全 文 ：g, 分别定量加入芦丁对照品 500. 8μg, 按供试品溶液制备方法制
备 , 依法测定 , 测定峰面积计算回收率 , 结果平均回收率为
98. 62%, RSD =1. 75%。
2. 9　样品测定 收集不同产地 、不同采集期的桑叶 ,测定不同产
地 、不同采集期药材中芸香苷的含量。结果见表 1。
表 1　不同产地、不同地区采集期桑叶中芸香苷的含量
产地 采集期 得膏率(%) 含量 C /mg g-1
湖北 夏季 58. 10 1. 956
湖北 秋季 52. 85 2. 021
广西 夏季 47. 73 3. 264
广西 秋季 48. 86 4. 379
河南 夏季 31. 59 2. 103
河南 秋季 36. 15 2. 958
3　讨论
不同产地桑叶中芸香苷的含量不同 ,同一产地不同采集期含
量也不同 ,实验证明在相同产地 , 秋季采集的桑叶中芸香苷有含
量高;不同产地 ,在广西在秋季采集的桑叶中芸香苷含量最高 , 可
为临床安全用药提供参考。
参考文献:
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455.
收稿日期:2005-04-28;　修订日期:2005-12-25
作者简介:邹盛勤(1970-),男(汉族),江西奉新人 ,现任宜昌学院生物工
程研究所副教授 ,学士学位 ,主要从事从事有机化工和生物医药研究工
作.
高效液相色谱-光电二极管阵列检测器法测定齐墩果酸
原料及片剂中齐墩果酸的含量
邹盛勤
(宜春学院生物工程研究所 ,江西省天然活性成分研究重点实验室 ,江西 宜春　336000)
摘要:目的 建立齐墩果酸原料及片剂中齐墩果酸含量的测定及齐墩果酸紫外光谱鉴定方法。方法 运用高效液相色谱-
光电二极管阵列检测器法。色谱柱为 Nova-Pak C18,流动相为乙睛-水(65∶35), 流速 0. 8 m l /m in, 检测波长 210 nm , 柱温
25℃。结果 齐墩果酸在 3. 48 ～ 17. 4 μg范围内线性关系良好( r=0. 999 9), 检出限为 0. 3 mg /L (3σ), 平均回收率为
99. 5%。结论 该方法简便 , 准确 ,线性范围宽 ,重现性好 , 适于对含有该成分的药物进行质量评价。
关键词:　齐墩果酸;　光电二极管阵列检测器;　高效液相色谱;　含量测定
中图分类号:R282. 5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2006)03-0357-02
Determ ination ofO leanolic Acid inM ater ialand O leanolic Acid Troches by HPLC-PAD
ZOU Sheng-qin
(B ioengineering Research Institute of Y ichum University , The Provincia lKey Laboratory for Research on Active
Ingrecd ien ts in NaturalMedicines, Y ichun , J iangx i 336000, China)
Abstract:Objective A de te rm ina tion m ethod of o leanolic acid in m ateria l and o leano lic acid troche s by reversed - phase h igh
perform ance liqu id chrom atog raph w as estab lished and the purity of o leano lic acid w as de tected by m eans of Pho tod iodeA rray De-
tector.M ethods The chrom atograph ic co lumn, Nova - Pak C18(3. 9 mm ×150 mm , 5 μm), e thanenitrile -wa ter (65:35, V /
V) m obile phase w ith 0. 8 m l /m in flow ra te, the de tec ted w aveleng th(210 nm), and the co lum n temperature(25℃) we re adop t-
ed. R esu lts The ca libra tion curve o f o leano lic ac id wa s linear unde r the conten t of 3. 48 ～ 17. 40 μg, the co rre la tion coefficient
w as over 0. 999 9, the de tec ted lim it was 0. 3 m g /L (3σ). The ave rage recove ry o f oleano lic acid w as 99. 5%. C onc lusion The
m ethod is sim ple, accura te and ha s w ider linea r range. The m ethod can be adap ted to evalua te the quality o f m edicinal plan ts
wh ich contain o leano lic acid.
Key words:O leano lic ac id;　PAD;　RP -HPLC;　Conten t dete rm ina tion
　　齐墩果酸(o leano li cac id, OLA)别名土当归酸 , 以游离体和配
糖体的形式存在于龙胆科青叶胆 、木樨科女贞子 、五加科楤木等
多种植物中药中 , 并已证实具有消炎 , 强心利尿 , 抑制 S-180瘤株
生长 , 促进免疫 , 抗肝损伤等广泛的临床药理作用 [ 1 , 2] 。其片剂
是治疗肝炎的药物之一 ,对急性黄疸型肝炎和慢性病毒性肝炎疗
效显著 , 可使升高的血清丙氨酸氨基转移酶下降 , 促进肝细胞再
生 , 加速坏死组织的修复 , 主要用于护肝 、抗炎 、强心等 , 疗效确
切 , 且毒性低 , 副作用少 , 临床使用安全 [ 3] 。齐墩果酸片含量测
定部颁标准为酸碱滴定法 [ 4] ,终点不易掌握 ,结果准确性受到影
响。本研究建立了反相高效液相色谱法对齐墩果酸原料及片剂
中的齐墩果酸含量进行检测。
1　仪器与试药
1. 1　仪器 W ate rs高效液相色谱仪 , 515型泵 , 2996光电二极管
阵列检测器(PAD), Em pow er中文色谱工作站(美国 );FC204分
析天平 (上海天平分析仪器厂 );UPWS-I-10T高纯水机 (杭州永
洁达膜分离设备厂)。
1. 2　试药 乙腈 , 色谱纯(Bu rdick＆Jackson);水为高纯水;齐墩果
酸原料 (淡黄色粉末 , 西安山川生物科技有限公司 , 批号:
20020715, 20030116);齐墩果酸片(四川康复来制药有限公司 , 每
片标示含量 20m g,批号:021101, 020402, 030501, 030803);齐墩果
酸对照品(批号:110709-200311,供含量测定用)。
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LISH IZHEN M EDIC INE AND MATER IA MED ICA RESEARCH 2006 VOL. 17 NO. 3 时珍国医国药 2006年第 17卷第 3期
2　实验方法
2. 1　色谱条件 Nova-Pak C18色谱柱(3. 9 mm ×150 mm , 4μm),
流动相为乙睛 -水 (65∶ 35), 流速 0. 8 m l /m in, 检测波长 210
nm , 柱温 25℃,外标法定量分析。齐墩果酸对照品 HPLC谱图见
图 1。
图 1　齐墩果酸对照品 HPLC谱图
2. 2　溶液的制备
2. 2. 1　对照品溶液 精确称取齐墩果酸对照品 8. 7 m g, 置于 10
m l容量瓶中 , 用甲醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀 , 制成含齐墩果酸
0. 87 mg /m l的对照品溶液。
2. 2. 2　样品溶液 精密称取齐墩果酸原料 8. 2 m g,置于 10 m l容
量瓶中 , 溶解后用甲醇定容 , 摇匀;取齐墩果酸片 10片 , 精密称
定 , 在玛瑙研钵中充分研磨 ,精确称取样品 28. 6 m g,置于 10 h容
量瓶中 , 加入 9 m l甲醇 ,超声提取 1. 0 h, 用甲醇定容 , 摇匀。离
心后经 0. 45 μm微孔滤膜过滤 ,得样品溶液。
2. 3　线性关系实验 用微量注射器分别吸取齐墩果酸对照品溶
液 4, 8, 12, 16, 20μl依次进样 , 平行 3次 ,测定齐墩果酸峰面积。
以进样量(μg)对峰面积平均值进行线性回归 , 得齐墩果酸回归
方程为:Y =5. 17×105X +2. 74×104 , r=0. 999 9, 表明当齐墩果
酸进样量在 3. 48～ 17. 40 μg之间时 , 呈良好的线性关系。
2. 4　精密度实验 精密吸取齐墩果酸对照品溶液 10 μl进样 ,重
复 5次 , 测得齐墩果酸峰面积 RSD为 0. 2%(n =5), 仪器精密度
良好。
2. 5　重现性实验 精密称取同一批齐墩果酸样品 5份 , 按 2. 2项
下方法制备样品溶液 , 吸取 10 μl进样分析 , 测得齐墩果酸峰面
积 RSD 为 0. 9 %(n =5),方法重现性好。
2. 6　稳定性实验 精密吸取齐墩果酸样品 10μl进样分析 , 然后
分别于 0. 5, 1, 2, 4, 8, 16, 32, 48 h时重复一次。 测得齐墩果酸峰
面积的 RSD 为 0. 6 %(n=5),表明齐墩果酸样品溶液在 48 h内
稳定。
2. 7　加样回收率实验 准确称取齐墩果酸含量已知的样品 5
份 , 分别加入适量齐墩果酸对照品 , 按 2. 2项下方法配制样品溶
液 , 进行齐墩果酸含量分析 ,进样量 10 μl, 测得齐墩果酸平均回
收率为 99. 5 %, RSD 为 1. 7 %。
2. 8　样品中齐墩果酸含量测定 取 2批次齐墩果酸原料和 4批
次齐墩果酸片样品 , 按 2. 2项下方法配制样品溶液 ,用微量注射
器各吸取 10 μl样品溶液进样分析 ,重复进样 5次 , 测定样品中
齐墩果酸含量。齐墩果酸样品 HPLC谱图见图 2, 含量结果见表
1。
a-齐墩果酸原料　　 b-齐墩果酸片样品
图 2　齐墩果酸样品 HPLC谱图
表 1　齐墩果酸加样回收率结果
样品量
m /mg
样品含量
m /mg
对照品加入量
m /mg
测得量
m /mg
回收率
(%)
平均值
(%)
RSD
(%)
14. 5 3. 55 3. 20 6. 74 99. 7
14. 2 3. 48 3. 20 6. 70 100. 6
14. 7 3. 60 3. 20 6. 76 98. 8 99. 5 1. 7
14. 5 3. 55 3. 20 6. 73 99. 4
14. 9 3. 65 3. 20 6. 82 99. 1
　　n =5
表 2　样品中齐墩果酸含量
样品 批号 齐墩果酸平均含量 RSD(%)
原料 20020715 81. 5 % 0. 2
20030116 82. 5 % 0. 6
片剂 020402 19. 8 mg* 0. 6
021101 20. 5 mg* 0. 3
305010 19. 6 mg* 0. 4
030803 19. 4 mg* 0. 5
　　*为每片中含量;n=5
3　讨论
3. 1　色谱条件的确定 采用乙睛 -水 (65∶35)为流动相 , 配比
简单 ,基线平稳 , 出峰时间在 7. 4 m in左右(柱温 25℃), 且分离度
好 , 达基线分离 , 其它成分无干扰。
3. 2　检测波长的确定 取齐墩果酸对照品溶液进样 , 在 190 ～
500 nm波长范围进行光谱扫描 ,其最大吸收波长为 203. 4 nm(图
2), 但流动相在短波长处有末端吸收 , 为了减少干扰 , 提高信噪
比 , 提取不同波长的色谱图进行比较 , 选择 210 nm为检测波长信
噪比高 ,峰形好。
3. 3　峰纯度检测 在齐墩果酸对照品色谱图中色谱峰顶点 、起始
点和终止点分别进行光谱采集 ,经归一化及光谱叠加得图 3, 光
谱图中 3点光谱曲线完全重合 ,且经 Em pow er软件系统适应性分
析峰纯度 ,齐墩果酸色谱峰为单一组分吸收峰 [ 3] 。
图 3　齐墩果酸样品的紫外吸收光谱
3. 4　提取时间的确定 在适量齐墩果酸片粉末中加入 10 m l甲
醇 , 分别超声提取 0. 5, 1. 0, 1. 5, 2. 0, 2. 5 h,测定提取液中齐墩果
酸含量 , 1. 0 h后 ,随提取时间的延长 ,提取液中齐墩果酸含量基
本不变 , 且与片剂的标示量一致 , 表明样品中齐墩果酸已提取完
全 , 确定提取时间为 1. 0 h。
3. 5　含量测定方法的建立 采用 HPLC法 , 以外标法测定齐墩果
酸原料及片剂中齐墩果酸的含量 , 方法简便 、快速 , 线性范围宽 ,
准确度好 ,精密度高 , 可用于检测控制齐墩果酸原料及其制剂的
质量。
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时珍国医国药 2006年第 17卷第 3期 LISH IZHEN MED IC INE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2006 VOL. 17 NO. 3