全 文 ：图 1　空白血清(A)及空白血清中加小檗碱 、普罗帕酮 、内标(B)的提取
物色谱图
1.小檗碱;2.普罗帕酮;3. 内标
Fig 1　Ch rom atogram of ex t racted blank serum(A) and b lank serum
spiked w ith berberine , p ropafenone and IS(B)
1. berberine;2. propafenone;3. internal s tandard
的系列浓度。另外 ,于每份血清中加达克罗宁内标液
(100 mg L- 1)40 μL ,按样品处理方法操作。最后以
对照品峰面积与内标峰面积的比值Y (A对照 /A内标)对
标准浓度 C作线性回归 。
2. 6　线性范围的考察　普罗帕酮和小檗碱两种药物
在0. 05 ～ 5. 00 mg L- 1范围内浓度与峰面积比成线性
关系 ,线性方程分别为:Y 1 =0. 765 3C +0. 010 1 ,Y 2
=0. 916 4C +0. 009 3;r分别为0. 999 3 , 0. 999 7 。
2. 7　回收率及精密度　日内与日间回收率与精密度
试验:在同 1天内及 5 d 间配制0. 50 , 2. 00 , 4. 00 mg
L-1 3种浓度的普罗帕酮和小檗碱的血清样品 ,按样
品处理方法操作 ,将各样品峰面积与内标峰面积的比
值代入各自的工作曲线方程 ,求得浓度 。每个浓度 1 d
平行做 5支 ,隔日做 1 次 , 5 d内做完 。两药日内及日
间回收率及精密度(RSD)见表 1。
2. 8　最低检测限　普罗帕酮和小檗碱最低有效检测
浓度均为0. 05 mg L- 1(S /N=3)。
3　讨论
在实验初期 ,对流动相[ 4] 作了优化 ,考察甲醇 、醋
酸钠-醋酸缓冲液 、二乙胺与水不同配比对普罗帕酮和
小檗碱的容量因子和分离度的影响 ,发现流动相为 68
∶25∶2∶5时 ,各药物的峰形好 ,保留时间在 7 min左右 ,
表 1　普罗帕酮 、小檗碱的回收率与精密度试验结果(n=5)
Tab 1　Recovery and precision of berberine and propafenone(n
=5)
药品 浓度
mg L- 1
日内 日 间
回收率 /% RSD /% 回收率 /% RSD/%
普罗帕酮 0. 5 98. 4±2. 1 2. 2 98. 1±2. 6 2. 7
2. 0 100. 3±3. 4 3. 5 100. 6±3. 8 3. 9
4. 0 101. 2±2. 1 2. 0 101. 1±2. 2 2. 3
小檗碱 0. 5 98. 7±4. 1 4. 4 97. 9±2. 5 2. 7
2. 0 100. 2±3. 4 3. 5 99. 5±2. 4 2. 5
4. 0 101. 1±2. 6 2. 7 100. 4±2. 4 2. 6
能满足临床药物检测的要求。
将普罗帕酮 、小檗碱在 200 ～ 400 nm 波长范围内
扫描 ,得普罗帕酮最大吸收波长为 278 nm ,小檗碱最
大吸收波长为 240 nm ,且普罗帕酮和达克罗宁在 240
nm 处也有较强的紫外吸收 ,因此确定 240 nm 为色谱
检测波长 。
本实验建立了既能单独测定 ,又能同时测定普罗
帕酮和小檗碱血清药物浓度的高效液相色谱法。本法
可减少单独测定两种药物时必须更换流动相和色谱柱
的繁琐操作。便于研究两种药物合并使用中的相互作
用及临床监测。
本法所选择的流动相和提取溶剂价格低廉 ,毒性
较小 ,且回收率高 ,精密度好 ,简便 、快速 、准确 ,分析时
间短 ,适合医院中药物监测的常规分析 。
参考文献:
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抗心律失常作用的实验观察[ J] .天津医药 , 2000 , 28(3):164.
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浓度[ J] .中国新药杂志 , 2000 , 9(2):99 ～ 100.
[ 4] 　陈秋潮 ,诸骏仁 ,江文德 ,等.高效液相色谱法测定普鲁帕酮血药
浓度及药代动力学研究[ J] .中国临床药理学杂志 , 1985 , 1:12.
[ 收稿日期] 2004-07-29
[作者简介] 李东 ,女 ,学士 ,副主任药师 ,电话:0393-4891479 , E-m ail:m ercy 999@sohu. com
高效液相色谱-蒸发光散射检测法同时测定木瓜中齐墩果酸和熊果酸含量
李东 ,何伶　(中原油田总医院 ,河南 濮阳 457001)
[ 摘要] 　目的:建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法同时测定中药木瓜中齐墩果酸和熊果酸含量。 方法:固定相为 YMC C18(4 . 6
mm×250 mm , 5 μm)色谱柱 , 柱温:35 ℃;流动相:乙腈-水(88∶12), 流速:0 . 8 mL min- 1 ;蒸发光散射检测器检测 , 漂移管温度 90
℃,气体(空气)流速2 . 30 L min-1 。结果:齐墩果酸在0. 20 ～ 2. 01 μg 范围内(r=0 . 999 6)线性关系良好 , 熊果酸在0 . 20 ～ 2. 05 μg
范围内(r=0. 999 8)线性关系良好。木瓜中齐墩果酸和熊果酸的回收率分别为99. 2%和97 . 8%, RSD分别为2. 2%(n=5)和1 . 4%
(n=5)。结论:方法简便 、准确 ,重现性好。
[ 关键词] 　木瓜;齐墩果酸;熊果酸;高效液相色谱-蒸发光散射检测法
[中图分类号] R927. 2 　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2005)03-0259-03
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Determination of olennolic acid and ursolic acid in Fructus chaenomelis by HPLC-Evaporative light-
scattering detection method
LI Dong , HE Ling(The General Hospital o f Zhongyuan Oil Field , Henan Puyang 457001 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To establish a method fo r the determination o f o lenno lic acid and ursolic acid in Fructus Chaenomelis.
METHODS　Sta tionary phase was YMC C18 column(4. 6 mm ×250 mm , 5 μm) with the colum n tem pera tur e of 35 ℃. The mobile
phase composition w as ace tonitrile- water (88∶12). The f low ra te w as 0 . 8 mL min- 1 . An evapo rativ e light-sca ttering detector
(ELSD) w as used as detecto r with gas flow ra te of 2. 30 L min- 1 and drif t tube tempe rature o f 90 ℃. RESULTS　The o lenno lic acid
had a good linearity rela tionship(r=0 . 999 6 , n=5) between 0. 20 - 2. 01 μg. The ursolic acid had a linea r range between 0 . 20 -
2 . 05 μg with r=0. 999 8(n=5). The aver age recove ry of olenno lic acid w as 99 . 2%w ith RSD of 2. 2%, the ursolic acid wa s 97 . 8%
with RSD of 1. 4%. CONCLUSION　It is pro ved that the method is reliable , simple and accurate.
KEY WORDS:F ructus Chaenomelis;H PLC-ELSD;olennolic acid;uso lic acid
　　中药木瓜(Fructus chaenomelis)是临床常用中
药 ,为蔷薇科植物贴梗海棠 Chaenomeles speciasa
(Sweet)N akai的干燥近成熟果实。具有平肝舒筋 ,
和胃化湿的功能 。其所含齐墩果酸(o lennolic acid)具
有降糖作用[ 1] ,熊果酸(ursolic acid)具有较好的抗肿
瘤活性[ 2] 。两者均为五环三萜类成分 ,目前多采用薄
层扫描法[ 3] 检测质量 。本研究建立了高效液相色谱-
蒸发光散射检测法 ,同时测定木瓜中的齐墩果酸和熊
果酸含量 。
1　仪器和试药
LC- 10A tvp色谱泵(日本岛津公司), 7725i型进
样阀(美国 Rheodyne 公司);Alltech - 500型蒸发光
散射检测器(Evapo rative Light-Scat tering Detecto r ,
ELSD)(美国 A lltech公司);甲醇为色谱纯 ,水为注射
用水 ,其他试剂均为分析纯;齐墩果酸和熊果酸对照品
购自中国药品生物制品检定所(供含量测定用);木瓜
Fructus Chaenomelis为市售饮片 ,经鉴定为药典收载
品种 。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件　固定相为 YMC C18(4. 6 mm ×250
mm , 5μm)色谱柱 ,柱温:35 ℃;流动相:乙腈-水(88∶
12);流速:0. 8 mL min-1 ;蒸发光散射检测器检测 ,漂
移管温度 90 ℃,气体(空气)流速:2. 30 L min-1 。齐
墩果酸和熊果酸与其他成分达到良好的分离 ,见图 1。
图 1　齐墩果酸和熊果酸高效液相色谱图
A.齐墩果酸熊果酸对照品;B.木瓜药材中齐墩果酸熊果酸
1-齐墩果酸;2-熊果酸
Fig 1　HPLC ch romatogram of olen nolic acid and ursolic acid
A. reference subs tances;B. f ructu s chaenomelis
1- olennolic acid;2- u rsolic acid
2. 2　对照品溶液的制备　精密称取齐墩果酸对照品
40. 2 mg 和熊果酸对照品 41. 0 mg ,置于 50 mL 量瓶
中 ,加甲醇溶解并定容至刻度 ,摇匀 ,即得每 1 mL 含
齐墩果酸0. 80 mg 和熊果酸0. 82 mg 的溶液 。再精密
量取上述溶液0 . 5 ,1 ,2 ,3 ,4 , 5 mL 分置 6 个 20 mL 量
瓶中 ,分别以甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,即得。
2. 3　供试品溶液的制备 　取药材粉末(粉碎过 5号
筛)0 . 5 g ,精密称定 ,置于 50 mL 具塞三角瓶中 ,精密
加入甲醇 20 mL ,称定重量 ,回流提取 1 h ,放冷 ,称重 ,
用甲醇补足减失的重量 ,滤过 ,取续滤液经0 . 45 μm 微
孔滤膜过滤 ,即得。
2. 4　线性关系的考察　精密吸取对照品溶液 10 μL
注入高效液相色谱仪 ,测定峰面积。以齐墩果酸和熊
果酸进样量的常用对数值为横坐标 ,以峰面积的常用
对数值为纵坐标 ,绘制标准曲线 ,齐墩果酸标准曲线 Y
=1. 506 2X +6. 021 3 , r=0. 999 6;熊果酸标准曲线
Y =1. 427 5X +5. 962 8 , r=0. 999 8。结果表明 ,齐墩
果酸在0. 20 ～ 2 . 01 μg ,熊果酸在0 . 20 ～ 2. 05 μg 范围
内线性关系良好 。
2. 5　样品含量测定　分别吸取不同药材供试品溶液
10 μL 注入液相色谱仪 ,记录峰面积 ,计算供试品中齐
墩果酸和熊果酸的含量。以上述方法分别对市售的 3
种不同木瓜中的齐墩果酸和熊果酸的含量进行测定 ,
测得结果见表 1。
表 1　样品测定结果(n=3)
Tab 1　De termination result of o lennolic acid and ursolic acid in
sample s(n=3)
产地 齐墩果酸 熊果酸含量 /mg L-1 RSD /% 含量 /mg L- 1 RSD/%
湖北长阳 50. 8 2. 2 20. 9 1. 2
安徽宣城 75. 1 2. 3 37. 5 1. 4
四川北川 82. 5 2. 8 30. 1 1. 7
2. 6　精密度试验　精密吸取供试品溶液 10 μL ,在上
述同一色谱条件下 ,连续进样 5次 ,测定齐墩果酸的平
均含量为75. 1 mg L-1 , RSD为0 . 5%;熊果酸平均含
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量为37. 5 mg L- 1 , RSD为0. 8%,表明精密度良好 。
2. 7　重复性试验　取同一批样品平行制备 5份供试
品溶液 ,分别在上述同一色谱条件下 , 分别进样 10
μL ,测定木瓜中齐墩果酸的平均含量为77. 5 mg L-1 ,
RSD为1 . 1%;熊果酸平均含量为37. 6 mg L-1 , RSD
为1. 2%,方法的重复性符合要求。
2. 8　稳定性试验　取新制备的木瓜供试品溶液 ,在上
述同一色谱条件下 ,分别在 0 , 3 , 6 , 12 , 24 h 进样 10
μL ,测定木瓜中齐墩果酸的平均含量为75. 0 mg L-1 ,
RSD为1 . 5%;熊果酸平均含量为40. 1 mg L-1 , RSD
为0. 8%。结果表明 ,样品中的齐墩果酸和熊果酸在
24 h内稳定 ,可以满足实验要求。
2. 9　回收率试验　取已知含量(齐墩果酸0. 30%,熊
果酸0 . 15%)的木瓜粉末 5份 ,每份0. 25 g ,精密称定 ,
加入适量齐墩果酸和熊果酸对照品 ,按供试品溶液制
备项下的方法制备 ,在上述色谱条件下测定 ,木瓜中齐
墩果酸和熊果酸的回收率分别为99. 2%,97. 8%, RSD
分别为2. 2%(n=5), 1. 4%(n=5)。结果表明 ,方法
的回收率良好。
3　讨论
供试品溶液制备中 ,对甲醇 、95%乙醇和醋酸乙酯
等不同的提取溶剂进行对比 ,最后选择了甲醇为提取
溶剂 。对超声 、回流 、索氏提取等方法进行对比 ,结果
显示 ,回流的提取率较高 。
齐墩果酸和熊果酸的分子中仅存在一个双键 ,只
在 206 nm处有末端吸收 ,采用紫外检测器法进行检
测时 ,检测的灵敏度较低 ,基线不够理想 。蒸发光散射
检测器为通用型质量检测器 ,检测时流动相在检测器
内挥发成气体 ,样品组分形成气溶胶 ,进入检测室产生
响应 ,从而获得理想的基线和检测的灵敏度 ,克服了紫
外末端检测的不足。
参考文献:
[ 1] 　柳占彪 ,王鼎 ,王淑珍 ,等.齐墩果酸的降糖作用 [ J] . 中国药学杂
志 , 1994 , 29(12):725.
[ 2] 　S ohn KH , Lee HY , Chung HY , et al . An ti-angiogenic activity of
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[ 3] 　都述虎 ,饶金华 ,耿武松.薄层扫描法测定木瓜中齐墩果酸的含量
[ J] .中草药 , 2003 , 34(1):35.
[ 收稿日期] 2004-04-20
2005年全国医院药学(医院调剂质量研讨)学术会议征文通知
随着医院药学事业的发展 ,医院药学模式是以病人为中心由供应型向服务型转换 ,医院调剂为医院药学的重
要组成部分 ,医院调剂工作质量的好坏直接关系到医疗质量和合理用药水平。为适应新形势的需要 ,以人为本 ,
提高医院调剂质量 ,探讨医院调剂中的新经验 、新动向 ,更好地为病人服务 ,促进医院药学事业的发展 ,中国药学
会医院专业委员会拟在 2005年 9月主办以医院调剂质量研讨为主题的全国医院药学学术会议 。现向全国药学
各专业人员征文 ,有关内容如下。
1　征文内容
医院药学部门调剂室的配置及设施;医院药学部门调剂室的工作规程及操作规范;调剂人员的的配置 、上岗
资格标准及工作职责与服务规范;调剂室陈列药品的质量控制及调剂工作的微机化管理;调剂对配方的干预 、差
错的预防 、消除及处理;药物的配伍和药品不良反应的观察和处置;调剂中的药学咨询和在药学服务中的应用;调
剂配伍中合理用药判断标准的探讨及其他问题;其他医院药学的有关热点问题等均在本次征文范围内。
2　征文要求
未公开发表的论文均可作为本次会议的征文稿件 。全文控制在3 000字内 ,研究论文需附中 、英文摘要(书写
格式请按中国医院药学杂志投稿要求),综述不超过4 000字。所有征文超过1 000字者均需另附 800字左右的摘
要 ,附软盘 。论文截止日期:2005年 4月 30日 。论文请通过邮局寄至中国医院药学杂志编辑部 ,也可发电子邮
件 ,请注明作者详细联系地址和电话。地址:武汉市胜利街 155 号 ,邮政编码:430014 ,电话:027-82836596 , E-
mail:pharmacy @vip. 163. com 。请在信封和论文稿件及电子邮件上注明“会议征文”字样 ,以免同杂志正常稿件
混淆 。
3　说明
会议录用后均给第一作者发会议通知;会议将编辑论文集;会议设优秀论文一 、二 、三等奖;与会代表将获取
国家继续教育学分证书。会议地点待定 。
《中国医院药学杂志》编辑部
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