全 文 ：收稿日期:2004-11-19
基金项目:国家高技术研究发展计划(863计划)资助项目(2002AA2Z3217).
作者简介:熊筱娟(1957-),女 ,江西宜春市人 ,副教授 , 主要从事药理 、毒理学研究及新药研究与开发.
文章编号:1000-5862(2004)06-0540-04
乌索酸与齐墩果酸对小鼠实验性
肝损伤保护作用的比较
熊筱娟1 , 　陈　武1 , 　肖小华2 , 　徐丽英2 , 　崔江龙3
(1.宜春学院,江西 宜春　336000;2.江西省药物研究所 ,江西南昌　330029;
3.宜春市第一人民医院 ,江西宜春　336000)
摘要:为了研究乌索酸的保肝作用及其特色 ,分别建立四氯化碳(CCl4)、D-氨基半乳糖胺(D-GalN)、卡
介苗加脂多糖(BCG-LPS)及异硫氰酸-1-萘酯(ANIT)诱导小鼠肝脏损伤模型 , 以测定血清谷丙氨酸转
换酶(ALT)、谷草氨基酸转换酶(AST)、总胆红素(TB)和肝组织丙二醛(MDA)含量为指标 , 观察乌索酸对
肝脏损伤的保护作用 , 并与抗肝炎药物齐墩果酸进行比较.结果表明:30 mg/ kg 乌索酸均能显著降低
CCl4、D-GalN、BCG-LPS、ANIT致肝损伤小鼠血清ALT和肝 MDA值 , 而 30 mg/kg 齐墩果酸对CCl4、BCG-
LPS 肝损伤小鼠降 ALT效果不及乌索酸;30 mg/kg 乌索酸能非常显著地降低 ANIT 致肝损伤小鼠血清
TBLL含量 , 而 30 mg/kg 齐墩果酸与联苯双酯降血清 TB 作用不明显.提示:乌索酸具有明显的降酶 、退黄
保肝作用.
关键词:乌索酸;齐墩果酸;ALT;MDA;TB
中图分类号:R 965.3　　　文献标识码:A
陆英冲剂 、糖浆剂为中药抗肝炎药物 ,其降酶 、退黄 ,增进食欲 ,恢复肝功能效果显著[ 1] .陆英中含有乌
索酸(Ursolic acid ,UA ,又名熊果酸 、乌苏酸)、齐墩果酸(Oleanolic acid ,OA)[ 2] ,陆英中乌索酸含量较高 ,约为
3.25‰;齐墩果酸较低约为 0.3‰[ 3] .齐墩果酸的保肝作用已被肯定 ,作为抗肝炎药物亦早已应用于临床.乌
索酸与齐墩果酸化学结构相似 ,为了研究陆英中活性成分乌索酸的保肝作用及其特色 ,我们进行了乌索酸
与齐墩果酸对小鼠实验性肝损伤保护作用的比较研究 ,现将结果报告如下.
1　材料
1.1　动物
昆明种小鼠 ,18 ～ 22 g ,雄性 ,购自中国科学院上海动物中心 ,动物合格证号为 SCXK(沪)2003-0003.
1.2　药品与试剂
乌索酸(UA ,纯度为 93%以上)由宜春学院生物工程研究所药化实验室从植物陆英中提取 ,用 0.2%泊
洛沙姆(泊洛沙姆F68 ,上海运宏化工制剂辅料技术有限公司出品)助溶 ,超声振荡后备用;齐墩果酸(OA ,四
川康福来制药有限公司出品 ,批号 020402);联苯双酯滴丸(上海华氏制药有限公司 ,批号 348003);D氨基半
乳糖(D-GalN ,中国人民解放军防化所提供);异硫氰酸-1-萘酯(ANIT ,中国医学科学院药物研究所提供 ,
批号 911209);四氯化碳(CCl4 ,益林化工厂出品 ,批号 941213);ALT 测定试剂盒(批号 20010504);AST 测定试
剂盒(批号 20011201 ,中生北控生物科技股份有限公司出品);卡介苗(BCG ,上海生物制品研究所出品 ,批号
20044001);脂多糖(LPS为 Flara公司出品).
第 28卷第6期
2004年 12月　
江西师范大学学报(自然科学版)
JOURNAL OF JIANGXI NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
Vol.28 No.6
　Dec.2004
DOI :10.16357/j.cnki.issn1000-5862.2004.06.019
1.3　仪器
BT-224半自动生化分析仪 ,意大利出品;Au-640全自动生化分析仪 ,德国宝灵曼公司出品.
2　方法与结果
2.1　对 CCl4致急性肝损伤小鼠的保护作用[ 4]
取昆明种小鼠 50只 ,按体重随机分为 5组 ,分别为空白组 、模型组 、UA 30 mg/kg组 、OA 30 mg/kg 组 、阳
性对照药联苯双酯 200 mg/kg组 、各组动物每天分别按0.2 mL/kg灌胃给予NS 和受试药 ,连续给药 6 d ,末次
给药后1 h ip 0.1%CCl4 0.01 mL/g.然后禁食 16 h ,眼眶采血测血清ALT 、AST ,解剖取同一位置小块肝脏称
重 ,用生理盐水匀浆成 10%肝组织匀浆 ,测其MDA值 ,计算平均值和标准差 ,并与模型组比较检验.结果见
表1.
表 1　UA与 OA对 CCl4 致肝损伤小鼠的血清 ALT、AST、TB 的影响(x±s)
组别 剂量(mg/kg) 动物数(只) ALT(U/ L) AST(U/ L) MDA(nmol/ mL)
空白组 　 10 33.87±12.99＊＊ 160.58±36.98＊＊ 134.5±59.3＊＊
模型组 　 10 271.78±64.88 282.69±63.02 261.5±98.4
UA组 30 10 100.37±70.58＊＊ 200.56±45.03＊＊ 132.0±60.1＊＊
OA组 30 10 196.19±122.77 228.49±80.21 183.5±45.7＊
联苯双酯组 200 10 50.44±46.37＊＊ 198.48±58.37＊＊ 168.5±62.4＊
　　　　与模型组比较:＊ P <0.05 , ＊＊P <0.01.
表1结果显示:肝损伤模型组与正常组比较小鼠血清 ALT 、AST 和肝组织MDA值明显升高(P <0.01);
UA组与联苯双酯组均能使肝损伤小鼠血清ALT 、AST 和肝组织 MDA值显著降低(P <0.01);OA组虽然有
降低肝损伤小鼠血清 ALT 、AST 和肝组织MDA值趋势 ,但统计学无意义(P ≥0.05).
2.2　对 D-Gal致急性肝损伤小鼠的保护作用[ 4]
取昆明种小白鼠 50只 ,按体重随机分为 5组 ,分别为空白组 、模型组 、30 mg/kg UA组 、OA 30 mg/kg 组 、
联苯双酯 200 mg/kg 组 ,各组动物每天分别按 0.2 mL/kg 灌胃给予水和试药 ,连续给药6 d ,末次给药后 1 h ip
D-Gal 800 mg/kg.然后禁食 24 h ,眼眶采血 ,测血清 ALT 、AST ,解剖取同一位置小块肝脏称重 ,用生理盐水
匀浆成10%肝组织匀浆 ,测其MDA ,计算平均值和标准差 ,并与模型组比较检验.结果见表2.
表 2　UA 与OA对 D-Gal致肝损伤小鼠血清 ALT、AST 、TB 的影响(x±s)
组别 剂量(mg/kg) 动物数(只) ALT(U/ L) AST(U/ L) MDA(nmol/ mL)
正常组 　 10 36.66±10.92＊＊ 136.87±33.79＊＊ 44.2±17.2＊＊
模型组 　 10 1 298.42±766.88 1 128.36±208.35 92.4±48.7
UA组 30 10 543.73±378.18＊ 694.73±196.88＊ 62.7±14.8＊
OA组 30 10 328.2±291.75＊＊ 657.59±206.31＊ 70.5±35.3＊
联苯双酯组 200 10 513.82±387.09＊＊ 794.63±421.54＊ 42.7±13.9＊＊
　　　　＊与模型组比较:＊ P <0.05 , ＊＊P <0.01.
表2结果指出:肝损伤模型组与正常组比较小鼠血清 ALT 、AST 和肝组织MDA值明显升高(P <0.01);
UA组 、OA组与联苯双酯组均能使肝损伤小鼠血清 ALT 、AST 和肝组织 MDA 值显著降低(P <0.05 , P <
0.01).
2.3　对 BCG +LPS 急性免疫肝损伤小鼠的保护作用[ 5]
取雄性昆明种小鼠 50只 ,按体重分层随机分为 5组 ,分别为空白组 、模型组 、UA 30 mg/kg组 、OA 30 mg/
kg 组 、联苯双酯 200 mg/kg组 ,除空白组外 ,其余各组动物于第1天给药前 1 h鼠尾 iv BCG 2.5 mg/只 ,然后各
组均灌胃给予受试药 ,连续7 d ,末次给药 1 h后鼠尾 iv LPS 10 mg/只 ,然后禁食 16 h 后眼眶采血 ,测血清
541第 6期 熊筱娟 ,等:乌索酸与齐墩果酸对小鼠实验性肝损伤保护作用的比较
ALT ,AST ,结果见表 3.
表 3　UA 与 OA对 BCG-LPS 致肝损伤小鼠血清 ALT、AST 的影响(x±s)
组别 剂量(mg/ kg) 动物数(只) ALT(U/ L) AST(U/ L)
正常组 　 10 33.00±9.51＊＊ 126.73±31.18＊＊
模型组 　 10 1 525.3±824.5 1 899.2±730.2
UA 组 30 10 681.7±441.9＊＊ 1 190.1±650.1＊
OA 酸 30 10 1 093.3±853.6 1 379.4±855.0
联苯双酯组 200 10 487.5±223.2＊＊ 1 325.3±595.3
　　　　　　　　　＊与模型组比较:＊P <0.05 , ＊＊P <0.01.
表3结果表明:肝损伤模型组与正常组比较小鼠血清 ALT 、AST 值明显升高(P <0.01);UA组与联苯双
酯组均能使肝损伤小鼠血清ALT 值显著降低(P <0.01),OA 组虽然有降低趋势 ,但统计学无意义(P ≥
0.05);UA组能非常显著降低肝损伤小鼠血清 AST 值(P <0.05),OA组与联苯双酯组虽然有降低趋势 ,但
统计学无显著性差异(P ≥0.05).
2.4　对ANIT致胆汁淤积性肝损伤小鼠的保护作用[ 4]
取昆明种小白鼠 50只 ,按体重随机分为 5组 ,分别为空白组 、模型组 、UA 30 mg/kg 组 、OA 30 mg/kg 组 、
联苯双酯 200 mg/kg 组 , ,各组动物每天分别按 0.2 mL/kg 灌胃给予水和试药 ,连续给药 6 d ,末次给药后 1 h
ig异硫氰酸-1-萘酯 70 mg/kg.然后禁食 24 h ,眼眶采血 ,测血清 ALT 、AST 、TBIL ,计算平均值和标准差 ,并
与模型组比较检验.结果见表 4.
表 4　UA 与OA对 ANIT致肝损伤小鼠血清 ALT、AST 、TB 的影响(x±s)(n=10)
组别 剂量(mg/kg) ALT(U/L) AST(U/L) TB(μmol/ L)
空白组 　 20.25±11.88＊＊ 69.49±12.42 4.29±1.91＊＊
模型组 　 647.37±220.28 756.62±389.29 12.23±4.55
UA组 30 424.26±121.84＊＊ 551.69±257.29 4.65±1.24＊＊
OA组 30 410.09±112.48＊＊ 657.39±201.65 11.87±4.32
联苯双酯组 200 369.94±66.09＊＊ 843.75±184.69 8.38±2.67
　　　　　　　＊与模型组比较:＊ P <0.05 , ＊＊P <0.01.
表4结果表明:肝损伤模型组与正常组比较小鼠血清 ALT 、AST 值明显升高(P <0.01);UA组 、OA组与
联苯双酯组均能使肝损伤小鼠血清ALT 值显著降低(P <0.01),UA 组 、齐墩果酸组虽然有降低小鼠血清
AST 趋势 ,但统计学无显著性差异(P ≥0.05);UA 组与联苯双酯组均能使肝损伤小鼠血清 TB值显著降低
(P <0.01 , P <0.05),OA组却效果不明显.
3　讨论
本实验采用四种小鼠肝损伤模型研究乌索酸的保肝作用并与齐墩果酸进行比较.实验结果表明:乌索
酸30 mg/kg 均能显著降低 CCl4、D-GalN 、BCG -LPS 、ANIT 致肝损伤小鼠血清 ALT ,尤其对 CCl4 、BCG-LPS
肝损伤模型小鼠降ALT 、肝MDA值效果比齐墩果酸好.齐墩果酸 30 mg/kg 对 CCl4 、BCG -LPS肝损伤模型虽
有降酶趋势 ,但统计学无意义 ,认为与药物剂量低有关 ,增大其药物剂量保肝效果可能将与文献报道一致.
乌索酸30 mg/kg 与阳性对照药联苯双酯 200 mg/kg 比较降酶效果相当.乌索酸 、齐墩果酸和联苯双酯均能显
著降低 CCl4 、D-GalN肝组织MDA值 ,说明均有抗过氧化物作用.乌索酸能显著降低异硫氰酸-1-萘酯致
肝损伤小鼠血清 TB含量 ,有明显的退黄作用 ,与临床报导相符[ 6] .齐墩果酸和联苯双酯降低 TB 作用不明
显.
齐墩果酸护肝 、解毒作用已得到肯定 ,其机制认为是多重的 ,即化学结构存在活泼的双键 、羟基 、羧基官
542 江西师范大学学报(自然科学版) 2004年
能团 ,如与毒物结合易发生化学反应 ,达到解毒目的[ 7] ;能对抗自由基 ,抑制脂质过氧化物 ,有膜稳定作
用[ 8] ;增加肝细胞谷胱甘肽酶活力 ,直接抑制转氨酶活性 ,减少几种 ,抑制 P4502E1的表达和活性 ,并且使肝
细胞 DNA及蛋白质合成迅率明显增高 ,有促进肝组织修复的作用[ 8 ～ 10] .乌索酸与齐墩果酸同属五环三萜类
化合物 ,两者为同分异构体 ,认为也有解毒作用.乌索酸保肝 、护肝机制可能与齐墩果酸有相似之处 ,但从实
验结果分析认为有特色 , 可能重在对抗自由基 、抑制脂质过氧化物 ,免疫功能增强 ,诱导细胞凋亡的作
用[ 11 ,12] ,值得进一步研究.
参考文献:
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[ 12] 夏国豪.熊果酸抗肿瘤作用研究进展[ J] .国外医学肿瘤学分册 , 2002 , 29(6):420.
The Comparative Protective Effect of Ursolic Acid and
Oleanolic Acid on Experimental Liver Injury in Mice
XIONG Xiao-juan1 , 　CHEN Wu1 , 　XIAO Xiao-hua2 , 　XU Li-ying2 , 　CUI Jang-long3
(1.Yichun University , Yichun Jiangxi 336000, China;2 Jiangxi Institute of Materia Medica , Nanchang 330029 , China;
3.The First People s Hospital of Yichun District , Yichun Jiangxi 336000 , China)
Abstact:To study the liver-protection of ursolic acid administrated ig in mice ,ursolic acid and oleanolic acid was ad-
ministrated ig to the mice with liver injuries induced by CCl4 ,D-GalN ,BCG +LPS andAMIT respectively.ALT ,AST ,
TB level in serum and liver MDA were examined.Results:Ursolic acid administrated ig decreased the serum ALT 、AST
levels and liver MDA content in the mice liver injuries induced by CCl4 ,D-GalN ,BCG+LPS respectively;Ursolic acid
is better than Oleanolic acid , as respect to administrated ig decreased the serum ALT ,AST levels liver injuries induced by
CCl4 ,BCG +LPS respectively.Ursolic acid administrated ig decreased the serum TB levels in the mice liver injuries in-
duced by AMIT.Oleanolic acid cannot decreased the serum TB level in the mice liver injury induced by AMIT.Ursolic
acid showed that the protective effect against liver injuries induced by CCl4 ,D-GalN ,BCG +LPS and AMIT respective-
ly.
Key words:ursolic acid;oleanolic acid;ALT;MAD;TB
(责任编辑:刘显亮)
543第 6期 熊筱娟 ,等:乌索酸与齐墩果酸对小鼠实验性肝损伤保护作用的比较