全 文 ：3　讨论
为了考察其它组分及辅料对茶碱测定结果的影响 , 以 272
nm 为测试波长 ,直接采用零阶导数光谱进行回收率实验 , 其平均
回收率为 102. 3%, 明显高于采用一阶导数光谱法所测得的平均
回收率 ,说明其它组分及辅料对茶碱测定结果有干扰 , 而采用一
阶导数谱法不经分离直接测定茶碱的含量即可消除其它组分及
辅料对茶碱测定结果的干扰。操作简便快捷 ,结果准确可靠。
参考文献:
[ 1 ] 　国家药品监督管理局 ,国家药品标准.化学药品地方标准上升国家
标准 ,第 7册[ S] . 2002:130-131.
[ 2 ] 　安登魁 ,秦芝玲 ,伍朝篑 ,等.药物分析 ,第 2版[ M] .北京:人民卫
生出版社 , 1987:323-329.
收稿日期:2004-11-18;　修订日期:2005-04-26
作者简介:刘卫国(1979-),男(汉族),四川中江人 , 现在读四川农业大学
硕士研究生 ,学士学位 ,主要从事中药材指纹图谱研究.
*通讯作者简介:杨文钰(1958-),男(汉族),四川大英人 ,现任四川农业大
学农学院教授 ,主要从事中草药的栽培与鉴定研究工作.
高效液相色谱法测定三叶木通中齐墩果酸的含量
刘卫国 , 杨文钰* , 汪晓辉 , 刘红昌
(四川农业大学农学院 ,四川 雅安　625014)
摘要:目的:建立高效液相色谱法测定三叶木通中齐墩果酸的含量。方法:采用 Hyper sil ODS 柱(4. 6 mm ×250 mm , 5
μm),流动相 A:水 , B:甲醇 , 梯度洗脱 0 min:A-B(25∶75), 10 min;A-B(10∶90), 20 min:A-B(5∶95), 检测波长:215
nm , 流速:0. 8 ml min-1 ,柱温:20℃。结果:齐墩果酸获得良好分离 , 在 1. 22 ～ 6. 10 μg 线性关系良好(r=0. 999 9)平均
加样回收率为 98. 8%。结论:该方法精密度高 , 重现性好 ,可用来对三叶木通进行质量控制。
关键词:三叶木通;　齐墩果酸;　高效液相色谱法
中图分类号:R284. 2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2005)08-0747-01
Determination of Oleanolic Acid in Akebia tri f oliate by HPLC
LIU Wei-guo , YANG Wen-yu* , WANG Xiao-hui , LIU Hong-chang
(Sichuan Agricul tural Universi ty ,Yaan 625014 , China)
Abstract:Objective:To establish an H PLC me thod to determine the content of o leanolic acid in Akebia tri f oliate .Meth-
ods:Oleano lic acid w as spe rated on an Hyper sil ODS column. The mobile pha se was me thanol-wa te r. The flow rate was 0. 8
ml min-1with linear g radient. UV de tection w aveleng th was 215 nm. Column temperature w as 20 ℃. Results:Oleanolic
acid was separ ated well. The relationship of injection amounts and peak was linear(r=0. 999 9)in the range o f 1. 22～ 6. 10
μg and the recovery ra te w as 98. 8%. Conclusion:The method is simple , accura te and can be used for the quality study of
Akebia tri f oliate .
Key words:Akebia tri f oliate;　Oleanolic acid;　H PLC
　　木通科木通属植物三叶木通 Akebia tri f oliata(Thunb)
Koidz的藤茎作为中药木通使用始载于《神农本草经》, 味微辛
苦 , 性寒。 具有清热利尿 、通经活络 、镇痛 、排脓 、通乳的功
效[ 1 ,2] 。研究发现 ,齐墩果酸为苷元的五环三萜类皂苷是三叶木
通主要有效成分之一[ 3] 。关木通用药标准被取消后 ,三叶木通作
为木通已在市场上逐渐恢复使用 , 为进一步研究 、资源开发和药
材质量控制提供依据 ,建立了高效液相色谱法测定三叶木通中齐
墩果酸含量的方法 ,并对不同产地三叶木通的皂苷元齐墩果酸含
量进行测定。
1　仪器与试药
Ag ilent 1100 高效液相色谱仪 , 包括:真空脱气机 、四元泵 、
自动进样器 、紫外检测器 、柱温箱 、化学工作站。
齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所 , 批号 0709—
9803)三叶木通产地见表 1 , 经四川农业大学植物教研室杨光辉
鉴定为 Akebia tri f oliata(Thunb)Koidz 茎 ,甲醇(上海陆都化学
试剂厂)为色谱纯 , 超纯水 ,乙醇 、氯仿为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件 Hypersil ODS 柱(4. 6 mm×250 mm , 5 μm), 流
动相 A:水 , B:甲醇 ,梯度洗脱 0 min:A-B(25∶75), 10 min:A-B
(10∶90), 20 min:A-B(5∶95), 检测波长:215 min ,流速:0. 8 m l
min-1柱温:20 ℃。在此条件下 , 对照品及样品的 H PLC 图谱
见图 1。
a-对照品　b-四川雅安三叶木通
1.齐墩果酸
图 1　高效液相色谱图
2. 2　溶液制备
2. 2. 1　对照品溶液的配制 精密称取减压干燥至恒重的齐墩果
酸对照品 6. 1 mg ,置 10 ml量瓶中 , 加甲醇溶解稀释至刻度即得
对照品溶液 ,浓度为 0. 61 mg min-1 。
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LISHIZH EN MEDICINE AND MA TERIA MEDICA RESEARCH 2005 VOL. 16 NO. 8 时珍国医国药 2005 年第 16 卷第 8 期
2. 2. 2　供试品溶液的制备 采自各地的三叶木通多年生茎 , 60℃
烘干 ,粉碎过 40 目筛 ,称取 5. 000 g , 50%乙醇 50 m l、功率 1 200
W超声 30 min 后过滤 , 再加 50 ml 超声 10 min , 合并提取液 ,
70℃减压浓缩至干 ,加 1. 5 mol L-1H2 SO 4 液 50 ml沸水回流水
解 4 h 后 , 加氯仿 15 ml再回流 15 min , 冷却后分液 , 用 50 ml氯
仿萃取 ,合并氯仿液 , 减压回收氯仿至干 , 加甲醇溶解并定容至
25 ml备用。
2. 3　线性关系考察 齐墩果酸对照品溶液分别以 2. 0 , 4. 0 , 6. 0 ,
8. 0 , 10. 0μl进样分析 ,按上述色谱条件测定峰面积 , 以对照品进
样量(mg)为横坐标 X , 峰面积值为纵坐标 Y , 得回归方程:Y =
4. 933 3×105 X-4. 484 0×107 , r=0. 999 9。结果表明齐墩果酸
在 1. 22 ～ 6. 10 μg与其峰面积呈良好的线性关系。
2. 4　精密度实验 用对照品溶液重复进样 5 次 , 每次 5 μl , 齐墩
果酸峰面积值 RSD为 0. 25%。
2. 5　重复性实验 取四川雅安产三叶木通样品 5 份 ,按供试品液
方法制备 ,在上述色谱条件下进样测定 , 根据峰面积值 ,计算齐墩
果酸的 RSD 为 1. 02%。
2. 6　稳定性实验 将样品溶液室温放置 1 , 2 , 3 , 4 , 8 h 后分别进
样测定 ,结果样品溶液在 8 h 内稳定 , 齐墩果酸峰面积 RSD 为
0. 63%(n=5)。
2. 7　加样回收率实验 称取已测得齐墩果酸含量的四川雅安产
样品 2. 5 g ,共 9 份 , 每 3 份为 1 组 , 每组分别准确加入齐墩果酸
对照品 10. 0 , 15. 0 , 20. 0 mg , 按上述供试品溶液制备方法处理
后 ,各进样 5 μl , 测定峰面积 ,结果每组齐墩果酸的平均回收率分
别为 101. 2%, 98. 2%, 97. 1%, RSD 分别为 1. 3%, 0. 8%,
1. 5%。 3 组平均回收率为 98. 8%(n=9)。
2. 8　样品的测定 对照品与供试品溶液各 5 μl进样 , 按上述色
谱条件测定 ,用外标法计算出样品中齐墩果酸含量。结果见表
1。
3　讨论
3. 1　波长的选择 在200 ～ 400 nm 范围内进行光谱扫描 , 发现齐
墩果酸在 203 nm 处有最大吸收 ,但考虑到噪音导致的基线不稳 ,
因此将 215 nm 作为测定波长。
3. 2　流动相的选择 样液中的未知杂质与齐墩果酸的极性相差
不大 ,用单一的各种比例的流动相均无法将其很好的分离 , 本法
采用梯度洗脱 ,能将其在 15 min 内完全分离。
表 1　三叶木通中齐墩果酸的含量测定结果 m g g-1
产地 N 1 N 2 N 3 x
四川平武 4. 065 0 4. 120 2 4. 206 4 4. 130 5
四川巴中 3. 185 0 3. 0134 3. 022 8 3. 073 7
四川雅安 5. 767 7 5. 704 5 5. 602 1 5. 961 4
四川宜宾 5. 660 3 5. 401 7 5. 214 9 5. 425 6
四川广元 4. 414 4 4. 348 4 4. 325 6 4. 362 8
贵州遵义 2. 951 2 3. 001 6 3. 017 6 3. 020 1
湖北荆门 5. 109 4 4. 951 7 4. 947 6 5. 002 9
3. 3　提取方法的选择 比较了回流 、超声和冷浸等提取方式 , 结
果表明超声提取率高 ,且操作简便 , 因此选用超声提取法;紧接着
采用正交试验对超声提取过程中的超声功率 、超声时间和溶剂乙
醇浓度进行了考察 , 结果表明:20 倍 50%乙醇溶液 、1 200 W 超
声 30 min ,齐墩果酸的提取率最高。
3. 4　水解方法的选择 考察了水解酸浓度和水解时间对齐墩果
酸含量的影响 ,结果表明 1. 5 mo l L-1 H2 SO 4 液 50 ml沸水回流
水解 4 h 齐墩果酸得率最高。
参考文献:
[ 1 ] 　吴贻谷.中华本草[ M] .上海:上海科学技术出版社 , 1999:128-128.
[ 2 ] 　黄泰康 ,丁志遵 ,赵守训 ,等.现代本草纲目[ M ] .北京:中国医药科
技出版社 , 2000:411-412.
[ 3 ] 　王　晔 ,鲁　静 ,林瑞超. 三叶木通藤茎的化学成分研究[ J] . 中草
药 , 2004 , 35(5):495-498.
收稿日期:2004-12-20;　修订日期:2005-03-26作者简介:朱敏英(1968-),女(汉族),湖北利川人 , 现任湖北民族学院医学院讲师 ,硕士学位 ,主要从事中药炮制学及民族药研究工作.
地蜂子在土家族医药中的使用
及其镇痛作用的实验研究
朱敏英
(湖北民族学院医学院 ,湖北 恩施　445000)
摘要:地蜂子是土家族医药中使用比较广泛 、具有较高影响的民间草药。针对地蜂子的使用在土家族 、苗族集居地进行
了广泛的调查 ,对其在临床上的主要应用进行了总结 , 并对其抗炎作用进行了初步的实验性研究。实验表明地蜂子对二
甲苯所致小鼠耳廓肿胀 ,小鼠腹腔毛细血管通透性 、角叉菜胶致大鼠胸膜炎等急性炎症 , 对小鼠棉球肉芽肿等慢性炎症
均有抑制作用 ,为临床更科学地使用芎黄散提供了实验依据。
关键词:地蜂子;　民族医药;　实验研究;　抗炎作用
中图分类号:R285. 6　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2005)08-0748-02
　　地蜂子在土家族 、苗族医药中具有比较广泛的影响 ,属常用
民间草药。别名:狼牙委陵菜 、铁秤砣(四川 、重庆)、铁钮子 、山蜂
子 、三爪金 、播丝草 、地蜘蛛 、铁枕头(贵州)。性味苦 、涩 、凉 , 入
心 、肝经 ,功能活血散瘀 、消肿止痛 、清热解毒。在土家族 、苗族医
药中主要以小单方使用 , 治疗红肿热痛 、牙龈肿痛 、疮痈湿症 、水
火烫伤以及胃病等 ,有意想不到的独特疗效。
1　植物形态
地蜂子 , 多年生草本植物。药用始载于《浙江民间常用草
药》, 为蔷薇科植物三叶委陵菜 Potenti lla f reyniana Bo rnm 的
根。原植物高约 30 cm ,三出复叶。基生叶的小叶椭圆形 、矩圆
形 、或斜卵形 , 长 1. 5 ～ 5 cm , 宽 1 ～ 2 cm , 基部楔形 , 边缘有钝锯
齿 ,近基部全缘 , 下面沿叶脉处有较密的柔毛 ,叶柄细长 ,有柔毛;
茎生叶小叶片较小 ,叶柄短或无;托叶卵形 ,被毛。总状聚伞花序
顶生 ,总花梗有柔毛 , 花梗上有小苞片 ,花小 , 少数 , 黄色 , 花瓣 5 ,
倒卵形 ,顶端微凹;雄蕊 、雌蕊多数 , 花柱侧生。瘦果小 , 黄色 , 卵
形 ,无毛 , 有小皱纹 。花期 4 ～ 5 月。生于向阳山坡或路边草丛
中。因主根短而粗 ,状如蜜蜂帮在民间习称“地蜂子” 。分布于湖
北 、湖南 、四川 、重庆 、贵州 、江苏 、浙江等地[1] 。
2　民间使用调查
针对该药的使用 ,笔者在恩施自治州 、铜仁地区以及重庆市
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时珍国医国药 2005 年第 16 卷第 8期 LISH IZHEN MEDICINE AND MA TERIA MEDICA RESEARCH 2005 VOL. 16 NO. 8