全 文 ：三叶青乙酸乙酯提取物对小鼠 Lewis肺癌移植性
肿瘤的抑制作用及免疫功能的影响
李华美1 浦锦宝2 郑军献2 魏克民2
(1浙江大学医学院附属儿童医院·杭州 310003 2浙江省中医药研究院·杭州 310007)
摘 要 目的:观察三叶青乙酸乙酯提取物对小鼠 Lewis肺癌移植瘤的抑制作用及免疫功能的影响。方
法:采用动物移植性肿瘤实验法腋下接种 Lewis肺癌细胞制备小鼠荷瘤模型。观察三叶青乙酸乙酯提取
物高、中、低剂量对瘤重、抑瘤率、脾指数、胸腺指数的影响，ELISA法检测血清中细胞因子 IL － 2、IFN － γ、
TNF － α含量。结果:三叶青各剂量组瘤重均低于模型组(P ＜ 0. 05 或 P ＜ 0. 01) ，并呈剂量依赖性;高、中
剂量组脾指数、胸腺指数较模型组增高，差异具显著性(P ＜ 0. 05) ;三叶青高、中剂量组 IFN － γ、TNF － α
含量高于模型对照组，差异具显著性(P ＜ 0. 05)。结论:中药三叶青乙酸乙酯提取物具有抑制 Lewis肺癌
移植瘤作用，且能保护实验动物的细胞免疫器官，提高免疫功能。
主题词 肺肿瘤 /中医药疗法 三叶青提取物 /治疗应用 小鼠
三叶青［1］(Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg)属葡
萄科崖爬藤属植物，主要分布于长江以南各地，生于阴湿山
坡、山沟或溪谷旁林下，以块根或全草入药。具有清热解毒、
祛风化痰、活血止痛的功效。临床多用于治疗小儿高热惊
厥、肺炎等症，现研究对肿瘤有防治作用［1 － 2］。为探讨三叶
青抗肿瘤作用的机制，本实验观察了三叶青乙酸乙酯提取物
对荷瘤小鼠免疫功能的影响，报道如下。
1 实验材料
1. 1 实验药物 三叶青:由华东医药公司中药分公司提供。
三叶青乙酸乙酯提取物制备:将 1kg 三叶青用 8L 乙酸乙酯
提取 3 次，萃取液回收乙酸乙酯后，置于冰箱中保存备用。
1. 2 实验动物与瘤株 小鼠 Lewis 肺癌细胞株、C57BL /6J
小鼠，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。
1. 3 实验试剂 小鼠血清 IFN － γ、TNF － α、IL － 2 检测试
剂盒:美国 R＆D公司提供。
2 实验方法
2. 1 造模 取接种 Lewis 肺癌瘤株 10 ～ 14 天的 C57BL /6J
荷瘤小鼠 3 只，颈椎脱臼处死，无菌条件下取瘤组织，剥离血
管及黏附的其它组织，在无菌平皿中剪碎，置组织研磨器中
加 4℃生理盐水，轻轻研磨过滤，制成瘤细胞悬液，0. 4%台
盼蓝计数，细胞活力大于 95%，调整细胞为 1 × 107 /ml。消
毒小鼠右前腋，取 0. 2ml上述瘤细胞混悬液接种于小鼠右前
肢腋窝皮下建立模型。
2. 2 分组与给药 体重 20 ～ 22g 小鼠接种 24 小时后随机
分组、编号，分为 4 组:三叶青高剂量组(10 只)、三叶青中剂
量组(10 只)、三叶青低剂量组(10 只)、模型对照组(10
只)。将三叶青乙酸乙酯提取物用无菌蒸馏水配制成低(相
当于生药 0. 5g /ml)、中(相当于原药 1. 5g /ml)、高(相当于原
药 2. 5g /ml)3 个浓度，于小鼠瘤细胞接种后 24 小时开始每
天灌胃给药，每只 0. 2ml，模型对照组给予等体积的生理盐
水，每天 1 次，连续给药 14 天。
2. 3 观察指标与测定 末次给药后 24 小时，摘取小鼠右侧
眼球取血后脱颈处死，用眼科剪分离剥取肿瘤，胸腺及脾脏，
称取质量。计算各组小鼠抑瘤率、胸腺指数、脾指数。抑瘤
率(%)=(对照组平均瘤重 －治疗组平均瘤重)/模型组平
均瘤重 × 100%;胸腺(脾)指数 =胸腺(脾)重(mg)/10g 体
重。取小鼠静脉血 0. 4 ～ 0. 6ml，室温静置后离心取上清液，
采用美国 R＆D 公司提供的试剂盒 ELISA 法检测小鼠血清
IFN － γ、TNF － α、IL － 2 的含量，操作过程严格按照试剂盒说
明书进行。
2. 4 统计学处理 采用 SPSS10. 0 版统计软件，计量数据以
均数 ±标准差(珋x ± s)表示，组间差异的比较采用单因素方差
分析，显著性水准为 P ＜ 0. 05。
3 结果
3. 1 三叶青乙酸乙酯提取物对小鼠瘤体生长的抑制作用
见表 1。
表 1 各组小鼠瘤重、抑瘤率的比较(n = 10)
组别 剂量(g /kg) 瘤重(g) 抑瘤率(%)
模型对照组 — 2. 64 ± 0. 52
三叶青低剂量组 5 2. 20 ± 0. 23▲ 16. 67
三叶青中剂量组 15 2. 02 ± 0. 24▲ 23. 49
三叶青高剂量组 25 1. 72 ± 0. 33▲▲ 34. 85
与模型组比较▲P ＜ 0. 05，▲▲P ＜ 0. 01(下同)
3. 2 三叶青乙酸乙酯提取物对荷瘤小鼠脾脏指数和胸腺指
数的影响 见表 2。
表 2 各组小鼠脾指数、胸腺指数的比较(x ± s，n = 10)
组别 剂量(g /kg)脾指数(mg /10g) 胸腺指数(mg /10g)
模型对照组 — 86. 65 ± 17. 12 17. 94 ± 6. 39
三叶青低剂量组 5 89. 29 ± 18. 78 18. 34 ± 7. 93
三叶青中剂量组 15 97. 32 ± 22. 89▲ 24. 32 ± 7. 89▲
三叶青高剂量组 25 102. 23 ± 24. 51▲ 26. 53 ± 9. 22▲
3. 3 三叶青乙酸乙酯提取物对肺癌移植瘤小鼠细胞因子的
影响 见表 3。
·922·中国中医药科技 2012 年 5 月第 19 卷第 3 期 May 2012 Vol. 19 No. 3
表 3 各组小鼠细胞因子水平的比较(x ± s，n = 10，pg /ml)
组别 剂量(g /kg) IL － 2 TNF － α IFN － γ
模型组 — 15. 12 ± 7. 15 71. 53 ± 15. 25 157. 92 ± 29. 14
三叶青低剂量组 5 16. 35 ± 7. 78 69. 58 ± 14. 59 156. 21 ± 28. 62
三叶青中剂量组 15 14. 58 ± 2. 79 89. 36 ± 17. 01▲ 189. 69 ± 39. 85▲
三叶青高剂量组 25 15. 25 ± 3. 25 99. 62 ± 18. 66▲ 191. 23 ± 31. 22▲
4 讨论 目前，肺癌的发病率和死亡率居高不下，其治疗仍
是困扰医学界的世界性难题。中药对提高肿瘤患者的治疗
成功率及改善肿瘤病人的生存质量、延长生命都有显著疗
效。本研究结果显示三叶青乙酸乙酯提取物高、中、低剂量
均可减轻瘤体质量，且随着药物剂量的增加，瘤体质量逐渐
减轻，抑瘤率逐渐增高，表明三叶青乙酸乙酯提取物具有一
定的抑瘤作用，其抑瘤作用随着剂量的增加而增强。
脾脏是机体最大的免疫器官，是机体细胞免疫和体液免
疫的中心，含有大量的淋巴细胞和巨噬细胞，通过多种机制
发挥抗肿瘤作用。胸腺为机体免疫的主要调节者，是人类主
要的中枢免疫器官，是 T 细胞分化、发育、成熟的场所，通过
分泌胸腺激素，影响并调节 T 细胞的分化、发育和功能。脾
脏和胸腺结构的正常与否直接影响机体的免疫功能。本实
验结果表明:三叶青高、中剂量组的脾脏指数、胸腺指数与模
型组比较均有一定提高，表明三叶青对 Lewis肺癌荷瘤小鼠
的免疫器官具有一定的保护作用。
IL － 2、IFN － γ 主要由 Th1 细胞分泌，不仅能促进 CTL
(细胞毒性 T淋巴细胞)的增殖，增强 CTL 的功能，激活 NK
(自然杀伤细胞)细胞、巨噬细胞，增强其杀伤活性;而且还
可直接杀伤肿瘤细胞。IL － 2 能够促进 IFN － γ 的分泌。
IFN － γ具有较强的免疫调节和抗肿瘤作用，增加 MHC(主
要组织相容性复合体)－Ⅱ分子的表达;并且还能诱导肿瘤
细胞的凋亡和抗肿瘤血管生成。TNF － α 是一种单核因子，
主要由单核细胞和巨噬细胞产生，TNF － α 在体内、体外均
能杀死某些肿瘤细胞，或抑制其增殖。本实验结果显示，三
叶青高、中剂量可使肺癌小鼠血清中 IFN － γ 和 TNF － α 提
高，较模型组差异具有显著性，表明三叶青能通过提高肺癌
小鼠血清中 IFN － γ和 TNF － α的水平来发挥抗肿瘤及调节
机体免疫功能的作用。
综上所述，三叶青乙酸乙酯提取物能抑制 Lewis 肺癌小
鼠肿瘤的生长，通过调节免疫系统的功能来抑制肿瘤的生长
可能是其作用机制之一。
参考文献
［1］ 丁钢强，郑军献，魏克民，等，三叶青提取物对肝癌细胞 HepG2
及原代大鼠肝细胞的体外毒作用研究 . 浙江预防医学，2005，
17(9) :1.
［2］ 倪克锋，金波，蒋福升，等 . 三叶青黄酮对 H22荷瘤小鼠 TIMP
－ 2mRNA表达的影响 . 中国中医药科技，2009，16(3) :195.
(修回:2012 － 04 － 10
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浮针治疗颞下颌关节功能紊乱 23 例临床观察
孙小英 (浙江省富阳市中医院·富阳 311400)
1 临床资料
23 例颞下颌关节功能紊乱综合征患者均为本院门诊患者，男性
8 例，女性 15 例;年龄最小者 18 岁，最大者 55 岁，平均年龄为 32 岁;
病程最短 1 天，最长 51 天。所选病例均表现颞颌关节局部疼痛、弹
响、活动障碍。
2 治疗方法 选用浮针，患者仰卧位，以手三里穴为第 1 进针点，针
尖由远端向近端。常规消毒后，用右手拇指、食指、中指三指挟持针
柄，用左手拇指、食指挟持辅助针身(类似毫针刺法中的挟持进针
法) ，与皮肤成 15° ～ 20°角快速进针，一般深达 5mm，略达肌层，然后
松开左手，右手改变斜持姿势，用拇指、食指、中指三指拿捏针座，仔
细地轻轻提拉，使针身离开肌层，退于皮下，确保浮针针尖在浅筋膜
层，即可放倒针身，做好运针准备;单用右手，沿皮下向前推进，推进
时稍稍提起，使针尖勿深入;运针时可见皮肤呈线状隆起。在整个运
针过程中，右手感觉空松软滑易进，病人没有酸胀麻痛等感觉。运针
深度一般掌握在 25 ～ 30mm，及达深度，作扫散动作(以进针点为支
点，手握针座，左右摇摆，使针体作扇形运动)。同时让患者轻微运
动下颌关节。针刺完毕效果不够理想则选取第 2 进针点为下颌角前
方，避开动脉，针尖向耳门方向压痛点。其余操作同上。扫散完毕，
抽出针芯，然后把胶布贴附于针座，以固定留于皮下的软套管。在进
针点处，用干棉球盖住针孔。留针 3 小时，嘱其自行起针。隔天 1
次，5 次为 1 疗程，疗程间隔 7 天。
3 结果
3. 1 疗效标准 治愈:疼痛症状消失，关节弹响消失，咀嚼功能恢复
正常。显效:症状改善，但疼痛、弹响及咀嚼功能至少有 1 项症状未
完全恢复。无效:治疗后症状无改善。
3. 2 治疗效果 1 个疗程治愈 18 例，改善 5 例，2 个疗程治愈 3 例，
治愈率为 91. 3%，有效率 100%。
4 体会
浮针疗法是在传统针灸学基础上，同时结合现代关于针灸学的
机制研究而发展形成的。浮针疗法虽然必须找准压痛点，但并不作
用于其上，进针后不要求任何得气感，对于适宜的疼痛，浮针疗法取
效快捷，疗效确切，易学易用。浮针治疗机制基本上可以概括成［1］:
(1)皮下疏松结缔组织是液晶状态，具有压电效应和反压电效应。
(2)当用浮针直接挤压、牵拉，特别是扫散运动时，可导致液晶状态
的疏松结缔组织的空间构型的改变，而释放出生物电。(3)疏松结
缔组织具有良好的半导体导电性能，能够高效率地传导生物电。
(4)当生物电到达病变组织时，产生反压电效应，改变细胞的离子通
道，调动人体内在的抗病机制，从而迅速缓解病痛。(5)浮针治疗后
疼痛部位血流量明显增加可使致痛物质减少，而起到止痛作用。故
治疗颞下颌关节功能紊乱疗效确切。
参考文献
［1］ 符仲华．浮针疗法．北京:人民军医出版社，2000:106．
(修回:2011 － 10 － 09)
·032· 中国中医药科技 2012 年 5 月第 19 卷第 3 期 May 2012 Vol. 19 No. 3