全 文 ：上下限 , 其设定应参考药理实验及毒性试验的结果。
参考文献:
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HPLC测定肤痒颗粒中齐墩果酸的含量
刘小花 1 , 　封士兰 1* , 　李　芸2 , 　胡芳弟 1 , 　赵良功**
(1.兰州大学药学院 ,甘肃 兰州 730030;2.甘肃中医学院 ,甘肃 兰州 730000)
收稿日期:2006-03-29
作者简介:刘小花(1976～ ),女 ,助理工程师 ,硕士在读 ,从事中草药中药制剂化学成分分离分析 , 电话:0931-6118506, 13919161317, E-
m ail:greatfin2001@ yahoo. com. cn。
*通信作者:封士兰 ,女 ,教授 ,硕士生导师 ,电话:0931-8613573, 13993162172, E-m ail:fsllzyxy@ public. lz. gs. cn。
**兰州大学临床医学院 2005级。
关键词:RP-H PLC;蒸发光散射检测器;齐墩果酸;含量测定
中图分类号:R927. 2　　　　　文献标识码:B　　　　　文章编号:1001-1528(2007)02-0301-02
　　肤痒颗粒是由地肤子等中药制成的颗粒剂 ,具有祛风活
血 , 除湿止痒 ,用于皮肤瘙痒症 、湿症 、荨麻症等瘙痒性皮肤
症。地肤子在该制剂中含量较大 ,因此以地肤子中化学成分
作为指标进行含量测定 , 对于控制肤痒颗粒的质量比较有意
义。王天勇 , 杨文远等人用反相高效液相色谱测定地肤子药
材中齐墩果酸含量 , 用到 SPD-6AV紫外检测器 [ 1] ,但齐墩果
酸为五环三萜类化合物 , 在紫外区吸收较弱 , 采用紫外检测
器分析效果不太理想 [ 2] 。本课题测定含地肤子的中药制剂
中齐墩果酸的含量。虽然地肤子中含有游离的齐墩果酸 , 但
量很少 , 测定误差较大 , 所以我们将地肤子中不同齐墩果酸
葡萄糖醛酸苷进行水解 , 考察多种水解条件 , 经比较后得到
了齐墩果酸含量稳定的水解条件 , 用 H PLC-ELSD法测定了
齐墩果酸的含量 , 该法可用于肤痒颗粒的质量控制。
1　仪器与试剂
W aters 2695高效液相色谱仪系列:在线脱气机 , 四元
泵 , M illennum 32工作站 , 2771自动进样器 , 柱温箱 , 蒸发光
散射检测器 (A lltech ELSD 2000), KQ3200DB超声波清洗器
(昆山市超声仪器有限公司);H ype rsil ODS-1柱 (250 mm ×
4. 6 mm , 5 μm)(大连依利特有限公司 );WX-4000微波快速
消解系统;齐墩果酸对照品(购自中国药品生物制品检定所 ,
供含量测定用 , 批号:110709-200304);肤痒颗粒 (兰州和盛
堂药业有限公司提供);甲醇为色谱纯(山东禹王化学试剂
开发中心);水为娃哈哈超纯水 ,其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件
HypersilODS-1柱(250 mm ×4. 6 mm, 5 μm);流动相:甲
醇-0. 2 醋酸水溶液(87∶13);流速 1. 0 mL /m in;柱温 25℃;
ELSD检测器参数:载气流速 1. 9 L /m in;漂移管温度 70 ℃。
2. 2　实验方法
2. 2. 1　供试品溶液的制备　取本品粉末约 1. 0 g, 精密称
定 ,加 7 盐酸水溶液 40 mL, 120 ℃微波消解 4. 5 h, 加氯仿
50 m L回流 1 h, 分取氯仿液 , 再加氯仿振摇提取 3次 , 每次
20 m L,合并氯仿液 , 回收氯仿 ,残渣加甲醇定容至 5 mL, 用
0. 45μm微孔滤膜过滤。
A B C
图 1　HPLC图谱
A样品　B齐墩果酸对照品　C阴性对照
301
2007年 2月
第 29卷　第 2期
中 成 药
Chine se T raditiona l PatentM ed icine
February 2007
Vo .l 29　No. 2
2. 2. 2　对照品溶液的制备　精密称取齐墩果酸对照品
10. 59 mg,置 10 mL量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 , 制得
每 1 mL含 1. 059 m g的对照品储备液溶液。
2. 2. 3　阴性对照品溶液的制备　按处方量称取处方中除地
肤子外的其余 4味中药 , 并按制法制成齐墩果酸阴性对照
品 , 取阴性对照品依供试品溶液制备法制得阴性对照品溶
液。
2. 2. 4　线性关系的考察　分别精密吸取齐墩果酸对照品溶
液 0. 1, 0. 5, 1, 1. 5 m L, 加甲醇定容至 2 mL, 连同对照品溶液
得 5个系列浓度的对照品储备溶液 , 进样 5 μL,重复测定 3
次 , 以峰面积对数( lg A)为纵坐标 , 浓度对数 lg C为横坐标
绘制工作曲线 , 回归方程为:lg A=6. 027+1. 523 lg C,相关系
数 r=0. 999,齐墩果酸的线性范围为 0. 053 ～ 1. 059 m g /mL。
2. 2. 5　日内精密度试验　取 3号对照品溶液 , 重复进样 5
次 , 进样量 5μL, 测得峰面积 RSD为 1. 48 。
2. 2. 6　稳定性试验　取 5号对照品溶液 , 在 1, 2, 3日分别
进样 5 μL,每次进 2针 , 测得峰面积 RSD为 2. 88 。
2. 2. 7　重复性试验　取肤痒颗粒(批号为 20051206)样品 5
份 , 按供试品溶液制备方法 ,制得 5份供试品溶液 , 按样品测
定法测定 , 每样进两针 , 测得供试品中含齐墩果酸分别为
0. 358 1、0. 363 6、 0. 357 8、 0. 342 8、 0. 343 5 mg /g(RSD =
2. 63 , n=5),表明重复性较好。
2. 2. 8　回收率试验　采用加样回收法 , 精密称取适量的已
测知含量的肤痒颗粒粉末(批号 20051206,浓度 0. 129 0 m g /
mL)1份 ,分别加入高中低不同浓度的对照品溶液 , 按供试品
的制备方法制得样品 ,各取 20 μL, 注入高效液相色谱仪 ,计
算回收率 , 结果见表 1。
表 1　 回收率试验结果
样品中齐
墩果酸含
量 /m g
添加齐
墩果酸
/m g
测得齐墩
果酸的量
/mg
回收率
/
平均回
收率
/
RSD
/
0. 129 0 0. 103 7 0. 239 0 106. 08
0. 129 0 0. 103 7 0. 238 0 105. 11
0. 129 0 0. 129 6 0. 264 8 104. 78 104. 16 1. 63
0. 129 0 0. 129 6 0. 264 9 104. 86
0. 129 0 0. 155 5 0. 288 1 102. 31
0. 129 0 0. 155 5 0. 287 3 101. 80
2. 3　水解条件的选择
2. 3. 1　酸种类及酸浓度的选择　选用 5 盐酸水溶液 、 7
盐酸水溶液 、 7 硫酸水溶液酸水解苷。 7 硫酸由于酸性太
强 , 将药物炭化 , 测得含量极不稳定 , 同一样品取 3份 , 测得
含量 0. 213 0、0. 457 8、0. 414 9 m g /g,波动范围大 ,所以不能
选。 5 盐酸水解不如 7 盐酸水解齐墩果酸含量高 , 5 盐
酸水解测得含量一般在 0. 2 mg /g以下 , 而 7 盐酸水解测得
含量一般在 0. 3 ～ 0. 4 mg /g之间。
2. 3. 2　氯仿萃取方式的选择　用氯仿回流 1 h, 萃取氯仿
液 , 再加氯仿振摇提取 3次 ,每次 20 mL, 合并氯仿液 ,回收氯
仿 , 所得的供试品含量比直接用氯仿萃取 4次所得的含量要
高一倍。用微波消解法 , 其它条件一致 , 氯仿萃取方式不一
样 , 氯仿回流含量可达 0. 3 m g /g以上 , 而直接萃取的含量只
在 0. 15 mg /g左右。
2. 3. 3　酸水解温度的选择　100 ℃水浴 , 110℃、 120 ℃、130
℃微波消解 , 140 ℃油浴均被选择。 100 ℃水浴测得含量太
低 , 130 ℃微波消解容易喷出 , 140 ℃油浴将样品炭化 , 含量
不稳定。最后选择 120 ℃微波消解。
2. 4　样品测定　取 1 ～ 5号供试品 , 用微波消解法分别制成
供试品溶液。各吸取供试品溶液 20 μL, 注入液相色谱仪 , 按
上述色谱条件测定 , 记录色谱图 , 计算样品中齐墩果酸的含
量 , 结果见表 2。
表 2　 样品测定结果
温度
/℃
时间
/h
酸浓度
/
萃取
方式
含量
/m g /g
120 4. 5 7 氯仿回流 0. 342 8
120 4. 5 7 氯仿回流 0. 358 1
120 4. 5 7 氯仿回流 0. 363 6
120 4. 5 7 氯仿回流 0. 357 8
120 4. 5 7 氯仿回流 0. 343 5
3　讨论
3. 1　齐墩果酸为五环三萜类化合物 , 在紫外区吸收较弱 ,采
用紫外检测器分析效果不太理想 [ 2] 。本文采用蒸发光散射
检测器 , 对齐墩果酸含量进行测定 , 并进行方法学考察 , 获得
了满意的结果 。
3. 2　地肤子皂苷有 3种由齐墩果酸构成的苷 , 3-0-[ β-D -
吡喃木糖(1→ 3)β-D-吡喃葡萄糖醛酸 ] -齐墩果酸 (Ⅰ ), 3-0-
[ β-D-吡喃木糖(1→ 3)β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯 ] -齐墩果酸
(Ⅱ ), 3-0-[ β-D-吡喃木糖 (1→ 3)β-D-吡喃葡萄糖醛酸 ] -齐
墩果酸-28-0-[ β-D-吡喃葡 萄糖 ] 酯苷 (Ⅲ ), 齐墩果酸
(Ⅳ)[ 3] 。在通常的酸水解条件下 , C17位羧甲酯由于空间位
阻不能被水解 [ 4] 。本文所选择的条件只能水解Ⅰ 、Ⅱ类化合
物中的齐墩果酸。
3. 3　用 7 盐酸 , 120 ℃微波消解 2, 3, 4. 5, 5, 6 h再加氯仿
回流提取 , 结果 4. 5 h后 , 随消解时间的延长 , 样品中齐墩果
酸含量基本不变 ,表明样品 Ⅰ 、Ⅱ两类化合物中齐墩果酸已
水解并提取完全 ,所以选择微波消解时间为 4. 5 h, 氯仿回流
提取。
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2007年 2月
第 29卷　第 2期
中 成 药
Chine se T raditiona l PatentM ed icine
February 2007
Vo .l 29　No. 2