全 文 ：上述数据表明睡安口服液中含酸枣仁皂苷 A和酸枣仁皂苷 B总
量的平均值为 0.337 5 mg· ml-1 , 按降幅 20%计为本品含量下
限 , 则其含量应不低于 0.27 mg· ml-1。按每支 10.0 ml计算 , 每
支应不低于 2.7 mg。
3　讨论
《中国药典》(2005版)没有收载酸枣仁单味药材的含量检测
方法 , 文献报道酸枣仁皂苷 A和酸枣仁皂苷 B的含量测定也较
少 , 主要方法有薄层扫描法 、一阶导数分光光度法等 。由于高效
液相色谱法常用的紫外(UV)检测器不利于皂苷类成分的检测 ,
本实验选用蒸发光散射(ELSD)检测器进行检测 , 建立的 HPLC
-ELSD法简便准确。
黑龙江省药学研究所提供的睡安口服液含酸枣仁皂苷 A和
酸枣仁皂苷 B总量的平均值为 0.3375mg· ml-1 ,批间差异较小 ,
说明制备工艺稳定。
参考文献:
[ 1 ] 　王　健 , 　林　晓.酸枣仁中酸枣仁皂甙 A和B的含量测定 [ J] .中
草药 , 1996, 27(3):154.
[ 2 ] 　王　健 ,林　晓 ,丁少纯.酸枣不同部位中酸枣仁皂甙 A和 B的含
量测定 [ J].中成药 , 1996, 18(5):23.
收稿日期:2007-08-22;　修订日期:2007-11-26
基金项目:国家 “ 863”计划重点资助项目(No.2002AA2Z3217)
作者简介:谢晚彬(1971-),男(汉族),湖南冷水江人, 现任宜春学院化学
与生物工程学院讲师 ,硕士学位 ,主要从事生物化学与分子生物学工作.
＊通讯作者简介:陈　武(1944-), 男(汉族),江西奉新人 , 现任宜春学院
化学与生物工程学院教授 ,学士学位 ,主要从事天然药物与生物技术研究
工作.
反相高效液相色谱法
同时测定马鞭草中乌索酸和齐墩果酸的含量
谢晚彬 1 ,邹盛勤2 ,陈　武 1, 2＊
(1.宜春学院化学与生物工程学院 ,江西 宜春　336000;
2.江西省天然药物活性成分研究重点实验室 ,江西 宜春　336000)
摘要:目的 建立 RP-HPLC法测定马鞭草中乌索酸和齐墩果酸的含量。方法 色谱柱为 NucleosilC18柱(4.6 mm×250
mm, 5 μm),流动相为甲醇 -水(88∶12, V/V), 流速为 0.8 ml/min, 检测波长为 210 nm, 柱温 25℃。结果 乌索酸在
0.458 ～ 4.109 μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 7), 平均回收率为 98.1 %, RSD=1.1%;齐墩果酸在 0.156 ～ 1.
389μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 6),平均回收率为 101.7%, RSD=1.7%。结论 方法快速简便 、准确可靠 , 可
作为马鞭草药材的质量控制方法。
关键词:马鞭草;　乌索酸;　齐墩果酸;　反相高效液相色谱法
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)05-1061-02
DeterminationofUrsolicAcidandOleanolicAcidinVerbenaoficinalisL.byRP-HPLC
XIEWan-bin1 , ZOUSheng-qin2 , CHENWu1, 2＊(1.ColegeofChemistryandBioengineeringofYichunUniversity, Yichun, Jiangxi336000 , China;2.KeyLa-
boratoryofJiangxiProvinceforResearchonActiveIngredientsinNaturalMedicines, Yichun, 336000 , China)
Abstract:ObjectiveToestablishamethodfordeterminingursolicacidandoleanolicacidinVerbenaofficinalisL.byhighper-
formanceliquidchromatography.MethodsTheseparationwascarriedoutonNucleosilC18 column(4.6 mm×250 mm, 5 μm)withmethanol-water(88∶ 12, V/V)asthemobilephase.Theflowratewas0.8 ml/minandthedetectionwavelengthwas
210nm.Thecolumnwasusedat25℃.ResultsUrsolicacidshowedagoodlinearrelationshipintherangeof0.458 ～ 4.109 μg
(r=0.999 7)andtheaveragerecoverywas98.1%.RSDwas1.1%.Oleanolicacidshowedagoodlinearrelationshipinthe
rangeof0.156 ～ 1.389μg(r=0.999 6)andtheaveragerecoverywas101.7%.RSDwas1.7%.ConclusionThemethodis
rapid, simple, accurateandreliableandcanbeusedforthequalitycontrolofVerbenaoficinalisL..
Keywords:VerbenaofficinalisL.;　Ursolicacid;　Oleanolicacid;　RP-HPLC
　　马鞭草为马鞭草科植物马鞭草 VerbenaoficinalisL.的干燥
地上部分 , 又名铁马鞭 、疟马鞭 、土荆芥。马鞭草为传统中药 ,具
有清热解毒 、活血散淤 、利水消肿等功效 ,可用于治疗疟疾 、白喉 、
传染性肝炎 、流行性感冒等 [ 1] 。马鞭草含马鞭草苷 、5 -羟基马
鞭草苷 、熊果酸 、挥发油等多种化合物 [ 2] 。现代药理研究表明 ,
乌索酸(熊果酸 , Ursolicacid)具有抗肝炎 、抗肿瘤 、抗病毒 、抗炎
抑菌及增强免疫功能等多种药理活性 , 具有重要的药用开发价
值 [ 3] 。本实验采用 RP-HPLC法同时测定了马鞭草中乌索酸和
齐墩果酸的含量 , 为控制药材质量提供科学依据。
1　器材
1.1　仪器 Waters515双泵型高效液相色谱仪(2996光电二极管
矩阵检测器 , 77251进样阀 , 20μl定量环 , Empower中文色谱工作
站 , 美国 Waters公司);RO-MB-10D高纯水机(杭州永洁达膜
分离设备厂);CP225D电子分析天平(德国 Sartorius公司);202
-26A型数显电热恒温干燥箱(上海阳光实验仪器有限公司);
FW100型高速万能粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司);KS-
1500超声提取仪器 (宁波科盛仪器厂)。
1.2 　材料 马鞭草购于江西省宜春市药材市场 , 经江西省天然
药物活性成分研究重点实验室鉴定为马鞭草科植物马鞭草 Ver-
benaofficinalisL.的干燥地上部分。
甲醇为色谱纯(上海陆忠试剂厂), 水为高纯水 , 95%乙醇
(分析纯 ,江西同盟试剂化工厂), 乌索酸和齐墩果酸对照品(中
国药品生物制品检定所提供 , 批号:110742-200516, 110709 -
200511)。
2 　方法与结果
2.1 　色谱条件 色谱柱为 NucleosilC18柱(4.6 mm×250 mm, 5
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.5 时珍国医国药 2008年第 19卷第 5期
μl, 带保护柱);流动相为甲醇 -水(88∶ 12, V/V);流速为 0.8
ml/min;柱温为 25℃;检测波长为 210nm;以《美国药典》方法计
算 , 乌索酸和齐墩果酸理论塔板数均大于 10 000。乌索酸和齐墩
果酸对照品及马鞭草样品的 HPLC色谱见图 1。
a-对照品;　b-马鞭草样品　1.齐墩果酸　2.乌索酸
图 1　对照品和样品的 HPLC图谱
2.2　对照品溶液的配制 精密称取干燥至恒重的乌索酸对照品
22.8 mg和齐墩果酸对照品 7.8 mg, 置于 10 ml容量瓶中 ,加入
适量甲醇溶解 , 用甲醇定容 ,得对照品储备液。精密吸取 1 ml混
合液置 10ml容量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,混合均匀 , 制成乌索
酸和齐墩果酸的浓度分别为 0.228 μg/μl和 0.078 μg/μl对照
品混合溶液 , 备用。
2.3　样品溶液的制备 将马鞭草样品置烘箱中 85℃ 烘干 12 h,
研细后精密称取约 4 g, 置于具塞三角烧瓶中 , 加入 10倍量
95%乙醇 , 采用超声法提取 60 min, 过滤 ,药渣洗涤两次 , 合并
滤液于 50 ml容量瓶中 , 加乙醇定容至刻度 , 摇匀。滤液用 0.2
μm的滤膜过滤 ,得马鞭草提取物的样品溶液 。
2.4　 线性关系实验 分别精密吸取对照品的混合溶液 2.0, 6.0,
10.0, 14.0, 18.0 μl进样分析 , 按选定的色谱条件进样并测定峰
面积。以峰面积(μV· s)对进样量(μg)进行线性回归 , 乌索酸
和齐墩果酸的回归线方程分别为:
YUA=5.18×105X-4.36×104(r=0.999 7)YOLA=6.21×105X-6.32×104(r=0.999 6)
表明当乌索酸进样量在 0.458 ～ 4.109 μg, 齐墩果酸进样量
在 0.156 ～ 1.389μg范围内线性关系良好。
2.5　精密度实验 精密吸取对照品混合溶液 10 μl, 重复进样 5
次 , 分别测定峰面积值 ,计算出乌索酸的 RSD为 0.9%, 齐墩果酸
的 RSD为 0.7%,进样方法和仪器精密度良好。
2.6 　重复性实验 取干燥至恒重的同一批马鞭草样品 5份 , 按
样品溶液制备方法制备样品溶液。精密吸取 10 μl进样分析 ,乌
索酸 RSD为 2.1%,齐墩果酸峰面积 RSD为 2.3%。
2.7　加样回收率实验 精密称取干燥至恒重 、已知乌索酸和齐墩
果酸含量的马鞭草样品 5份 , 每份约 4g, 加入适量乌索酸和齐墩
果酸对照品适量 , 5份样品同时按样品溶液制备方法提取 , 进样
分析。乌索酸平均回收率为 98.1%, RSD 1.1%, 齐墩果酸平均
回收率为 101.7%, RSD1.7%。
2.8　样品的含量测定 精密吸取马鞭草样品溶液 10 μl, 注入液
相色谱仪 , 按上述色谱条件测定 , 外标法计算样品中乌索酸和齐
墩果酸的含量。结果见表 1。
表 1　马鞭草提取物中乌索酸和齐墩果酸含量 %
样品 乌索酸含量　　　　　RSD
齐墩果酸
含量　　　　　RSD
1 0.237 0.8 0.071 1.2
2 0.221 1.1 0.056 0.6
3 0.232 1.0 0.062 0.9
3 　讨论
3.1　提取方法 从中草药中提取有效成分的常规方法主要有:热
回流法 、索氏法 、煎煮法及渗滤法 、冷热浸泡法等 [ 4] 。本文采用
的超声提取法在提取过程中具有破坏植物药材细胞的作用 ,加速
溶媒渗透到药材细胞中 , 使药材的化学成分易溶于溶媒中 [ 5] 。
它与常规提取方法相比 , 具有提取时间短 , 产率高 , 降低溶剂消
耗 , 节约能源的优点。
3.2 　提取时间 样品加入 10倍量 95%乙醇溶液 ,分别超声提
取 45, 60, 90, 120, 150 min, 预处理后测定提取液中乌索酸含量 ,
60min后乌索酸含量无明显变化 , 表明其成分提取完全 , 乌索酸
平均加样回收率为 98.1%, 齐墩果酸的平均加样回收率
为 101.7%。
3.3　检测波长 取乌索酸和齐墩果酸对照品溶液进样 ,在 190 ～
500 nm波长范围进行光谱扫描 , 乌索酸和齐墩果酸在流动相中
的最大紫外吸收波长均为 204.5nm(图 2),但由于流动相在短波
长处有末端吸收 ,为了消除背景 , 提高信噪比 ,提取不同波长的色
谱图进行比较 ,选择 210nm为检测波长 ,信噪比高 , 峰形好 ,干扰
小 , 最大限度地保证分析结果的准确。
图 2　乌索酸和齐墩果酸对照品的紫外光谱
3.4　测定方法建立 马鞭草中乌索酸含量的测定方法一般采
用薄层色谱法 [ 6] , 但由于乌索酸和齐墩果酸极性相差极小 ,
用薄层色谱法难以分离 , 其结果往往是两组分的总含量。 采
用高效液相色谱法能同时测定乌索酸和齐墩果酸的含量 , 两
组分得到良好分离 ,具有简便 ,准确 , 灵敏度高 , 稳定性和重现
性好的优点 。
参考文献:
[ 1 ] 　江苏新医学院.中药大辞典 , 上册 [ M] .上海:上海科技出版
社 , 1979.
[ 2 ] 　国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手册 [ M] .
北京:人民卫生出版社 , 1986:1101.
[ 3 ] 　陈　武 , 李开泉 ,熊筱娟 ,等.乌索酸的药理作用研究 [ J] .宜春学
院学报 , 2003, 25(4):1.
[ 4 ] 　袁　珂 ,李根林 ,李俊芝 , 等.车前草中熊果酸 、齐墩果酸的 HPLC
测定 [ J] .中草药 , 1999, 30(12):901.
[ 5 ] 　潘娓婕 ,李晓宁 ,张尊听 ,等.超声法从青风藤中提取青藤碱 [ J] .天
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峡药学 , 1998, 10(2):47.
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 5期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.5