全 文 ：醇酮的过程 〔5〕。在高血压等病理状态时 ,心脏合成
和分泌过量的醛固酮 ,通过基因组效应调控钠通道
蛋白 、Na+-K+-ATP酶及胶原蛋白等蛋白质的合成 ,
刺激细胞生长及胶原重塑 ,导致心肌肥厚和心肌纤
维化〔6〕。因此 ,调控心脏局部醛固酮的生物合成 ,
对高血压左室肥厚的防治具有重要意义。本实验通
过观察葶苈子水提液对 CYP11B1、CYP11B2基因表
达的影响 ,进一步研究葶苈子水提液抑制醛固酮合
成的可能机制。实验结果发现 ,经葶苈子水提液治
疗后大鼠心肌醛固酮合成基因 CYP11B1、CYP11B2
mRNA表达水平均有降低 ,故推测葶苈子可能通过
直接下调醛固酮合成相关基因的表达 ,抑制心脏局
部醛固酮的生物合成而抗心室重构。
TGF-β1是成纤维细胞的强趋化因子 ,直接刺激
其细胞外基质蛋白的合成 〔7〕 ,抑制胶原降解 ,促进
心肌肥大 、心肌细胞表型改变 、传导组织表达 ,从而
在心肌纤维化过程中起重要的作用。葶苈子 8 g/kg
组具有显著降低 TGF-β1 表达量的作用 ,该作用也
许与葶苈子降低心肌胶原含量 ,抑制心肌肥厚有关 。
总之 ,本研究提示 ,在压力负荷增加所致的心室
重构中 ,葶苈子水提液可能通过下调心肌醛固酮合
成相关基因 CYP11B2、CYP11B1及 TGF-β1 mRNA
的表达水平 ,抑制心脏局部醛固酮及 TGF-β1的生
物合成而发挥其抗心室重构肥厚的作用 。
参 考 文 献
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(2008-03-10收稿)
作者简介:杨蕊 ,女 ,药剂学专业在读硕士研究生;Tel:0531-89268186, E-mail:yxyyr@163.com。＊通讯作者:苏乐群 ,男 ,主任药师 ,药剂学教授 ,硕士研究生导师;Tel:0531-82968900转 8366, E-mail:sulcqun@medmail.com.cn。
齐墩果酸自微乳大鼠在体胃肠道吸收动力学研究
杨　蕊 1 ,苏乐群2＊ ,黄　欣 2
(1.山东大学药学院 ,山东济南 250012;2.山东省千佛山医院药剂科 ,山东济南 250014)
　　摘要　目的:研究齐墩果酸自微乳在大鼠胃肠道的吸收动力学特征。方法:采用大鼠在体胃肠道吸收实验 ,高
效液相色谱法测定药物浓度 ,根据药物在胃肠道中的减少量来确定药物的吸收。结果:在大鼠胃部 ,齐墩果酸微乳
2h的吸收百分率为 10.15%;在小肠中齐墩果酸微乳与胶束的吸收速率常数分别为 0.0901/h和 0.0486/h, 肠道最
佳吸收部位依次为十二指肠 、回肠 、空肠和结肠。结论:自微乳给药系统对齐墩果酸在大鼠胃肠道的吸收有明显的
促进作用 , 显著提高了齐墩果酸的生物利用度。
关键词　齐墩果酸;自微乳化;在体胃肠吸收
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4445(2008)11-1695-04
TheAbsorptionKineticsofOleanolicAcidSelf-microemulsion
inRatStomachandIntestine
YANGRui1 , SULe-qun2 , HUANGXin2
(1.ColegeofPharmacy, ShandongUniversity, Jinan250012, China;2.PharmacyDepartment, ShandongProvincialQianfoshanHospi-
tal, Jinan250014, China)
Abstract　Objective:Tostudytheabsorptionkineticsofoleanolicacidself-microemulsioninratstomachandintestine.Methods:
·1695·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 11期 2008年 11月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2008.11.047
Theabsorptionkineticswereobtainedbyusingtheinsituperfusionmethodinrat.Theabsorptionofdrugwasdeterminatedbythede-
creaseinstomachandintestinewiththeHPLCasthedetectionmethod.Results:Theabsorptionpercentofoleanolicacidmicroemulsion
for2 hourswas10.15% instomach;Theabsorptionrateconstantsofoleanolicacidmicroemulsionandmicellewere0.0901/hand
0.0486/hinsmalintestine, respectively;Thebestabsorptionsegmentinintestinewasduodenum, ileum, jejunumandcolonby
turns.Conclusion:Theoleanolicacidself-microemulsifyingsystemsignificantlyenhancestheabsorptionofoleanolicacidinthegastroin-
testinaltractandimprovesitsbioavailability.
Keywords　Oleanolicacid;Self-microemulsion;Gastrointestinalinsitu
　　齐墩果酸(oleanolicacid)是五环三萜类化合
物 ,广泛分布于青叶胆 、女贞子等植物中 ,其毒性很
低 ,具有多种生物活性如抗病毒 、抗胃溃疡 、抗癌 、免
疫双向调节 、抑制血小板凝集 、降血脂 、降糖 、保肝 、
护肾 、抗心肌缺血 、抗艾滋病毒等 〔1-3〕。临床上主要
用于治疗急性黄疸型和慢性中毒型肝炎 ,疗效肯定 。
近年来也将其作为抗肿瘤辅助药物用于临床。然而
齐墩果酸在水中几乎不溶 ,口服生物利用度很低 ,大
鼠口服生物利用度仅为 0.7%〔4〕。
自微乳给药系统(SMEDDS)是一种包含油相 、
表面活性剂及助表面活性剂的固体剂型或液体剂
型 ,可作为疏水性 、难吸收或易水解药物的载体 ,显
著提高其生物利用度〔5, 6〕。本研究制备了齐墩果酸
自微乳浓缩液 ,采用大鼠在体灌流的方法考察齐墩
果酸微乳的胃肠道吸收情况 ,并对齐墩果酸微乳的
最佳吸收部位和吸收机制进行探讨。
1 　材料与仪器
1.1 　仪器　RCTbisic可控温电磁搅拌器(KIKA
WERKE);JA2003电子天平 (上海天平仪器厂);
JEM-100CXⅡ透射电镜(日本电子公司);激光粒度
分析仪(英国 Malvern公司);BT00-100M型蠕动泵
(保定兰格恒流泵有限公司);UV-2102PCS型紫外
分光光度计 (尤尼柯仪器有限公司);515型 HPLC
泵(美国 Waters公司), MODEL500型 LabAliance
检测器(美国 SSI公司);ANASTAR数据处理系统
(美国 SUNTEK公司)。
1.2 　试剂与材料　齐墩果酸 ,江苏南京青泽医药
科技有限公司;聚氧乙烯蓖麻油 , CremophorEL,美
国 FLUKA公司;油酸乙酯 ,上海化学试剂公司;乙
醇 ,天津市永大化学试剂开发中心;其他试剂均为分
析纯。
1.3 　实验动物　雄性健康 SD大鼠 ,体重 (220 ±
10)g,由山东大学实验动物中心提供。
2 　方法与结果
2.1 　齐墩果酸自微乳与胶束的制备　称取 Cremo-
phorEL45 g,乙醇 40g,油酸乙酯 15 g,搅拌混合均
匀 ,加入 1g齐墩果酸 ,溶解得齐墩果酸自微乳化浓
缩液。称取 CremophorEL45g,乙醇 40g,搅拌混合
均匀 ,加入 0.9 g齐墩果酸 ,溶解得齐墩果酸胶束溶
液。
2.2　形态学与粒径分布　将齐墩果酸自微乳化浓
缩液溶于适量蒸馏水 ,得澄清透明的微乳液。将齐
墩果酸微乳液滴在铜网上 ,用 2%的磷钨酸 (pH=
4.47)负染色 ,晾干后电镜观察 。结果表明微乳在
透射电镜下均呈球形或近球形;粒径分析仪测定其
平均粒径为 49.8nm。
2.3　肠循环液中含量测定方法及方法学考察
2.3.1 　色谱条件:色谱柱 Phenomenex柱(250 mm
×4.6mm, 5μm);流动相:乙腈 -水 -冰醋酸(95∶5∶
0.2);流速:1.0 ml/min;检测波长:210 nm;柱温:
35℃;进样量:20μl。在此条件下 ,理论塔板数以齐
墩果酸计不低于 4000,分离度符合要求 。
2.3.2 　方法学考察:精密称取齐墩果酸对照品 16
mg,置 25ml量瓶中 ,甲醇溶解定容制成 640 μg/ml
的贮备液 ,精密量取贮备液适量于 10ml量瓶中 ,用
空白 K-R营养液释至刻度 ,配成 16、32、64、128、320
μg/ml的系列浓度标准液 。分别进样测定 ,以峰面
积 A对浓度 C进行线性回归 ,得线性方程为 A=
5789C+1769, r=0.9999,表明齐墩果酸在 16 ～ 320
μg/ml范围内与峰面积线性关系良好 。测得高 、中 、
低 3个浓度对照品溶液的日内 RSD分别为 0.38%、
0.29%、0.55%,日间 RSD分别为 0.61%、0.36%、
0.60% (n=3);方法回收率分别 为 98.8%、
100.5%、 99.2%, RSD分 别为 0.37%、 0.29%、
0.35%(n=3)。
2.4　胃循环液中含量测定方法及方法学考察
2.4.1 　测定方法:色谱条件见 “2.3.1”项。
2.4.2 　方法学考察:精密称取齐墩果酸对照品 16
mg置 25 ml量瓶中 ,甲醇溶解定容制成 640 μg/ml
的贮备液 ,精密量取贮备液适量于 10ml量瓶中 ,用
人工胃液稀释至刻度 ,配成 16、32、64、128、320 μg/
ml的系列浓度标准液 。分别进样测定 ,以峰面积 A
对浓度 C进行线性回归 ,得线性方程为 A=5815C
+2037, r=0.9998,表明齐墩果酸在 16 ～ 320 μg/ml
范围内与峰面积线性关系良好 。测得高 、中 、低 3个
浓度对照品溶液的日内 RSD分别为 0.48%、
·1696· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 11期 2008年 11月
0.33%、0.41%,日间 RSD分别为 0.59%、0.63%、
0.54%(n=3);方法回收率分别为 100.2%、
98.5%、 99.7%, RSD分 别 为 0.36%、 0.24%、
0.43%(n=3)。
2.5 　大鼠在体药物吸收的研究
2.5.1　供试液的配制:精密称取齐墩果酸自微乳
或胶束液适量 ,用 K-R营养液稀释成含 110 μg/ml
齐墩果酸的肠循环液 ,临用前配制。精密称取齐墩
果酸自微乳液适量 ,用人工胃液稀释成含 110 μg/
ml齐墩果酸的胃灌注液 ,临用前配制。
2.5.2　齐墩果酸在空白胃肠液中的稳定性 〔7〕:取
一定量 K-R营养液 ,按照大鼠在体肠循环的实验方
法 ,回流 6h得空白肠循环液。用空白肠循环液配制
成浓度为 110 μg/ml齐墩果酸的微乳溶液 , 37℃恒
温水浴中孵育 6h,分别测定 0、2、4、6h的药物浓度 。
齐墩果酸在肠循环液中的浓度没有明显变化 ,故认
为齐墩果酸在空白肠循环液中稳定。取一定量人工
胃液 ,按照大鼠在体胃吸收的实验方法 ,孵育 2h得
空白胃灌注液。用空白胃灌注液配制成浓度为 110
μg/ml齐墩果酸的微乳溶液 , 37℃恒温水浴孵育 2
h,分别测定 0、1、2 h的药物浓度 。齐墩果酸在胃灌
注液中的浓度没有明显变化 ,故认为齐墩果酸在空
白胃灌注液中稳定。
2.5.3　胃肠道的吸附 、代谢和摄取的考察 〔8〕:剪取
大鼠小肠 ,剖开洗净 ,置肠循环液中 , 37℃水浴孵育
6 h,测定孵育前后齐墩果酸的浓度 ,孵育后的剩余
百分比为 97.2%。剪取大鼠胃 ,剖开洗净 ,置胃灌
注液中 , 37℃水浴孵育 2 h,测定孵育前后齐墩果酸
的浓度 ,孵育后的剩余百分比为 98.8%。因此可认
为大鼠胃肠道壁对齐墩果酸无显著物理吸附 、代谢
和摄取 。
2.5.4 　体积误差的考察〔9〕:取 K-R营养液 100
ml,按照大鼠在体肠循环的实验方法 ,回流 ,分别于
2、4、6 h停止后 ,用气体将回路中的液体全部排净 ,
将实际体积与直接读取的体积进行比较。结果表明
大鼠在体肠循环 2、4、6 h后 ,直接读取的体积与实
际体积相差不超过 2 ml,即误差均小于 2%,故可用
该方法直接确定循环过程中药液的体积。
2.5.5　大鼠在体小肠吸收实验 〔7〕:雄性大鼠禁食
不禁水 12 h后 ,腹腔注射 1%戊巴比妥钠(0.4 ml/
100g)麻醉并固定 。沿腹中线打开腹腔约 3 cm,自
十二指肠上部及回肠下部各插入直径为 0.5 cm的
玻璃管 ,用线扎紧 ,用 37℃生理盐水将小肠内容物
冲洗干净 ,将两玻璃管与恒流泵连接 。取 100 ml小
肠循环液置于 100 ml量筒中 ,恒温(37±0.5)℃,打
开蠕动泵 ,以 5 ml/min的流速循环 ,待药液充满整
个回路 ,记录量筒中减少的药液体积 ,作为回路中药
液体积 , 10分钟后调速至 2.5 ml/min,自烧杯中取
样 1 ml为 0h样品 ,记录量筒中药液体积 ,补加 1 ml
K-R营养液 ,后于 0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、5、
6h取样 1ml并记录量筒中药液体积 ,同时补加 1 ml
K-R营养液 。各样液用甲醇稀释适当倍数后 ,测定
药物浓度 ,计算各时间点的剩余药量(X剩余)。以
X剩余值的对数和取样时间 t作图(如图 1)。利用
公式 lnX剩余 =lnX0 -Ka×t,求出表观吸收速率常
数 Ka,吸收半衰期 t1 /2。结果:齐墩果酸微乳液和齐
墩果酸胶束液在大鼠小肠的 Ka分别为 0.0901 /h和
0.0486/h, t1/2分别 7.69h和 14.27h,相关系数分别
为 0.9796和 0.9696。二者的 Ka、t1/2值均存在显著
性差异(P<0.01),齐墩果酸微乳液的吸收速率大
于齐墩果酸胶束溶液。
图 1　大鼠小肠在体吸收曲线(n=5)
2.5.6 　大鼠在体胃吸收实验 〔10〕:雄性大鼠禁食 12
h,可自由饮水。腹腔注射 1%戊巴比妥钠(0.4 ml/
100 g)麻醉并固定。沿腹中线打开腹腔约 3 cm,暴
露胃 ,将贲门结扎 ,用玻璃管插入幽门结扎之后 ,用
生理盐水将胃腔洗净。注射器吸取胃灌注液 10 ml,
注射 4 ml到胃内 ,然后又抽回到注射器重复几次 ,
使混合均匀 ,最后全部抽入注射器内 ,将 4ml上述混
合均匀的药液注入胃内 。注射器内留下的药液浓度
为药物初始浓度 , 2 h后从胃抽出药液的浓度为药
物终浓度 ,根据齐墩果酸初始浓度和终浓度之差计
·1697·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 11期 2008年 11月
算其吸收率 。结果表明 2h后胃中齐墩果酸吸收百
分率平均值为(10.15±0.94)%(n=5),说明药物
在胃中吸收较少 。
2.5.7　大鼠小肠最佳吸收部位研究 〔11〕:选择所需
要考察的肠段 ,进行结扎。十二指肠段自幽门 1 cm
处开始 ,空肠段离幽门 15cm处开始 ,回肠段距离盲
肠 20cm处开始 ,结肠段为紧邻盲肠段至直肠 ,各段
均取 10 cm左右。在各肠段两端剪切后插管 ,结扎 ,
用少量 37℃的生理盐水冲洗肠段。然后用小肠循
环液 25 ml回流 2 h,流速 2.5 ml/min。结束后 ,将
所得回流液移入 100ml容量瓶中 ,另用 K-R营养液
冲洗肠道 ,冲洗液并入容量瓶 ,用 K-R营养液定容 ,
混匀 ,过滤 ,弃去初滤液 ,取续滤液用甲醇稀释适当
倍数后测定浓度 。齐墩果酸微乳在大鼠不同肠段回
流 2 h的吸收结果显示齐墩果酸微乳在整个小肠段
都有吸收 ,十二指肠 、空肠 、回肠 、结肠的吸收百分率
分别为 (27.52 ±1.90)%、 (16.81 ±1.37)%、
(18.83±1.18)%、(9.69±1.42)%,可见十二指肠
为齐墩果酸微乳的主要吸收部位 ,结肠吸收少(如
图 2)。
图 2　各肠段对齐墩果酸微乳的吸收百分率(n=5)
3 　讨论
3.1 　大鼠在体肠循环实验的供试液中常加入酚
红 ,通常认为酚红为一离子型化合物 ,在胃肠道中不
被吸收 ,因此广泛采用酚红浓度的变化来标示不同
时刻回流液的体积变化 〔12〕 ,从而计算出剩余药量 。
但文献报道 〔13〕酚红能从小肠吸收 ,平均吸收速率约
为 6%/h。故本实验采用直接读取体积的方法来标
示循环液的体积变化 ,误差小于 2%。
3.2 　大鼠在体肠循环实验中 ,由微乳与胶束的表
观吸收速率常数可知微乳能更好的促进药物的吸
收 。这可能是由于纳米乳剂的粘附性可使乳滴较长
时间地与胃肠道粘膜紧密接触 ,从而增加药物在胃
肠道粘膜的跨膜转运 。另外 ,与胶束相比 ,微乳对胃
肠道黏膜的刺激性低 ,这些均显示了微乳制剂作为
齐墩果酸载体的优越性 ,但其体内药物动力学需要
进一步的研究 。
3.3　齐墩果酸微乳在十二指肠吸收较多 ,可能是
由于该肠段的绒毛较多 ,可将微乳液滴截留 ,延长液
滴的滞留时间 ,增加吸收量。同时回肠中具有丰富
的集合淋巴结(PP),微乳制剂可通过小肠壁集合淋
巴结中的 M细胞转运吸收 ,因此齐墩果酸微乳可选
择性趋向于 PP表面 ,通过 M细胞转运吸收 ,故回肠
段对微乳也有一定吸收 。
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