量参差不齐，品种混乱，大部分样品獐牙菜苦苷的含量不符合新版药典的规定。
关键词 当药;獐牙菜苦苷;质量; 资源
中图分类号: R282. 71 文献标识码: A 文章编号: 1001-4454( 2012) 05-0696-03
收稿日期: 2011-10-08
基金项目:留学回国人员择优资助项目
作者简介:李建晨( 1964-) ，男，博士，副教授，主要从事天然药物研究; E-mail: lijianchen152@ hotmail. com。
当药为龙胆科植物瘤毛獐牙菜 Swertia pseud-
ochinensis Hara的干燥全草，味苦、性寒，归肝、肾、大
肠经，具消湿热、健胃的功效，主要用于湿热黄疸、胁
痛、痢疾腹痛、食欲不振等〔1〕。由于需求量大，野生
资源严重匮乏，当药的使用相当混乱。作为当药资
源课题研究的一部分，本实验对收集到的 7 种当药
样品进行全成分信息以及獐牙菜苦苷含量的比较，
旨在调查目前当药使用的实际状况，为解决当药资
源提供依据。
1 材料
1. 1 药材样品 当药商品: 1 号( 唐山市医药药材
公司) ; 2 号( 甘肃省医药药材公司) ; 3 号( 河北安国
制药集团) ; 4 号，7 号 ( 石家庄乐仁堂制药有限公
司) ; 5 号( 河北省医药药材公司) ; 6 号( 安国市冷背
药材有限公司) 。正品当药: 采自河北省平泉县，经
鉴定为龙胆科植物瘤毛獐牙菜 Swertia pseudochinen-
sis Hara的全草。
獐牙菜苦苷对照品 ( 中国药品生物制品检定
所，批号: 110785-200203) 。
1. 2 仪器与试剂 岛津 LC-2010 液相色谱仪，ZF-
2 型三用紫外分析仪，瑞士 CAMAG REPROSTAR3
薄层色谱数码相机成像系统。硅胶 GF254薄层板( 烟
台市康比诺化学试剂厂) 。乙腈( 色谱纯，美国天地
公司) ，其余试剂均为分析纯。
2 全成分信息的比较
2. 1 样品溶液的制备 分别取正品当药及 1 ～ 7
号样品，干燥，研细，各称取 1. 0 g，加入 70%乙醇溶
液，浸渍 0. 5 h 后，回流提取 2 次 ( 50 mL，1 h; 30
mL，1 h) ，滤过，合并滤液，浓缩至近干，加水 20 mL
溶解，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇各萃取
2 次( 20 mL，20 mL) ，蒸干。上述 4 种浸膏分别用甲
醇溶解并定容至 1 mL，得到各样品的石油醚层、氯
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