全 文 ：高效液相色谱法测定茅苍术药材中 β -桉叶醇与苍术素的含量＊
张晓兰 ,李锦 ,李遇伯＊＊,王晓玉 ,张丽 ,顾明山
(天津中医药大学中药学院 , 天津市中药化学与分析重点实验室 ,天津 300193)
摘要　目的:建立茅苍术药材中 β -桉叶醇和苍术素含量的测定方法。方法:采用高效液相色谱法 , 色谱柱为 ComatexC
18
-
AB(150 mm×4.6 mm, 5 μm)柱 , 流动相为乙腈 -水 -碳酸氢铵(65∶35∶0.2),流速 1.0mL· min-1 , 检测波长 203 nm, 柱温为
室温(25℃)。结果:被测定峰与相邻峰可达到基线分离;β -桉叶醇和苍术素的线性范围分别为 2.3 ～ 115.0 μg· mL-1(r=
1.000)和 1.12 ～ 56.0 μg· mL-1(r=0.9999);平均回收率(n=9)分别为 99.3%和 99.9%。结论:本方法准确 、简便 , 重复性
好 , 可作为茅苍术中 β -桉叶醇和苍术素的含量测定方法。
关键词:茅苍术;β -桉叶醇;苍术素;高效液相色谱
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254-1793(2009)12-2051-04
HPLCdeterminationofβ -eudesmolandatractylonin
Atractylodeslancea(Thunb.)DC.＊
ZHANGXiao-lan, LIJin, LIYu-bo＊＊ , WANGXiao-yu, ZHANGLi, GUMing-shan
(TianjinKeyLaboratoryofTCMChemistryandAnalysis, ColegeofChineseMateriaMedica, TianjinUniversityofTCM, Tianjin300193, China)
Abstract　Objective:TodevelopanRP-HPLCmethodforsimultaneousdeterminationofβ -eudesmolandatrac-
tyloninAtractylodeslancea.Methods:ThedeterminationwasperformedbyHPLCmethod, aComatexC18 -ABcol-
umn(150mm×4.6 mm, 5 μm)wasadoptedwithamobilephaseofacetonitrile-water-ammoniumbicarbonate
(65∶35∶0.2)ataflowrateof1.0 mL·min-1;Thedetectionwavelengthwassetat203 nmandthecolumntem-
peraturewas25 ℃.Results:Thelinearrangesofβ -eudesmolandatractylonwere2.3-115.0 μg· mL-1(r=
1.000)and1.12-56.0μg· mL-1(r=0.9999), respectively;Theaveragerecoveries(n=9)ofthetwocompo-
nentsinAtractylodeslanceawere99.3% and99.9%, respectively.Conclusion:Themethodissimple, preciseand
reliablefordeterminationofβ -eudesmolandatractyloninAtractylodeslancea(Thunb.)DC.
Keywords:Atractylodeslancea(Thunb.)DC.;β -eudesmol;atractylon;HPLC
　　苍术为菊科植物茅苍术 Atractylodeslancea
(Thunb.) DC.或 北 苍 术 Atractylodeschinensis
(DC.)Koidz.的干燥根茎 [ 1] , 始载于 《神农本草
经 》,具有燥湿健脾 、祛风散寒 、明目的作用 ,为中医
常用药材之一 [ 2] 。苍术的主要有效成分为倍半萜
类和聚乙炔类两大类成分 [ 3] ,前者主要为 β -桉叶
醇 ,后者主要为苍术素 。 β -桉叶醇为苍术燥湿健脾
功效的主要有效成分之一 [ 4] ,另外它还有保肝 、利
尿 、镇痛等作用 [ 5] ;苍术素能有效延缓胃排空时
间 [ 6] ,目前多采用这 2种成分作为苍术的质量控制
指标:杨立新等人 [ 7]采用薄层色谱法对苍术挥发油
进行鉴别 ,气相色谱法测定苍术挥发油中 β -桉叶
醇的含量;唐慧慧等人 [ 8]建立了麸炒苍术中 β -桉
叶醇的含量测定方法并确定限量范围;陈炎明等
人[ 3]采用反相高效液相色谱法同时测定了苍术中
的 2种主要聚乙炔类成分(苍术素 、苍术素醇)的含
量。苍术素性质不稳定 ,在高温下易分解 ,且有紫外
吸收 ,适合用 HPLC-UV法进行测定 ,而目前尚未
有采用 HPLC法对这 2种主要成分同时进行定量的
报道 ,因此本文采用 RP-HPLC法对茅苍术中 β -
桉叶醇和苍术素同时进行含量测定 ,为茅苍术的质
量控制提供更全面有效的方法。
1　仪器与试药
日本岛津 LC-20AT高效液相色谱仪;SPD-
—2051—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(12)
＊
＊＊
国家自然科学基金资助项目(30801540)
通讯作者　Tel:(022)23052123;E-mail:yubolil@163.com
DOI :10.16155/j.0254-1793.2009.12.010
20A紫外检测器;SIL-20A自动进样器。乙腈为色
谱纯(购于天津市江天化工技术有限公司);水为娃
哈哈纯净水;其他试剂均为分析纯。
对照品 β -桉叶醇(购于日本和光纯药工业株
式会社 ,批号 056-05161)、苍术素(购于上海中药
标准化研究中心 ,批号 17-2001),经 HPLC峰面积
归一化法测得的 2种对照品的纯度均大于 98%;苍
术购于天津市各大药店 ,由天津中医药大学实验教
学部李天祥老师鉴定为菊科植物茅苍术 Atractylodes
lancea(Thunb.)DC.的干燥根茎 。
2　方法与结果
2.1　对照品储备液的制备　精密称取对照品 β -
桉叶醇和苍术素适量 ,用甲醇配制成浓度分别为
0.230 mg· mL-1和 0.112 mg· mL-1的单一成分对
照品储备液 ,待用 ,需避光保存 。
2.2　供试品溶液的制备　精密称取苍术药材粉末
(过 40目筛)0.5g,加 100倍量 75%乙醇 ,水浴加热
回流提取 2h,过滤 ,滤液转移至 100 mL量瓶并稀释
至刻度 ,摇匀 ,经 0.45 μm微孔滤膜过滤 ,即得 ,需
避光保存。
2.3　色谱条件　色谱柱:ComatexC18 -AB(150mm
×4.6 mm, 5 μm)柱;流动相:乙腈 -水 -碳酸氢铵
(65∶35∶0.2);流速:1.0 mL·min-1;检测波长:203
nm;柱温:室温 (25 ℃)。在本文色谱条件下 ,对照
品 β -桉叶醇和苍术素 、苍术样品的色谱图见图 1,
由图 1可知:β -桉叶醇和苍术素色谱峰与相邻色谱
峰的分离度均大于 1.5,理论板数按苍术素计算不
低于 4000, β -桉叶醇和苍术素与其他组分完全分
离 。 5个样品的供试品溶液连续进样色谱图见图 2,
由图可知此色谱条件下无残留干扰。
2.4　线性关系考察　精密吸取 β -桉叶醇和苍术
素的单一成分对照品储备液适量 ,分别置于 10 mL
量瓶中 ,用甲醇稀释至刻度 ,得对照品系列混合溶液
(β -桉叶醇的浓度分别为 2.3, 11.5 , 34.5, 69, 115
μg· mL-1 ,苍术素的浓度分别为 1.12, 5.6, 16.8,
33.6, 56 μg· mL-1),精密吸取上述对照品混合溶
液各 20 μL,依次注入液相色谱仪 ,按上述色谱条件
测定峰面积 ,以进样浓度(μg· mL-1)为横坐标 ,色
谱峰面积为纵坐标 ,绘制标准曲线 , β -桉叶醇和苍
术素回归方程分别为:
Y=1.371×104X-542.7　r=1.000
Y=5.234×104X-4219 　r=0.9999
线性范围分别为 2.3 ～ 115.0 μg· mL-1及 1.12 ～
56.0μg·mL-1。
2.5　检测限及定量限 　取 2种对照品储备液逐级
稀释后 ,按照上述色谱条件进样测定。以 S/N=10
求得 β -桉叶醇和苍术素的定量限分别为 21.6 ng
和 30.6 ng;以 S/N=3求得 β -桉叶醇和苍术素的
检测限分别为 6.4ng和 11.5 ng。
2.6　精密度试验　精密称取苍术药材粉末 0.5 g,
按 “ 2.2”项下方法制备溶液 ,重复进样 5次 ,测定 β
-桉叶醇和苍术素峰面积的 RSD分别为 0.42%和
0.91%。
2.7　重复性试验　取同一批次的苍术药材粉末
0.5 g共 5份 ,精密称定 ,按 “ 2.2”项下方法制备溶
液 ,依次测定 ,苍术药材中 β -桉叶醇和苍术素平均
含量分别为 0.73%和 0.25%, RSD分别为 1.5%和
1.0%。
2.8　稳定性试验　取同一份待测供试品溶液 ,分别
在 0, 3, 6, 12, 18h进样测定 ,测得 β -桉叶醇和苍术
素峰面积值的 RSD分别为 1.9%和 1.7%。结果表
明供试品溶液于 18 h内稳定
2.9　回收率实验　精密称取已知含量(含 β -桉叶
—2052— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(12)
醇 0.68%,苍术素 0.30%)的样品 0.25g共 9份 ,平
均分为 3组 ,每组分别精密吸取 0.552 mg· mL-1 β
-桉叶醇对照品溶液 2.45, 3.10, 3.75 mL和 0.284
mg·mL-1苍术素对照品溶液 2.10, 2.65, 3.20 mL,
按照 “2.2”项下的方法制得所需溶液 ,进行测定 ,计
算回收率。结果 β -桉叶醇低 、中 、高 3个浓度的回
收率(n=3)分别为 100.3%(RSD=2.4%), 99.8%
(RSD=0.84%), 97.6%(RSD=2.9%),平均回收
率(n=9)为 99.3%;苍术素低 、中 、高 3个浓度的回
收率(n=3)分别为 99.6%(RSD=2.1%), 102.0%
(RSD=1.0%), 98.2%(RSD=1.2%),平均回收率
(n=9)为 99.9%。
2.10　样品含量测定　按照本方法的测定条件 ,分
别测定 8批茅苍术样品 ,将峰面积代入标准曲线 ,计
算 β -桉叶醇和苍术素的含量 ,结果见表 1。
表 1　样品测定结果(%)
Tab1　Resultsofsampledetermination
样品编号
(No.)
β -桉叶醇
(β-eudesmol)
苍术素
(atractylon)
1 0.68 0.30
2 0.64 0.26
3 0.11 0.25
4 0.14 0.58
5 0.14 0.51
6 0.13 0.28
7 0.05 0.33
8 0.61 0.16
3　讨论
3.1　提取工艺的考察　本实验对索氏提取法 、加热
回流提取法和超声提取法进行了考察 , β -桉叶醇及
苍术素 2种成分综合考虑 ,选择加热回流提取法进
行提取;提取溶剂考察了水 、25%乙醇 、50%乙醇 、
75%乙醇 、95%乙醇 ,发现 75%的乙醇提取最完全 ,
为使样品提取完全 ,选择 100倍量体积的溶剂进行
提取 ,提取时间为 2 h,在增加溶剂体积及提取时间
后发现 β -桉叶醇和苍术素的含量基本无变化 ,说
明 β -桉叶醇和苍术素已提取完全 ,因此选择用 50
mL75%乙醇回流提取 2 h。
3.2　色谱条件的确定　从紫外吸收扫描曲线上观
察 , β -桉叶醇和苍术素分别在 203 nm和 340nm处
有最大吸收 ,苍术素在 203nm处也有较大吸收而 β
-桉叶醇在 340nm处无吸收 ,因此选择 203 nm为
检测波长。文献报道 [ 3] 流动相使用乙腈和水分离
苍术素与其他物质 ,但在本实验中发现仅用乙腈与
水无法使 β -桉叶醇与前面的杂质峰很好地分离 ,
而加入 0.2%碳酸氢铵后则能很好分离 ,因此流动
相选择乙腈 -水 -碳酸氢铵(65∶35∶0.2)。
3.3　苍术素的稳定性　苍术素具有较大的不饱和
体系 ,在光照的条件下很不稳定 ,能很快发生变化 ,
使颜色加深成棕黄色 [ 9] ,因此在保存供试品溶液及
对照品储备液时应避光保存 。
4　结论
由茅苍术含量测定的结果可以看出 ,不同批次
的茅苍术中 β -桉叶醇和苍术素的含量差别很大 ,
这与文献报道 [ 10]相符 ,造成这种差异的原因可能与
地理环境与采集时间等多种因素有关 ,这有待于进
一步的研究。本文首次采用高效液相色谱法同时测
定茅苍术中 β -桉叶醇和苍术素的含量 ,结果准确
可靠 ,重复性良好 ,获得了理想的检测效果 ,可以作
为茅苍术的质量评价方法 ,为今后建立其质量控制
方法 ,更为科学地反映茅苍术的内在质量奠定实验
基础 。
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(本文于 2009年 1月 13日收到)
田中耕一力倡 “质量分析 ”跨学科融合创新
　　11月 25日 , 2002年诺贝尔化学奖获得者 、岛津制作所质量分析研究所所长田中耕一先生受邀出席了
第 13届北京分析测试学术报告会及展览会(BCEIA),发表了题为 《分析化学领域的跨学科融合所带来的
创新 》的大会报告 ,并在会后接受了媒体的访问。
作为一位世界顶级的 “质量分析研究 ”践行者 ,田中耕一先生在过去几十年为医学 、生命科学领域作
出了突出的贡献。其获得诺贝尔化学奖的 “对生物大分子进行确认和结构分析的方法 ”在此后被广泛地
应用于医学诊断领域 ,成为改写人类生命科学与生物技术难点的一项重要研究 。
田中耕一告诉与会者 ,科学技术是一项系统工程 ,需要融合不同学科 、系统地应用跨学科知识进行事
物解析 、求解的过程 。尽管目前人类科学技术的发展已经达到一定高度 ,但却不是处于极致状态。以生命
科学领域为例 ,即便是再顶尖的科学家 ,目前为止也不能够解析出达到 1%这一领域的事物 。质量分析技
术也一样 ,对于跨学科的融合要求显得更为突出 。田中耕一指出 ,如果要推进质量分析领域的进步 ,各个
学科的专家交流变得越来越重要 ,要学会技术互通 、互用所长 、扬长避短。也就说 ,要以不同领域的最终结
果作为起点加以应用才能够创造出新的成果 。
同时 ,田中耕一认为 ,既然今后分析领域发展的主趋势是跨学科发展 ,把不同的领域的专家结合在一
起搞研究 ,团队精神就显得非常重要。
为此 ,田中耕一先生以自己目前所从事的研究为事例为我们佐证了团队精神的重要性。他表示 , “质
量分析技术”在生命科学领域的应用非常广 。岛津制作所质量分析研究所主要集中精力于这一细分分析
领域的研究 ,包括仪器 、设备的研发 。目前 ,他正在进行一款最新的尖端设备的研发 ,他告诉记者 ,这个设
备的最初构想是由他的一位在岛津英国曼彻斯特基地共事的中国学者率先提出 ,他则把这一理论阶段的
构思实用化 ,应用到做成设备等一系列研发的工作过程中 。
另外 ,田中耕一还表示 ,岛津集团投入很大的精力进行蛋白质物质研究 ,像田中耕一先生所在的质量
分析研究所 ,目前在从事一项如癌症早诊等 “医疗早诊 ”研究工作。同时 ,伴随这一研究 ,岛津还产生了一
项以岛津(上海)研究所的一项基础研究为平台展开应用研究 ,即仪器研发 。上海目前主要研究仪器的主
机部分 ,即硬件的部分 ,这个仪器将被应用到生命科学 、医学 ,包括药学等相对成熟的研究领域 。
田中耕一还告诉记者 ,他十分注重与中国学者的交流 ,在生命科学领域 ,中国的研究人员活跃在世界
研究领域的前沿。不单是在中国本土能够见到优秀的中国学者 ,在欧美同样见到优秀的中国学者活跃在
国际舞台上 ,甚至部份美国质量分析研究所里的研究人员一半以上都是中国人 ,他认为 ,除了日本的学者 ,
他见的最多的可能就是中国的学者 。田中先生还指出 ,在分析领域 ,中国学者的贡献非常大 ,从整体上而
言 ,可能有 10%-20%左右的贡献来自于中国的专家 。
—2054— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(12)