全 文 ：标，对乌头属 4 种药材中的 4 种成分进行了定量分
析。该分析对此 4 种药材的质量评价具有重要的意
义，并对该属药材的进一步研究、开发、利用和质量
标准的制定提供了理论依据和科学参考，尤其是为
这 4 种药材的临床应用和毒性大小评价有一定的借
鉴意义。
参 考 文 献
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收稿日期:2012-01-09
基金项目:广东省“211 工程”三期重点学科建设项目“药物警戒系统中的中药再评价研究”专项基金;2011 国家自然基金资助项目
(81102883) ;广东省自然科学基金资助项目(S2011010005540) ;广东省优秀博士学位论文作者资助项目(AFD004112A01)
作者简介:刘昌辉(1979-) ，男，助理研究员，主要从事中药有效性与安全性及中药药代动力学研究;Tel:15918464109，E-mail:realliuch@
gmail. com。
* 通讯作者:王宁生，E-mail:nswang@ gzhtcm. edu. cn。
·药理·
齐墩果酸对四氯化碳诱导大鼠肝硬化
门静脉高压的影响
刘昌辉，黄小桃，李颖仪，郑 侠，李 能，宓穗卿，王宁生*
(广州中医药大学临床药理研究所，广东 广州 510405)
摘要 目的:研究齐墩果酸(Oleanolic acid，OA)对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝硬化门静脉高压的影响及其
可能的作用机制。方法:大鼠采用 CCl4 灌胃给药诱发肝硬化门静脉高压，给予 OA低(30 mg /kg)、高(60 mg /kg)剂
量治疗，正常对照组与模型组给予等容积溶剂。1 个月后分别测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基
转移酶(AST)等血清生化指标及肝组织中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、NOx、内皮型一氧化氮
合酶(eNOS)、环磷酸鸟苷(cGMP)、I型胶原蛋白的含量;采用血液动力学的方法测定大鼠主动脉的血压(MAP)、门
静脉压(PP)、心率(HR)等指标;采用 Western blotting技术测定肝硬化大鼠 eNOS的表达;采用 Masson染色对大鼠
肝纤维化的进展进行研究。结果:与模型组比较，给予 OA治疗 1 个月后显著降低血清 ALT、AST、ALP、γ-GT、MDA
的水平和提高肝组织中 GSH-Px的含量(P ＜ 0. 05) ;显著降低模型大鼠肝脏的胶原沉积及肝纤维化的进展，进而降
低了门静脉压(P ＜ 0. 05) ，而主动脉压(MAP)和心率(HR)无显著变化;并能显著提高肝内 eNOS蛋白表达水平，进
而提高了肝硬化大鼠肝内的 cGMP和 NOx的含量(P ＜ 0. 05)。结论:OA 对四氯化碳诱导大鼠肝硬化门静脉高压
具有良好的治疗作用，其作用机理可能是通过促进肝内的 eNOS蛋白表达从而提高肝内 NOx的含量。
关键词 齐墩果酸(OA) ;门静脉高压;一氧化氮(NO) ;四氯化碳;内皮型一氧化氮合酶(eNOS)
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2012)06-0930-06
The Anti-portal Hypertension Effect of Oleanolic Acid in CCl4-induced Cirrhosis Rats
LIU Chang-hui，HUANG Xiao-tao，LI Ying-yi，ZHENG Xia，LI Neng，MI Sui-qing，WANG Ning-sheng
(Institute of Clinical Pharmacology，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510405，China)
Abstract Objective:To study the anti-portal hypertension effect of oleanolic acid(OA)in CCl4-induced cirrhosis rats and its mech-
anism. Methods:Rats were induced to portal hypertension by CCl4. After treatment with low dose of OA(30 mg /kg)and high dose of
OA(60 mg /kg)by intragastrically for a month，the parameters in serum or liver tissue including ALT，AST，MDA，GSH-Px，NOx，eNOS，
cGMP and type I collagen were measured. The MAP，PP and HR were determined by hameodynamic method and the eNOS expression
in liver was measured by western blot. The pathological changes of liver tissue were also tested by Masson dye. The normal group and
model group were given 0. 25% of CMC-Na solution. Results:Compared with the model group，treatment with 30 mg /kg and 60 mg /kg
OA significantly decreased the levels of ALT，AST，ALP，γ-GT and MDA and enhanced the level of GSH-Px in liver(P ＜ 0. 05). More-
·039· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 6 期 2012 年 6 月
DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2012.06.028
over，the collagen content also notably lowered in CCl4-induced cirrhosis rats，thus decreasing the portal pressure(PP). However，the
MAP and HR were not affected by OA treatment. In addition，the expression of eNOS in liver markedly increased after one mouth treat-
ment of OA，hereof enhancing the level of cGMP and NOx in the CCl4-induced portal hypertensive rats(P ＜ 0. 05). Conclusion:OA
could inhibit the progress of fibrosis and lower the PP in CCl4-induced portal hypertensive rats and the anti-portal hypertension effect
might be related to increasing the expression of eNOS and enhance the NOx level in liver.
Key words Oleanolic acid;Portal hypertension;Nitric oxide(NO) ;CCl4;Endothelial nitric oxide synthase(eNOS)
门静脉高压是肝硬化常见的病理表现，也是影
响肝硬化患者预后的重要因素，积极寻找治疗肝硬
化门静脉高压的药物和方法具有重要的医学价值和
社会意义。CCl4诱导的大鼠肝硬化动物模型具有类
似人类肝纤维化和肝硬化的病理特征，常用于肝硬
化门静脉高压的发病机制研究和药物干预研究〔1〕。
齐墩果酸(OA)是五环三萜类化合物，广泛分布于青
叶胆全草、白花蛇舌草、女贞果实等植物，具有较强
的保肝、抗高血脂等多方面的临床药理作用，且毒性
低，副作用小〔2-4〕，但尚未见到有关其治疗肝硬化门
静脉高压的研究报道。本研究旨在探讨 OA对 CCl4
诱导的大鼠门静脉高压的干预和治疗作用，并对
其作用机制进行探讨，以期为临床应用提供研究
基础。
1 材料与仪器
1. 1 实验动物 健康雄性 SD 大鼠 48 只，体质量
180 ～ 220 g，由广东省实验动物中心提供，用于实验
研究。
1. 2 药物与试剂 OA 由南京泽朗医药科技有限
公司提供，批号:110709-200106;一氧化氮(NOx)检
测试剂盒由碧云天生物有限公司提供;环鸟苷单磷
酸 cGMP放免试剂盒(Elisa)由上海西唐生物科技
有限公司提供;一抗:兔抗大鼠 eNOS 由美国 Santa
Cruz生物有限公司提供;二抗:SABC 试剂盒武汉博
士德生物工程有限公司。
1. 3 主要仪器 自动血液生化仪(AutoLab-18)为
北京中科富邦医疗设备有限公司;八道生理记录仪
(型号:AOWERLAD /85)生产厂家为澳大利亚 AD
公司) ;凝胶成像分析系统(Image Quant ECL Im-
ageQuant)美国 GE公司产品。
2 方法
2. 1 大鼠肝硬化门静脉高压模型的制备 雄性
SD大鼠，体质量 180 ～ 220 g，购于广东省实验动物
中心，合格证号:SCKX(粤)2008-0002，适应环境 7 d
后，用 0. 35 g /L 苯巴比妥钠的溶液诱导 3 d，随后，
按 5 mL /kg剂量灌胃 40% CCl4 中性菜籽油溶液，2
次 /w，持续 7 w。第 6 周开始改为用 50% CCl4 中性
菜籽油溶液，以 5 mL /kg 标准灌胃，3 次 /w，持续 8
w;正常对照组按 5 mL /kg 体质量灌胃生理盐水，2
次 /w，制备肝硬化门脉高压症大鼠模型时间约 15
w。
2. 2 OA分组给药治疗 造模结束，饲养 1 w 后，
大鼠随机分为正常对照组、模型组、OA 低剂量组
(30 mg /kg，临床等效剂量)及 OA高剂量组(60 mg /
kg) ，每组 12 只。OA 用 0. 25% CMC-Na 混悬，模型
组和正常对照组给予等体积的 0. 25% CMC-Na，OA
低、高剂量 OA组分别给予 30、60 mg /kg OA，连续给
药治疗 1 个月。
2. 3 测定大鼠血液生化指标及肝组织中 MDA、
GSH、总一氧化氮(NOx)、(cGMP)和 eNOS 酶活的
含量 大鼠禁食(不禁水) ，末次给药后 24 h，腹主
动脉取血，分离血清，采用自动血液生化仪测定血清
中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶
(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷光酰基转肽酶(γ-
GT)、胆红素(Bilirubin)、白蛋白(Albumin)和总蛋
白(Total protein)的含量。脱颈椎处死大鼠，立即取
肝组织，生理盐水冲洗 2 ～ 3 次，吸干水分，剪取 0. 1
g肝组织，加 3 倍体积生理盐水匀浆，离心分离，上
清液采用试剂盒测定肝组织中丙二醛(MDA)、谷胱
甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、NOx 和环磷酸鸟苷
(cGMP)的含量以及采用 NO 荧光检测探针 DAF-
FM DA 法测定肝脏 eNOS的酶活性。
2. 4 血流动力学研究 以 20%戊巴比妥钠按 2
mL /kg剂量麻醉大鼠，将麻醉好的大鼠置于保温玻
璃板上，温度维持在37 ℃左右，固定好四肢，沿大鼠
腹壁正中线剪开长约 2 cm 的“一”字形小口，打开
腹腔，暴露门静脉主干，分离出肠系膜上静脉，结扎
远离门静脉的一端，然后用膜状内翳剪于静脉血管
上剪开一“V”形小缺口，插入 PE-10 管至门静脉正
中，固定后，接压力换能器，应用八道生理记录仪
(型号:AOWERLAD /85，生产厂家:澳大利亚 AD 公
司) ，稳定 30 min 后，测定正常对照组、模型组、OA
组及 ZCVI4-2 组的门静脉压力(PP)、门静脉血流
量，左侧股动脉插管测平均动脉压(MAP)。
2. 5 免疫组织化学染色测定 I 型胶原蛋白的含量
取肝组织以中性甲醛固定，石蜡包埋后切片常规
·139·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 6 期 2012 年 6 月
脱蜡至水，3%过氧化氢室温下 15 min 以灭活内源
性酶，蒸馏水冲洗后枸橼酸热修复抗原，PBS 冲洗，
滴加血清封闭液室温下 20 min 后擦掉多余液体，滴
加兔源性抗 I 型胶原蛋白(1 ∶ 100)胶原蛋白
(1∶ 100)多克隆抗体湿盒内4 ℃过夜，PBS 冲洗后滴
加生物素化山羊抗兔 IgG 二抗室温下 20 min，PBS
冲洗，滴加链酶亲和素一生物素一过氧化物酶复合
物(SABC)室温下 20 min，PBS 冲洗后以 DAB 显色
剂进行显色，光学显微镜下控制反应时间，蒸馏水中
止，苏木素轻度复染，酒精脱水，二甲苯透明，中性树
脂封片，光镜下观察。
2. 6 Western blotting 分析肝组织 eNOS 的蛋白表
达量变化 约 0. 1 g 肝组织，加裂解液，制匀浆，制
备膜蛋白。用 Bradford 法测定蛋白浓度，用 SDS 上
样缓冲液稀释蛋白液。取 50 μg 蛋白液用 4% SDS-
聚丙烯酰胺胶电泳分离。电泳后，蛋白移到硝基纤
维膜上。膜用磷酸缓冲液(0. 1% tween-20，5%脱脂
奶粉)室温封闭 60 min 后，用磷酸缓冲液(0. 1%
tween-20)洗3 次。膜与相应单克隆抗体 250 倍磷酸
生理稀释液(0. 1% Tween-20 2%牛血清蛋白)4 ℃，
温孵过夜，用磷酸缓冲液(0. 1% tween-20)清洗后，
与接有 IRDyeTM800 的鼠抗 IgG抗体 5 000 倍稀释液
(含 0. 1% Tween-20)室温温孵 45 min，清洗后，eNOS
测定斑点的大小和灰度，用 β-actin 为内参，以目标
蛋白与 β-actin相对灰度为指标，采用凝胶成像(Im-
age Quant ECL Image Quant美国 GE公司)分析系统
分析 eNOS表达量的变化。
2. 7 病理检查 颈部脱臼处死大鼠，立即取肝组
织，保存于 10%福尔马林中 24 h后，开始脱水，石蜡
包埋。取石蜡包埋的肝组织，作 2 μm切片，60 ℃烘
干融蜡，然后以二甲苯脱蜡，酒精梯度复水，Masson
染色切片，光镜下观察病理改变，每片切片至少含有
4 块肝组织，每个切片随机观察不重叠测量 10 个
200 倍视野，平均值作为判定厚度的标准，检查有无
肝细胞变性(水肿、脂变) ，坏死;肝窦有无扩张、淤
血，枯否细胞有无增生;肝组织内有无纤维组织增生，
肝小叶及门管区有无炎细胞浸润，并比较炎症程度。
3 结果
3. 1 肝硬化大鼠的血液生化指标分析及肝组织中
MDA、GSH、总一氧化氮(NOx)、(cGMP)和 eNOS 酶
活的含量测定 结果如表 1、2 所示，造模大鼠较正
常大鼠的体质量有显著性差异(P ＜ 0. 05) ，通过 OA
治疗后，模型各组大鼠的体质量无显著性差异(P ＞
0. 05)。与正常大鼠比较，模型大鼠的脾质量、血清
ALT、AST 及 MDA 水平显著升高(P ＜ 0. 01) ，表明
肝硬化大鼠模型造模成功。给予低、高剂量 OA 治
疗后，肝硬化门脉高压的大鼠脾质量、血清中 ALT、
AST 和 MDA 显著降低。而肝组织中 GSH、NOx、
cGMP及 eNOS水平显著升高。
3. 2 血流动力学测定 结果见表 3。经 CCl4 造模
以后，与正常对照组比较，肝硬化大鼠较的门静脉压
力(PP)显著升高(P ＜ 0. 05) ，升高幅度达 11 mm-
Hg，为正常对照组的 2. 6 倍。同时发现模型大鼠的
肠系膜上静脉血流量(SMABF)较正常对照组大鼠
显著升高(P ＜ 0. 05) ，升高幅度为正常对照组的 1
倍左右。而在给予低、高剂量 OA治疗 4 w 之后，肝
硬化大鼠的 PP显著下降(P ＜ 0. 05) ，治疗后大鼠的
PP 与模型组比较下降了约 33%。而主动脉压力
(MAP)和心率(HR)无明显改变。
表 1 齐墩果酸(OA)治疗前后对肝硬化门静脉高压大鼠的体质量、肝质量、脾质量(珔x ± s，n =12)
组别 治疗前体质量 /g 治疗后体质量 /g 肝质量 /g 脾质量 /g
正常对照组 504. 58 ± 29. 99 518. 46 ± 29. 71 13. 03 ± 0. 77 1. 45 ± 0. 27
模型组 455. 42 ± 36. 69* 470. 67 ± 39. 33* 13. 58 ± 1. 03 2. 64 ± 0. 87*
OA(LD，30 mg /kg) 454. 50 ± 32. 47 484. 42 ± 34. 17 12. 99 ± 1. 12 1. 89 ± 0. 54#
OA(HD，60 mg /kg) 455. 08 ± 44. 95 478. 68 ± 51. 34 13. 20 ± 1. 15 2. 02 ± 0. 63#
注:与对照组比较，* P ＜ 0. 05;与模型组比较，#P ＜ 0. 05
表 2 齐墩果酸(OA)对肝硬化门静脉高压大鼠血清生化指标及肝组织中 MDA和 GSH-Px含量的影响(珔x ± s，n =12)
组别
ALT
/(U /L)
AST
/(U /L)
MDA
/(nmol /mg)
GSH-Px
/(U /L)
NOx
/(nmol /mg)
cGMP
/(pmol /mg)
eNOS
/(nmol /mg)
正常对照组 39. 14 ± 9. 34 81. 06 ± 17. 25 5. 82 ± 1. 37 138. 55 ± 18. 75 427. 13 ± 91. 33 1768. 3 ± 421. 7 0. 417 ± 0. 082
模型组 116. 83 ± 34. 62＊＊ 174. 67 ± 78. 89＊＊ 13. 48 ± 4. 19＊＊ 63. 67 ± 23. 75＊＊ 184. 37 ± 68. 46＊＊ 847. 6 ± 138. 9＊＊ 0. 174 ± 0. 034＊＊
OA(LD，30 mg /kg) 50. 01 ± 12. 58## 91. 57 ± 14. 27# 7. 11 ± 2. 77# 107. 92 ± 31. 17# 308. 41 ± 81. 89# 1383. 41 ± 251. 6# 0. 267 ± 0. 051#
OA(HD，60 mg /kg) 60. 86 ± 19. 83## 90. 43 ± 10. 37# 6. 56 ± 2. 67# 103. 22 ± 27. 44# 322. 73 ± 73. 81# 1441. 2 ± 288. 2# 0. 288 ± 0. 049#
注:与对照组比较，＊＊P ＜ 0. 01;与模型组比较，#P ＜ 0. 05，##P ＜ 0. 01
·239· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 6 期 2012 年 6 月
表3 齐墩果酸(OA)治疗前后对肝硬化大鼠的门静脉压力、肠系膜上静脉血流量、主动脉压力及心率的影响(珔x ± s，n =12)
组别 MAP /mmHg
HR/
(次 /min)
PP /
(mmHg)
SMABF /
(mL /min·100 g)
正常对照组 128. 96 ± 6. 44 245. 96 ± 56. 56 7. 16 ± 2. 21 1. 51 ± 0. 42
模型组 133. 15 ± 8. 75 230. 57 ± 48. 83 18. 02 ± 2. 49＊＊ 3. 06 ± 0. 83*
OA(LD，30 mg /kg) 134. 38 ± 10. 99 229. 75 ± 38. 69 13. 72 ± 0. 52# 2. 34 ± 0. 49
OA(HD，60 mg /kg) 130. 80 ± 15. 38 233. 65 ± 46. 80 13. 49 ± 1. 61# 2. 02 ± 0. 61##
注:与正常对照组比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01;与模型组比较，#P ＜ 0. 05，##P ＜ 0. 01
3. 3 免疫组织化学染色测定 I 型胶原蛋白的含量
与正常对照组大鼠比较，模型大鼠的肝脏 I 型胶原
蛋白广泛存在于纤维间隔(P ＜ 0. 05) ，由汇管区向小
叶内延伸形成纤维间隔，包绕肝细胞形成假小叶。给
予给予低、高剂量 OA治疗后，I型胶原蛋白的含量显
著降低(P ＜0. 05)。并且治疗后发现纤维间隔较薄，
形成不完全，未见假小叶。见图 1。
图 1 齐墩果酸(OA)对肝硬化门静脉高压大鼠肝组织 I型胶原蛋白的影响(珔x ± s，n =12)
A. 正常对照组 B. 模型组 C. OA 30 mg /kg组 D. OA 60 mg /kg组 E. 大鼠肝组织 I型胶原蛋白鉴定
注:与正常对照组比较，* P ＜ 0. 05;与模型组比较，#P ＜ 0. 05
3. 4 Western blotting 分析肝组织 eNOS 的蛋白表
达量变化 与正常对照组比较，模型大鼠肝内 eNOS
蛋白表达的水平显著降低(P ＜ 0. 001) ;给予低、高
剂量 OA治疗治疗后，肝内 eNOS蛋白表达水平显著
升高(P ＜ 0. 05)。见图 2。表明肝内 NOx 的增加与
OA提高肝内 eNOS蛋白表达的水平有关。
3. 5 病理检查结果 与正常对照组比较，模型组
大鼠的肝脏表面呈结节状，肝切面可见无数圆形或
类圆形结节，弥漫分布于全肝，镜下肝内有广泛的结
缔组织增生，肝组织汇管区中可见纤维组织增生明
显，且向肝小叶内延伸;同时，纤维组织于中央静脉
周围增生并与汇管区纤维相连包绕形成假小叶，汇
管区及中央静脉周围可见炎细胞侵润，沿界板及其
他部位有肝细胞浓染、溶解及小双核细胞，并伴有脾
肿大，门静脉压力显著升高。给予低、高剂量 OA 治
疗后，肝硬化大鼠的肝纤维化进展显著降低(P ＜
图 2 齐墩果酸(OA)显著提高肝硬化门静脉高压大
鼠肝内 eNOS蛋白表达的水平(珔x ± s，n =12)
A. 正常对照组 B. 模型组 C. OA 30 mg /kg组 D. OA 60
mg /kg组
注:与正常对照组比较，* P ＜ 0. 001;与模型组比较，#P ＜ 0. 05
·339·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 6 期 2012 年 6 月
图 3 齐墩果酸(OA)对肝硬化门静脉高压大鼠肝组织的 Masson染色的影响(珔x ± s，n =12)
A. 正常对照组 B. 模型组 C. OA 30 mg /kg组 D. OA 60 mg /kg组
注:与正常对照组比较，* P ＜ 0. 001;与模型组比较，#P ＜ 0. 05
0. 05)。见图 3。
4 讨论
肝硬化门脉高压症是一种常见病、多发病，严重
威胁人们的健康，而一个稳定、可靠的动物实验模型
将为各种相关研究提供极大帮助。肝硬化门将脉高
压大鼠模型的制作方法很多，目前常用的有 CCl4
法、二甲基亚硝胺法、胆管阻塞法等〔5，6〕，其中 CCl4
诱发肝硬化动物模型是一个较为经典的方法。与其
他方法比较，CCl4 诱导的动物肝纤维化或肝硬化在
形态学，病理生理学的某些方面与人类肝硬化类似，
如二者均有肝细胞坏死后的再生，肝硬化晚期纤维
的浸润几乎不可逆等。
AST及 ALT 是用于判断肝实质损害的主要酶
类。当肝细胞被破坏，细胞膜通透性增高及线粒体
损伤时，AST、ALT被释放到血液中，使之明显升高，
并伴随着血清白蛋白水平下降，酶活性的高低与肝
细胞受损的程度相一致。给予 OA 治疗后，肝硬化
门静脉高压大鼠 AST、ALT 显著下降，结果表明 OA
具有明显的保护肝细胞和改善肝功能的作用;活性
氧(ROS)及脂质过氧化物(如 MDA)具有直接活化
肝星状细胞的作用，引起胶原蛋白含量升高，导致肝
纤维化或肝硬化。MDA是 PUFA 降解产物之一，是
常用的检测脂质过氧化损伤的指标、谷胱甘肽过氧
化物酶(GSH-Px)对维持细胞的牛物功能具有重要
作用，具有抗氧化和清除自由基的作用，故抑制脂质
过氧化是抗纤维化的重要环节。给予 OA 治疗后，
可显著抑制 MDA 的生成，并增加 GSH-Px 的活性，
显著降低 I 胶原蛋白的含量，结果提示 OA 有可能
通过抗脂质过氧化而抑制肝星状细胞的增殖、活化，
从而改善大鼠的门静脉压力。
肝硬化门静脉高压的发病机理十分复杂，目前
国内外学者研究认为可能与肝内 NO 含量降低有
关。故在肝硬化门静脉高压患者及动物肝内内源性
或外源性中补足肝内缺失的 NO 水平是治疗肝硬化
门静脉高压的理想选择〔7，8〕。本研究发现，给予 OA
治疗后，一方面能显著提高肝内 eNOS 的蛋白表达
及其活性促进 NO 信使 cGMP 的含量增加和 NO 在
肝内的释放，提高肝内 NOx 的含量，降低肝内血管
阻力和门静脉压力;而 OA 对全身血液动力学指标
如心率(HR)、腹主动脉平均压(MAP)等均无明显
影响。
综上所述，OA 对四氯化碳诱导大鼠肝硬化门
静脉高压具有良好的干预和治疗作用，其作用机理
可能是通过促进肝内的蛋白表达从而提高肝内 NOx
的含量。
参 考 文 献
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收稿日期:2011-12-12
基金项目:国家科技部十一五支撑计划资助项目(2006BAI11B08)
作者简介:罗珊珊(1986-) ，女，硕士，主要从事中药活性成分筛选研究;Tel:021-51322333，13661958078。
* 通讯作者:可燕，Tel:021-51322539，E-mail:keyan111@ yahoo. com. cn。
半夏白术天麻汤对自发性高血压大鼠
肾脏蛋白表达谱的影响
罗珊珊1，蒋嘉烨1，栗 源1，陆家凤1，可 燕1，2*
(1. 上海中医药大学教学实验中心，上海 201203;2. 上海高校一氧化氮与炎症医学研究院，上海 201203)
摘要 目的:通过研究半夏白术天麻汤干预后的自发性高血压大鼠(SHR)肾脏蛋白表达情况，以揭示半夏白
术天麻汤治疗高血压肾损伤的蛋白质组学机制，为进一步阐明中药复方半夏白术天麻汤的作用机理提供依据。方
法:6 周龄自发性高血压大鼠随机分为 2 组，SHR组与半夏白术天麻汤组，半夏白术天麻汤组以半夏白术天麻汤水
煎剂灌胃 18 w，SHR组和血压正常的 Wistar-Kyoto大鼠(WKY)灌服等量的蒸馏水，三组大鼠于 24 周龄处理，颈动
脉插管测量大鼠血压，肾脏组织蛋白提取、纯化后做双向电泳分析，图谱经 PDQuest软件分析后得到的差异蛋白点
用串联飞行时间质谱仪(MALDI-TOF /TOF MS)分析鉴定。Western blot测定肾脏铜锌超氧化物歧化酶、过氧化物酶
2 蛋白的表达。结果:SHR与 WKY比较，有 11 个蛋白点表达发生变化，其中半夏白术天麻汤可调节肾脏铜锌超氧
化物歧化酶、过氧化物酶 2 及可能调节 α-B晶状体的蛋白表达，这些蛋白靶点主要与氧化应激密切相关，提示半夏
白术天麻汤可通过抗氧化应激来发挥治疗作用。结论:氧化应激在高血压肾损伤过程中起到重要的作用。半夏白
术天麻汤可抗氧化应激，靶蛋白的发现为揭示中药复方半夏白术天麻汤的作用机制提供了理论依据。
关键词 双向电泳;半夏白术天麻汤;自发性高血压大鼠;肾损伤;氧化应激
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454-(2012)06-0935-05
The Effect of Banxia Baizhu Tianma Decoction on Renal Protein
Expression in Spontaneously Hypertensive Rats
LUO Shan-shan1，JIANG Jia-ye1，LI Yuan1，LU Jia-feng1，KE Yan1，2
(1. Experiment Center for Teaching and Learning，Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 201203，China;
2. E-Institute of Shanghai Universities，Division of Nitric Oxide and Inflammatory Medicine，Shanghai 201203，China)
Abstract Objective:To study the effect of Banxia Baizhu decoction on the spontaneously hypertensive rats and its possible mech-
anism. Methods:Male SHRs of 6 weeks old were randomly and equally divided into two groups，the control SHR group and the group
treated with BXBZTMD，the treated group were treated with BXBZTMD orally for 18 weeks，the control SHR group and normotensive
WKY group were fed with the same amount of distilled water. Rats blood pressure was measured through carotid artery catheterization，
and protein of kidney tissues was analyzed by two-dimensional electrophoresis after extraction and purification. Different protein spots
expressed significantly which were anlyzed by PDQuest software were then identified by MALDI-TOF /TOF MS. The protein expressions
of peroxidase 2 and Cu-Zn superoxide in kidney were determined by Western blot. Results:Compared SHR with WKY，12 protein spots
·539·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 6 期 2012 年 6 月