全 文 ：　　表 1 　JDT对急性毒性实验小鼠体重的影响( x±s, n=10)
组别 剂量(g/kg) 初始体重(mg)
给药后体重(mg)
第 1d 第 2d 第 3d 第 4d 第 5d 第 6d 第 7d
空白对照组 - 23.13±1.67 23.55±1.46 23.98±2.07 24.82±2.53 25.90±2.69 26.73±3.10 26.75±2.64 27.85±3.80
JDT20倍剂量组 234.0 22.85±0.63 22.83±1.58 21.62±2.13 22.62±3.02 23.82±3.53 24.22±3.94 24.82±4.32 25.88±4.71
JDT40倍剂量组 468.0 22.34±1.02 22.43±0.89 21.49±1.61 22.04±2.28 23.11±2.00 23.87±2.41 24.46±2.60 25.23±2.93
JDT80倍剂量组 976.0 23.05±1.43 22.36±0.96 22.04±0.72 22.65±0.97 24.37±1.14 24.81±1.64 26.14±2.17 26.77±2.88
　表 2 　JDT最大耐药量试验小鼠反应情况
组别 剂量(g/kg)四肢活动 体毛 饮水 粪便 尿液 死亡
空白对照组 - - - - - - 0
JDT20倍组 234.0 - - - - - 0
JDT40倍组 468.0 - - - - - 0
JDT80倍组 936.0 - - - - - 0
　　注:-代表正常
床用药量的 80倍 。表明本品安全性好 ,毒性很低。
参 考 文 献
[ 1] 陈奇 .中药药理实验方法学(第一版).北京:人民卫生
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[ 4] 张国恩 , 杨德华 ,钱玉中 , 等.痹康饮合剂急性毒性实验
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(2007-07-09收稿)
·制剂与质量·
齐墩果酸纳米囊体外释放研究
黄　义 1, 2 ,李　媛 1, 2 ,李新中 1, 2＊ ,刘　韶 1, 2 ,雷　鹏1, 2 ,肖　菁 1, 2
(1.中南大学湘雅医院 ,湖南长沙 410008;2.中南大学药学院 ,湖南长沙 410013)
　　摘要　目的:研究齐墩果酸纳米囊的体外释药规律。方法:采用动态透析技术研究齐墩果酸纳米囊的体外释
药性能 , 并用高效液相色谱法测定齐墩果酸含量 , 以累积释药百分率进行不同模型的拟合。结果:齐墩果酸纳米囊
的释放曲线符合 Weibull方程 , t1/2约为 20 h, 是齐墩果酸原料药的 6.7倍。结论:齐墩果酸纳米囊具有良好的缓释
作用。
关键词　齐墩果酸;纳米囊;体外释放
中图分类号:R286.02　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2008)02-0283-03
StudyontheReleaseofOleanolicAcidLoadedNanocapsulesinvitro
HUANGYi1 , 2 , LIYuan1, 2 , LIXin-zhong1 , 2 , LIUShao1 , 2 , LEIPeng1, 2 , XIAOJin1 , 2
(1.XiangyaHospital, CentralSouthUniversity, Changsha410008, China;2.SchoolofPharmaceuticalSciences, CentralSouthUni-
versity, Changsha410013, China)
Abstract　Objective:Tostudythereleaseofoleanolicacidloadednanocapsulesinvitro.Methods:Therulesofdrugreleasein
vitrofromoleanolicacidloadednanocapsuleswereobservedbydynamicpenetrationsystemandHPLC.Results:Theprofilecurveof
oleanolicacidloadednanocapsuleswasfitfortheWeibulequation.Thereleaset1/2 ofoleanolicacidloadednanocapsuleswasabout
6.7timesasthatoforiginaloleanolicacid.Conclusion:Oleanolicacidloadednanocapsuleshaveobviouslysustainedefect.
Keywords　Oleanolicacid;Nanocapsules;Releaseinvitro
基金项目:湖南省卫生厅资助项目(B2005-017)作者简介:黄义 ,女 ,硕士 ,主要从事天然药物制剂研究;E-mail:huangyihy2008@ 163.com。＊通讯作者:李新中 ,男 ,教授 ,博士生导师 ,主要从事中药新剂型开发;Tel:0731-4327454。
　　齐墩果酸(OA)为一种五环三萜类的中药活性
成分 ,具有抗肿瘤 、降血脂 、抗肝炎病毒等多种生物
活性 。临床上主要用于治疗急性黄疸型肝炎和慢性
病毒性肝炎。齐墩果酸为白色簇状针晶 ,不溶于水 ,
·283·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 2期 2008年 2月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2008.02.039
可溶于乙醇 、氯仿 、乙醚 、丙酮等。为了提高齐墩果
酸的肝靶向性 ,本研究以聚氰基丙烯酸正丁酯为囊
材制备了齐墩果酸纳米囊(OA-PBCA-NC),并建立
了成熟可靠的含量测定方法〔1〕。为预测齐墩果酸
纳米囊体内释药情况 ,本文对其体外释药规律进行
了研究 。
1 　仪器与材料
HP1100型高效液相色谱仪(包括 DAD检测器 、
Agilent工作站 ,安捷伦科技有限公司);RCZ-5A智
能药物溶出仪(天津大学精密仪器厂);Delta1320
型 pH计(Metler公司);AG285电子天平(梅特勒-
托利多仪器上海有限公司);透析袋(截流分子量
8000 ～ 15000,北京鼎国生物技术有限责任公司);
OA对照品(购自中国药品生物制品检定所);OA原
料(自制 ,纯度 >98%);OA-PBCA-NC混悬液(自
制);乙腈为色谱纯;其他试剂均为分析纯 。
2 　方法及结果
2.1 　OA含量测定方法
2.1.1　色谱条件:色谱柱为 DiamonsilTMC18柱(250
mm×4.6 mm, 5 μm);流动相为乙腈-0.05%磷酸
(92∶8);流速为 1ml/min;检测波长为 215 nm;柱温
为 30℃。理论塔板数按 OA计不低于 2000。
2.1.2　标准曲线的绘制:取 105℃干燥至恒重的
OA供试品适量 ,精密称定 ,用含 20%乙醇的磷酸盐
缓冲液(pH7.4)溶解并定容得 484μg/ml对照品储
备液。分别精密吸取 OA对照品储备液适量 ,以含
20%乙醇的磷酸盐缓冲液(pH7.4)稀释成浓度分
别为 242、161.3、96.8、48.4、24.2、9.68、1.61μg/ml
的系列溶液 ,进样 20 μl,在上述 HPLC条件下测定
OA的峰面积 。以 OA浓度 C(μg/ml)为横坐标 ,峰
面积 A为纵坐标 ,进行回归分析 ,求得线性回归方
程:A=8.0563C-8.3252, r=0.9995。表明 OA在
1.61 ～ 242μg/ml范围内线性关系良好 。
2.1.3　精密度试验:取 OA对照品溶液适量 ,重复
进样 5次 , 测定 OA峰面积 ,结果 RSD为 2.33%。
表明其仪器精密度良好。
2.1.4　稳定性试验:取同一批 OA供试品溶液适
量 ,分别在 0、2、4、8、16、24h进样 ,测定 OA峰面积 ,
结果 RSD为 2.54%。表明 OA溶液的在 24 h内稳
定 。
2.2　释放介质的选择　分别配制 OA在 pH7.4的
磷酸盐缓冲液(PBS)、0.5%十二烷基硫酸钠溶液
(SDS)、 0.1%吐温-80、含不同浓度乙醇 (10%、
20%)PBS(pH7.4)中的饱和溶液 40 ml,转入经蒸
馏水浸泡处理过的透析袋中 ,将透析袋两端扎紧 ,绑
于浆上 ,置于盛有 200 ml相应释放介质的溶出瓶
中 , 37℃恒温 , 50r/min恒速搅拌 。分别于 0.5、1、2、
4、8、16、24 h取样 , 0.45 μm微孔滤膜过滤 ,取续滤
液 ,得溶出液样品 ,同时补充相同体积的释放介质。
进样 ,测定 OA峰面积 ,并按标准曲线回归方程计算
OA浓度 ,得出累积释药分数〔2〕。在以 PBS、 0.5%
SDS、0.1%吐温-80、含 10%乙醇的 PBS为释放介质
的溶出液样品中 , 高效液相测不到 OA。而在含
20%乙醇的 PBS中 OA释放行为良好。
2.3　OA在释放介质中的稳定性 　精密称取 OA
原料药 4.0 mg,溶解于 200ml含 20%乙醇的 PBS,
置于溶出瓶中 , 37℃恒温 , 50 r/min恒速搅拌 。定时
取样 , 0.45 μm微孔滤膜过滤 ,取续滤液 ,得溶出液
样品 。进样 ,测定 OA峰面积 ,并按标准曲线回归方
程计算 OA浓度 ,得出降解百分率 。结果表明 , OA
在含 20%乙醇的 PBS中 59 h内的降解率仅为
2.14%,稳定性良好 。
2.4　OA-PBCA-NC的体外释放　取 OA-PBCA-NC
混悬液 20 ml(相当于 0A4.0 mg),与 20 ml释放介
质均匀混合后 ,转入经蒸馏水浸泡处理过的透析袋
中 ,将透析袋两端扎紧 ,绑于浆上 ,置于盛有 200 ml
释放介质的溶出瓶中 , 37℃恒温 , 50 r/min恒速搅
拌。定时取样 , 0.45 μm微孔滤膜过滤 ,取续滤液 ,
得溶出液样品 ,同时补充相同体积的释放介质。进
样 ,测定 OA峰面积 ,并按标准曲线回归方程计算
OA浓度 ,得出累积释药分数 ,并绘制释药曲线 。
精密称取 OA原料药 4.0 mg,加 40 ml含 20%
乙醇的 PBS溶解后按以上方法处理 。
2.5　体外释药数据处理　对药物的释放曲线 ,分
别用一级动力学方程 、Higuchi方程 、Ritger-Peppas
方程 、Hixon-crowel方程 、Weibul方程进行拟合 ,求
出符合该曲线的方程 〔3〕。拟合优度以 r2 、AIC值进
行综合判断。
OA-PBCA-NC与 OA原料药释药分数拟合方程
分别见表 1、2。 OA原料药与 OA-PBCA-NC体外释
药主要参数比较见表 3。
结果表明 , OA-PBCA-NC的体外释药符合
Weibul模型 , OA原料药的体外释放符合一级动力
学模型。 OA-PBCA-NC达平衡时间是 OA原料药的
6.7倍 ,半衰期是 OA原料药的 6.7倍 。经 t检验 ,
OA-PBCA-NC与 OA原料药的体外释药存在显著差
异(P<0.05)。说明 OA-PBCA-NC有良好的缓释作
用。
3　讨论
体外释放实验可初步确定OA-PBCA-NC是否
·284· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 2期 2008年 2月
　　表 1 　OA-PBCA-NC的体外释放累积释药分数的拟合方程
类型 拟合方程 r2 AIC
一级动力学方程 Ln(1-Qt)=-0.0407t-0.3464 0.8830 -14.7
Higuchi方程 Qt=0.1238t1/2 +0.1138 0.8990 -17.3
Ritger-Peppas方程 LnQt=0.4523Lnt-1.6811 0.9364 3.4
Hixon-crowell方程 Qt=-0.0004t3 +0.0146t2 -0.1705t+0.7228 0.8438 31.3
Weibull方程 lg(-Ln(1-Qt))=0.66171gt-0.706 0.9850 -48.3
　　表 2 　OA原料药体外释放累积释药分数的拟合方程
类型 拟合方程 r2 AIC
一级动力学方程 Ln(1-Qt)=-1.4763t+0.5442 0.9964 -32.3
Higuchi方程 Qt=0.502t1/2 +0.025 0.9217 -18.3
Ritger-Peppas方程 LnQt=0.5425Lnt-0.683 0.9040 -29.2
Hixon-crowell方程 Qt=0.0116t3 -0.1603t2 +0.7116t-0.0083 0.9258 -25.3
Weibull方程 lg(-Ln(1-Qt))=0.7521lgt+0.0478 0.9948 -10.2
　表 3　　　　　OA-PBCA-NC与 OA原料
药的体外释药主要参数比较
样品 达平衡时间(h) t1/2(h)
OA原料药 3 0.9
OA-PBCA-NC 20 6
具有缓释作用 ,其中筛选合适的释放介质是关键问
题且必须满足漏槽条件。在以 PBS(pH7.4)、0.5%
SDS、0.1%吐温 -80、含 10%乙醇的 PBS(pH7.4)为
释放介质的溶出液样品中 ,高效液相测不到 OA,分
析其原因可能为药物在释放介质中的溶解度过低 ,
OA溶液的浓度达不到高效液相的检测要求 。而当
PBS中所加乙醇含量大于 20%时 , OA溶解性能大
大改善 ,且满足在漏槽条件下溶出液样品的测定要
求 ,与文献报道 〔3〕一致 ,故本实验最终采用 20%乙
醇的 PBS作为释放介质 。
有文献 〔4〕归纳了体外释药的主要方法 ,如膜扩
散技术法 、样品分离法 、连续流动法 、反向透析技术
等 。在本实验中 , OA-PBCA-NC的载药量不大 ,少量
释放介质即可满足漏槽条件 ,为了便于操作 ,故仍决
定采用经典的动态透析技术 ,并取得了较好的结果。
本次体外释药研究表明 , OA原料药在含 20%
乙醇的 PBS(pH7.4)中迅速释放 ,而 OA-PBCA-NC
具有良好的缓释作用。 OA-PBCA-NC释放度的测定
结果基本上反映出药物从 OA-PBCA-NC释放到介
质中的整个过程 ,为进一步研究 OA-PBCA-NC的体
内释放提供参考。
参 考 文 献
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(2007-07-16收稿)
《中药材 》杂志为美国 IM/Medline收录期刊 。
·285·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 2期 2008年 2月