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HPLC测定道地产地和主产地茅苍术中β-桉叶醇及其他成分的含量



全 文 :[收稿日期] 20101202(005)
[基金项目] 中国中医科学院基本科研业务费自主选题项目
(Z02063)
[第一作者] 张贝贝,江西中医学院 2008 级硕士研究生
[通讯作者] * 付梅红,主 要 从 事 中 药 化 学 工 作,Tel:010-
64062692,E-mail:fu00126@ sina. com;* 许海玉,
主要从事中药药物代谢,E-mail:hy _ xu627 @
163. com
HPLC测定道地产地和主产地茅苍术中 β-桉叶醇
及其他成分的含量
张贝贝,方婧,许海玉 * ,李德凤,杨洪军,王祝举,唐力英,杨岚,张东,付梅红 *
(中国中医科学院中药研究所,北京 100700)
[摘要] 目的:通过测定道地产地和主产地茅苍术中有效成分及其他成分的含量,综合评价茅苍术的药材品质。方法:采
用 HPLC 对不同产地的茅苍术中的 β-桉叶醇、苍术素、苍术素醇和苍术内酯Ⅱ进行含量测定。结果:不同产地的茅苍术中成分
的含量差异显著,各地的茅苍术药材质量存在较大差异。β-桉叶醇和苍术素醇含量最高的是湖北英山的野生品;苍术素和苍
术内酯Ⅱ含量最高的产地是江苏茅山。结论:综合考虑茅苍术中苍术素、β-桉叶醇、苍术素醇和苍术内酯Ⅱ主产地的茅苍术的
质量要比道地产地茅苍术的质量优,该结果为茅苍术的产业化发展提供依据。
[关键词] 茅苍术;β-桉叶醇;苍术素;苍术素醇;苍术内酯Ⅱ;高效液相色谱法;含量测定
[中图分类号] R284. 1 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9903(2011)08-0116-03
Determination of β-eudesmol and Other Compositions
in Rhizome of Atractylodes lancea by HPLC
ZHANG Bei-bei,FANG Jing,XU Hai-yu* ,LI De-feng,YANG Hong-jun,WANG Zhu-ju,
TANG Li-ying,YANG Lan,ZHANG Dong,FU Mei-hong*
(Institute of Chinese Materia Medica China Academy of Chinese Medical Sciences,Beijing 100700,China)
[Abstract] Objective:By determining the active compositions and other compositions in rhizome of
Atractylodes lancea from geoherbs and herbs in main producing areas in order to synthetically evaluate the quality of
them. Method:β-eudesmol,atractylon,atractylodinol and atractylenolideⅡ in rhizome of A. lancea in different
regions were determined by HPLC. Result:There were great differences in content and quality among different
regions of A. lancea. The highest content of β-eudesmol and atractylodinol was found in wild products grown in
Yingshan city Hubei Province,while the highest content of atractylon and atractylenolideⅡ was found in maoshan
city Jiangsu province. Conclusion:The quality in the main origins was better than that in authentic origin from the
content determination of β-eudesmol,atractylon,atractylodinol and atractylenolideⅡ in different places,which
provide the basis for industrial development of lancea.
[Key words ] Atractylodes lancea; β-eudesmol; atractylon; atractylodinol; atractylenolide Ⅱ;
HPLC;determination
茅苍术为菊科植物茅苍术 Atractylodes lancea
(Thunb.)DC. 或北苍术 A. chinensis(DC.)Koidz. 的
干燥根茎,辛、苦、温。归脾、胃、肝经,具有燥湿健
脾、祛风散寒、明目的作用,主治湿阻中焦,脘腹胀
满,泄泻,水肿,脚气痿躄,风湿痹痛,风寒感冒,夜
盲,眼目昏涩[1]。苍术挥发油对正常小鼠胃肠推动
功能具有促进作用[2]。也有文献表明 β-桉叶醇能够
·611·
第 17 卷第 8 期
2011 年 4 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17,No. 8
Apr.,2011
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2011.08.064
明显促进正常小鼠的胃肠运动,显著抑制因新斯的
明负荷小鼠引起的胃肠功能亢进,增加脾虚小鼠体
重、明显改善脾虚小鼠的体征;抑制脾虚小鼠的胃肠
运动、对抗泄泻[3]。苍术的主要有效成分为倍半萜
类和聚乙炔类两大类成分,前者主要为 β-桉叶醇,后
者主要为苍术素。目前多选择这种成分作为苍术的
定量控制指标,如付梅红等[4]采用气相色谱法测定
了苍术中 β-桉叶醇的含量。本研究进行了高效液相
色谱法测定茅苍术中 β-桉叶醇的方法学研究并建立
了 HPLC 测定茅苍术中 β-桉叶醇含量方法,同时[1]
测定了道地产地和主产地 7 批茅苍术中苍术素含
量,以反相高效液相色谱法同时测定苍术中的 2 种
聚乙炔类化合物[5]和 RP-HPLC 同时测定苍术中苍
术素和白术内酯Ⅱ的含量[6]。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 岛津 LC-20AT 高效液相色谱仪(日本
岛津株式会社);色谱柱 Diamonsil(R)C18色谱柱
(4. 6 mm × 150 mm,5 μm);CX-250 超声波清洗器;
yueping-FA1004 电子天平;EYELA 旋转蒸发仪
1. 2 试剂与试药 乙腈为色谱纯(fisher);甲醇为
色谱纯(fisher);水为高纯水(自制);其他均为分析
纯。β-桉叶醇(自制,纯度 98%以上),苍术素,苍术
素醇,苍术内酯Ⅱ(购自上海中药标准化研究中心,
纯度 98%以上)。
苍术药材:购自湖北麻城、湖北罗田、湖北英山
野生品、湖北英山栽培品、安徽安庆、安徽霍山以及
江苏茅山共 7 批,经何希荣主管药师鉴定为菊科苍
术属植物茅苍术 A. lancea 的干燥根茎。
2 方法
2. 1 色谱条件 流动相乙腈-水(58 ∶ 42),流速 1
mL·min - 1,检测波长 203 nm,柱温 30 ℃。
2. 2 对照品溶液的制备 精密称定 β-桉叶醇适量,
加甲醇制成每 1 mL 含 0. 2 mg 的对照品溶液,即得。
2. 3 供试品溶液的制备 取本品粉末(过 60 目筛)
0. 2 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入三氯甲
烷 25 mL,称定质量,超声处理(功率 250 W,频率 40
kHz)10 min,放冷,再秤定质量,用三氯甲烷补足减
失的质量,摇匀,过滤,精密吸取续滤液 10 mL 蒸干,
用甲醇转移至 10 mL 量瓶,加甲醇定容,摇匀,即得。
2. 4 线性关系考察 精密吸取 β-桉叶醇对照品储
备液 0. 5,1,2,3,4,5,6 mL,分别置于 10 mL 量瓶
中,加甲醇至刻度,精密吸取上述对照品溶液 10μL
图 1 茅苍术药材 HPLC
A. 对照品;B. 样品;1. β-桉叶醇 A
依次注入液相色谱仪,按 2. 1 色谱条件进行测定,以
进样浓度(g·L - 1)为横坐标(X),色谱峰面积为纵坐
标(Y)绘制标准曲线,回归方程为 Y = 1 513 829. 526
X - 336. 662 616 4,r = 0. 999 9,β-桉叶醇在 0. 106 ~
1. 272 mg 与峰面积成良好的线性关系。
2. 5 检测限及定量限 取对照品储备液逐级稀释
后,按照上述色谱条件进样测定。以 S /N = 10 求得
β-桉叶醇的定量限为 22. 6 ng;以 S /N = 3 求得 β-桉
叶醇的检测限为 7 ng。
2. 6 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液 10
μL,按 2. 1 色谱条件下进行测定,RSD 0. 14%,表明
精密度良好。
2. 7 稳定性试验 精确吸取同一供试品溶液,分别
间隔 0,2,4,6,8,10,24 h 进样 10 μL 测定,结果测定
β-桉叶醇峰面积的 RSD 0. 98%(n = 6),表明样品在
24 h 内稳定。
2. 8 重复性试验 取同一批次本品粉末(过 60 目
筛)0. 2 g 6 份,精密称定,分别按 2. 3 供试品溶液制
备项下操作制备供试品溶液 6 份,每份精密进样 1
μL 按 2. 1 项下色谱条件进样测定并计算 β-桉叶醇
的含量,RSD 2. 76%,表明本法重复性很好。
2. 9 加样回收率试验 取已知 β-桉叶醇含量的茅
苍术药材粉末约 0. 1 g,精密称定 6 份,每份加入相
同量的 β-桉叶醇对照品,按 2. 3 供试品溶液制备项
下方 法 操 作,测 定。 6 次 测 定 平 均 回 收 率 为
96. 39%,RSD 1. 6%,结果见表 1。
2. 10 道地产地和主产地 7 批茅苍术中 β-桉叶醇、
苍术素、苍术素醇、苍术内酯Ⅱ的含量测定 将湖北
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张贝贝,等:HPLC 测定道地产地和主产地茅苍术中 β-桉叶醇及其他成分的含量
表 1 茅苍术中 β-桉叶醇加样回收试验(n = 6)
样品量
/ g
样品中
含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
0. 100 8 6. 18 6. 13 12. 04 95. 50
0. 099 0 6. 07 6. 13 11. 94 95. 50
0. 099 0 6. 07 6. 13 11. 91 95. 18
96. 39 1. 6
0. 101 1 6. 20 6. 13 12. 14 96. 93
0. 100 5 6. 16 6. 13 12. 24 99. 29
0. 099 0 6. 07 6. 13 11. 93 95. 51
麻城,湖北罗田,湖北英山(野生),湖北英山(栽
培),安徽安庆,安徽霍山,江苏茅山产的茅苍术药
材,分别测定了 β-桉叶醇、苍术素、苍术素醇以及苍
术内酯Ⅱ的含量,结果见表 2。
表 2 不同产地茅苍术各成分的含量测定 mg·g - 1
产地 β-桉叶醇 苍术素 苍术素醇 苍术内酯Ⅱ
湖北麻城 65 5. 94 0. 23 0. 44
湖北罗田 45. 1 3. 73 0. 41 0. 15
湖北英山(野生) 155. 5 0. 15 0. 95 -
湖北英山(栽培) 39. 4 3. 7 0. 21 -
安徽安庆 114 0. 35 0. 66 -
安徽霍山 98. 9 0. 21 0. 66 -
江苏茅山 4. 3 8. 8 0. 07 1. 1
3 结果与讨论
本研究考察了 3 种不同提取溶剂甲醇,三氯甲
烷,不同提取方法以及不同提取时间并最终确定了
最佳提取工艺。建立了 HPLC 测定茅苍术药材中 β-
桉叶醇的含量方法,专属性强,并且具有快速、准确、
易行特点,为科学评价苍术药材质量提供依据。
本研究结果显示,7 批不同产地的茅苍术中 β-
桉叶醇的含量以湖北英山野生品的含量最高为
155. 5 mg·g - 1,茅山的含量最低为 4. 3 mg·g - 1;苍术
素含量江苏茅山最高为 8. 8 mg·g - 1,湖北英山野生
品最低为 0. 15 mg·g - 1;苍术素醇的含量以湖北英山
野生品的最高为 0. 95 mg·g - 1,江苏茅山最低为
0. 07mg·g - 1;苍术内酯Ⅱ的含量以江苏茅山的含量
最高为 1. 1mg·g - 1,安徽安庆,安徽霍山以及湖北英
山野生品茅苍术中均不含苍术内酯Ⅱ。
分析不同产地的茅苍术样品,其成分的含量差
异较大,江苏茅山虽作为茅苍术的道地产地,但苍术
素醇和作为有效成分的 β-桉叶醇[3]的含量却都明显
较湖北和安徽两个主产地的含量低。
[参考文献]
[1] 中国药典 .一部[S]. 2010.
[2] 张兴德,李俊松,吕游春 . 北苍术挥发油不同提取工艺
及药效学研究[J]. 现代中药研究与实践,2009,22
(6):35.
[3] 王金华,薛宝云,梁爱华,等 . 苍术有效成分 β-桉叶醇
对小鼠小肠推进功能的影响[J].中国药学杂志,2002,
37(4):2265.
[4] 付梅红,王金华,张颖,等 .气相色谱法测定苍术中有效
成分 β-桉叶醇含量的方法学研究[J]. 中国中药杂志,
2000,25(11):680.
[5] 陈炎明,侴桂新,王峥涛 . 反相高效液相色谱法同时测
定苍术中的两种聚乙炔类化合物[J]. 中国药学杂志,
2007,25(1):84.
[6] 南洋,贾凌云,李倩,等 . RP-HPLC 法同时测定苍术中
苍术素和白术内酯Ⅱ的含量[J].药物分析杂志,2010,
30(1):17.
[7] 方成武,樊敏,刘守金,等 . HPLC 测定不同居群苍术中
苍术 素 醇 的 含 量[J]. 中 国 中 药 杂 志,2010,35
(7):834.
[责任编辑 蔡仲德]
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第 17 卷第 8 期
2011 年 4 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17,No. 8
Apr.,2011