全 文 ：2009年 11月第 26卷第 6期
November2009, Vol.26, No.6
收稿日期: 2008-08-18
作者简介:韦翠萍 (1984-　), 女 , 硕士研究生
通讯作者:叶木荣 , 男 , 教授;e-mail:pharm3@gzhtcm.edu.cn
文章编号:1007-3213 (2009)06-0539-04
牛大力对小鼠免疫功能的影响
韦翠萍 1 , 　刘丹丹 1 , 　唐立海 1 , 　刘亮锋 1 , 　赖　平 1 , 　王　艳 2 , 　叶木荣1
(1.广州中医药大学中药学院 , 广东广州　510405;2.山西中医学院 , 山西太原　030027)
摘要:【目的】观察牛大力水提液对小鼠免疫功能的影响。 【方法】选用 SPF级 KM小鼠 , 通过计算小鼠脾脏指数 、 胸腺指
数 、 廓清指数和采用血清溶血素试验法 、 二硝基氯苯诱导小鼠迟发型变态反应试验法 , 观察高 、 中 、 低剂量牛大力 (剂量
分别为 20、 10、 5 g· kg-1· d-1)对正常小鼠免疫调节的影响。通过测定免疫抑制小鼠 (灌胃给予 40 mg· kg-1· d-1醋酸
泼尼松)脾脏指数 、 胸腺指数以及廓清指数 , 观察高 、 中 、 低剂量牛大力 (剂量同前)对免疫低下小鼠免疫调节的影响。
【结果】牛大力对正常小鼠脾脏指数 、 胸腺指数以及廓清指数均无显著性影响 , 但能不同程度地增加免疫低下小鼠的脾脏
指数 、 胸腺指数及廓清指数 (P<0.05或 P<0.01)。牛大力能显著提高小鼠血清溶血素含量 (P<0.05), 不同程度抑制
小鼠迟发型皮肤过敏反应 , 但差异无显著性意义 (与模型组比较 , P>0.05)。 【结论】牛大力能不同程度地提高正常小鼠
和免疫功能低下小鼠的免疫功能。
关键词:牛大力 /药理学;　免疫功能低下 /中药疗法;　溶血素 /血液;　疾病模型 , 动物;　小鼠
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A
　　牛大力 (RadixMiletiaeSpeciosae), 载于
《陆川本草 》, 为蝶形花科植物美丽崖豆藤 Miletia
speciosaChamp的干燥根。功能清肺止咳 , 清凉解
毒 , 用于治疗咳血 , 痢疾 , 温病身热口渴 , 头昏
等 。本实验观察了不同剂量牛大力水提液对小鼠免
疫功能的影响 , 现报道如下。
1　材料与方法
1.1　动物　SPF级 KM小鼠 , 体质量 18 ～ 22 g,
雌雄各半;SPF级豚鼠 , 体质量 250 ～ 300 g, 均由
广州中医药大学实验动物中心提供 。合格证号:
SCXK粤 2003-0001。
1.2　药物与制备　醋酸泼尼松片由广东华南药业
有限公司生产 (批号:071104)。牛大力购于广州
致信中药饮片有限公司 (批号:070701), 制备方
法:取牛大力干燥药材 , 用 10倍体积的蒸馏水浸
泡 1 h, 加热煮沸 2h, 趁热过滤 , 残渣再加 6倍体
积的蒸馏水 , 加热煮沸 1 h, 合并 2次滤液 , 浓缩
至 1 g/mL浓度备用 , 用时加蒸馏水稀释至所需浓
度 。
1.3　试剂与仪器 　二硝基氯苯 (DNCB)由上海
试剂一厂生产 (批号:20000101), 丙酮由天津市
红岩化学试剂厂生产 (批号:2006730)。 UNI-
CO7200型光栅分光光度计由尤尼柯上海仪器有限
公司提供 , LDZ5型离心机由北京医用离心机厂生
产 , AnkeTGL-16G型高速离心机由上海安亭科学
仪器厂生产 , WGP-450型隔水式电热恒温培养箱
由上海跃进医疗器械厂生产 。
1.4　牛大力对正常小鼠免疫器官质量的影响[ 1-2]
　取 KM小鼠 60只 , 随机分为 5组:空白组 , 醋
酸泼尼松组 (剂量为 40 mg· kg-1· d-1), 牛大力
高 、中 、低剂量组 (剂量分别为 20、 10、 5 g·
kg-1· d-1)。每天灌胃给药 1次 , 连续给药 12 d。
末次给药 1 h后 , 将小鼠脱颈椎处死 , 称体质量 ,
取脾脏和胸腺 , 用电子天平称质量 , 计算脾脏和胸
腺指数 (w):w脾 =m脾 /mbody, w胸腺 =m胸腺 /mbody。
1.5　牛大力对正常小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的
影响[ 1-3] 　分组及给药方法同 1.4。于末次给药
1 h后 , 各鼠尾静脉注射 50 g/L中华墨汁生理盐水
液 10 mL/kg, 于注射墨汁后 2min及 12min, 用毛
细玻璃管从小鼠眼眶后静脉丛取血 2 ～ 3滴 , 吸
20 μL溶于 1g/LNa2CO3 3mL溶液中 , 摇匀 , 于分
光光度计 680 nm处测吸光度 (D)值 , 计算廓清
指数 (IK)∶IK =(logD2 -logD12)/(t12 -t2)(D2 、
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JournalofGuangzhouUniversityofTraditionalChineseMedicine
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D12分别为 2 min、 12 min时的吸光度 , t12、 t2分别
为时间 12min、 2 min)。
1.6　牛大力对免疫低下小鼠免疫器官质量的影
响 [ 4] 　取 KM小鼠 60只 , 随机分为 5组:空白组 ,
模型组 , 牛大力高 、 中 、 低剂量组 , 给药剂量同
1.4项下。除空白组外 , 其他各组小鼠上午灌胃给
予 40 mg·kg-1· d-1醋酸泼尼松 , 空白组给予等容
积的蒸馏水 , 下午牛大力组小鼠灌胃给予相应药
物 , 空白组和模型组灌服等容积的蒸馏水 , 连续
12 d。末次给药 1h后 , 处死小鼠 , 按 1.4项下方
法计算脾脏指数与胸腺指数。
1.7　牛大力对免疫低下小鼠单核巨噬细胞吞噬功
能的影响 [ 4 -5] 　分组及给药方法同 1.6项下 。按
1.5项下方法检测 IK。
1.8　牛大力对鸡红细胞致小鼠血清溶血素抗体形
成的影响[ 6] 　在鸡血中加入 5倍体积的灭菌 Alsev-
er溶液 , 离心洗涤 , 用生理盐水配成体积分数 5%
生理盐水鸡红细胞混悬液 。补体的制备:将 2只豚
鼠心脏采血 , 离心后分离血清 , 用 10倍生理盐水
稀释。取 KM小鼠 72只 , 随机分为 6组:空白组 ,
模型组 , 醋酸泼尼松组 (剂量为 40 mg· kg-1 ·
d-1), 牛大力高 、 中 、 低剂量组 (给药剂量同 1.4
项下)。除空白组外 , 各组小鼠先腹腔注射体积分
数 5%生理盐水鸡红细胞混悬液 0.2 mL进行免疫 ,
然后灌胃给药 1次 , 连续 12 d。末次给药后 1 h,
眼眶静脉取血 , 3 000r/min离心 10 min, 取 30 μL
血清用生理盐水稀释 100倍 , 取稀释后的血清
1 mL, 与体积分数 5%生理盐水鸡血细胞混悬液
0.5mL、体积分数 10%补体 0.5mL混合 , 在 37℃
恒温箱中保温 30 min后 , 0℃冰箱中止反应 , 然后
离心 , 取上清液于分光光度计 540 nm处比色 , 测
D值 , 另设不加血清的空白对照 , 取其上清液作为
比色时调零的基准。
1.9　牛大力对 DNCB致小鼠迟发型皮肤过敏反应
的影响 [ 1, 7] 　取 KM小鼠 60只 , 随机分为 5组:模
型组 , 醋酸泼尼松组 , 牛大力高 、 中 、 低剂量组
(给药剂量同 1.4项下)。首次给药后 , 用脱毛剂
(硫化钡加水调成稀糊状)脱去背部颈毛 , 次日于
脱毛的颈部皮肤上滴 100 g/LDNCB丙酮溶液 20
μL/只致敏。小鼠每天灌胃给药 1次 , 连续 14 d。
末次给药后 1 h, 各鼠脱去腹部毛后滴 25 g/L
DNCB丙酮溶液 30μL/只进行攻击。 24h后 , 尾静
脉注射 10 g/L伊文斯蓝溶液 10mL/kg。 30min后 ,
脱颈椎处死小鼠 , 剪取腹部蓝染皮肤 , 剪碎 , 用
1∶1丙酮和生理盐水混合液 5 mL浸泡 24 h, 3 000
r/min离心 10 min, 取上清液于分光光度计 610nm
处比色 , 测定 D值 。
1.10　统计学方法　采用 SPSS11.5统计软件进行
分析。用单因素方差分析进行统计学显著性分析 。
组间差异显著性采用单因素方差分析中的 LSD方
法进行多重比较检验。
2　结果
2.1　牛大力对正常小鼠脾脏指数 、 胸腺指数及廓
清指数 (IK)的影响　表 1结果显示 , 牛大力高 、
中 、低剂量组对正常小鼠脾脏指数 、 胸腺指数及 IK
无显著性影响 , 与空白组比较差异均无显著性意义
(P>0.05)。
表 1　牛大力对正常小鼠脾脏指数 、 胸腺指数及
廓清指数的影响 (x±s)
Table1　EffectofRMSonspleenindex, thymusindex,
carbonclearanceindexinnormalmice
组别 N ω脾脏 /(mg·g-1)
ω胸腺 /
(mg· g-1) IK
空白组 12 3.065±0.897 2.688±0.781 0.0199±0.0082
牛大力高
剂量组 12 3.581±1.291 2.727±0.933 0.0200±0.0048
牛大力中
剂量组 12 3.525±0.767 2.957±0.996 0.0285±0.0050
牛大力低
剂量组 12 3.681±0.809 2.510±0.980 0.0227±0.0073
醋酸泼尼
松组 12 2.336±0.907 1.451±0.515
② 0.0137±0.0028①
　　①P<0.05, ②P<0.01, 与空白组比较
2.2　牛大力对免疫低下小鼠脾脏指数 、 胸腺指
数及廓清指数的影响　表 2结果显示 , 与空白组
比较 , 模型组小鼠的脾脏指数 、 胸腺指数与廓清
指数均显著降低 (P<0.01), 表明醋酸泼尼松致
免疫低下模型成功 。牛大力高 、 中 、 低剂量组均
能显著提高免疫低下小鼠的脾脏指数 , 与模型组
比较差异有显著性意义 (P<0.01)。牛大力低 、
中剂量组能显著提高免疫低下小鼠的胸腺指数
(P<0.05或 P<0.01), 而高剂量组与模型组比
较差异无显著性意义 (P>0.05)。牛大力高 、 中
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第 6期
剂量组均能显著提高模型小鼠的廓清指数 (P<
0.05)。
表 2　牛大力对免疫低下小鼠脾脏指数 、 胸腺指数及
廓清指数的影响 (x±s)
Table2　EfectofRMSonspleenindex, thymusindex,
carbonclearanceindexinimmunodepressivemice
组别 N ω脾脏 /(mg· g-1)
ω胸腺 /
(mg· g-1) IK
空白组 12 9.081±2.390 4.440±0.376 0.0407±0.0054
模型组 12 4.971±0.910① 3.422±0.713① 0.0287±0.0073①
牛大力高
剂量组 12 7.979±1.783
③ 4.036±0.854 0.0367±0.0057②
牛大力中
剂量组 12 7.707±1.835
③ 4.363±0.501③ 0.0377±0.0066②
牛大力低
剂量组 12 7.685±1.393
③ 4.193±0.699② 0.0346±0.0094
　　①P<0.01, 与空白组比较;②P<0.05, ③P<0.01, 与模型
组比较
2.3　牛大力对鸡红细胞所致小鼠血清溶血素抗体
形成的影响　表 3结果显示 , 小鼠经鸡红细胞免疫
后 , 血清溶血素抗体增多 , 即模型组血清 D值显
著高于空白组 (P<0.01)。与模型组比较 , 牛大
力中 、 低剂量组均能显著增加血清溶血素含量 (P
<0.05), 牛大力高剂量组有增加血清抗体的趋势 ,
但与模型组比较差异无显著性意义 (P>0.05)。
表 3　牛大力对鸡红细胞所致小鼠血清溶血素
抗体形成的影响 (x±s)
Table3　EffectofRMSonserumhemolysinlevel
inmiceofdiferentgroups
组 别 N D(λ=540nm)
空白组 12 0.0410±0.097
模型组 12 0.8430±0.4493①
醋酸泼尼松组 12 0.2891±0.1923③
牛大力高剂量组 12 1.0963±0.1284
牛大力中剂量组 12 1.2251±0.0100②
牛大力低剂量组 12 1.2693±0.1297②
　　①P<0.01, 与空白组比较;②P<0.05, ③P<0.01, 与模型
组比较
2.4　牛大力对 DNCB致小鼠迟发型皮肤过敏反应
的影响　表 4结果显示 , 牛大力高 、 中 、 低剂量组
均能不同程度抑制小鼠迟发型变态反应 , 但与模型
组比较差异无显著性意义 (P>0.05)。
表 4　牛大力对 DNCB致小鼠迟发型皮肤
过敏反应的影响 (x±s)
Table4　EffectofRMSonDNCB-induceddelayed-type
hypersensitivityinmiceofdiferentgroups
组 别 N D(λ=610nm)
模型组 12 0.4581±0.1541
醋酸泼尼松组 12 0.3224±0.0743①
牛大力高剂量组 12 0.4146±0.0622
牛大力中剂量组 12 0.3371±0.1170
牛大力低剂量组 12 0.4245±0.1334
　　①P<0.05, 与模型组比较
3　讨论
机体免疫功能状态对很多疾病有重要影响。研
究表明清热药能增强免疫能力 , 抑制变态反应。胸
腺是 T淋巴细胞分化成熟的中枢免疫器官 , 脾脏则
是体内最重要的外周免疫器官 , 也是 T、 B淋巴细
胞定居和接受抗原刺激后产生免疫应答的重要场
所 , 它们与机体的细胞免疫和体液免疫密切相关 ,
在免疫功能低下时常有胸腺和脾脏萎缩 , 体积变
小 [ 8] 。本实验结果表明 , 在醋酸泼尼松致小鼠形成
免疫抑制的条件下 , 牛大力水提液能增加小鼠胸腺
和脾脏指数 , 但对正常小鼠的胸腺指数 、 脾脏指数
无显著性影响。
本实验选用小鼠炭粒廓清实验 , 观察牛大力对
正常小鼠及免疫低下小鼠非特异性免疫的影响。中
华墨汁作为颗粒状异物静脉注射进入血循环 , 能迅
速被单核吞噬细胞清除 [ 9] 。本实验结果表明 , 牛大
力水提液对正常小鼠的廓清指数无显著性影响 , 但
可使醋酸泼尼松所致免疫低下小鼠的廓清指数显著
增加 , 即单核吞噬细胞功能明显增强 。说明牛大力
能增强机体的非特异性免疫功能 。
本实验选用血清溶血素实验 , 观察牛大力对特
异性免疫的影响。经鸡红细胞免疫的小鼠 , 可产生
溶血素即抗鸡红细胞抗体 , 这种抗体在体外与鸡红
细胞 、补体一起温育 , 即可使鸡红细胞溶解 , 释放
出血红蛋白 , 使溶液成红色 , 根据颜色的深浅 , 可
反映红细胞溶出量的多少 , 而红细胞溶血与血清中
抗体含量有关 , 测定其上清液的光密度 , 则可间接
判断血清中抗体形成的数量 [ 10] 。本实验结果表明 ,
541韦翠萍 , 等.牛大力对小鼠免疫功能的影响
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牛大力水提液能增加血清溶血素含量 , 以中 、低剂
量组效果显著 , 说明牛大力能增强机体的特异性免
疫功能 。
DNCB是一种小分子半抗原 , 可透过上皮与角
蛋白及胶原蛋白结合为全抗原 , 从而刺激 T淋巴细
胞致敏 , 使实验动物对此类物质产生过敏性 。当
DNCB第 2次攻击时 , T淋巴细胞与抗原反应释放
淋巴因子而引起组织损伤 , 继而形成迟发性皮肤过
敏反应 [ 11] 。本实验结果表明 , 牛大力水提液能一
定程度抑制 DNCB引起的小鼠迟发型皮肤过敏反
应 , 抑制 T淋巴细胞介导的特异性细胞免疫应答。
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EffectofRadixMiletiaeSpeciosaeonMiceImmuneFunction
WEICuiping1 , 　LIUDandan1 , 　TANGLihai1 , 　LIULiangfeng1 ,
LAIPing1 , 　WANGYan2 , 　YEMurong1
(1.SchoolofChineseHerbalMedicine, GuangzhouUniversityofTCM, Guangzhou510405 Guangdong, China;
2.ShanxiColegeofTCM, Taiyuan030027Shanxi, China)
Abstract:Objective　ToobservetheefectofRadixMiletiaeSpeciosae(RMS)onmiceimmunefunction.
Methods　Special-pathogenfreeKMmicewereusedastheexperimentalanimal.EfectsofRMSinhigh, middle
andlowdose(20 , 10 and5 g·kg-1·d-1 respectively)onspleenindex, thymusindex, andcarbonclearance
indexaswelasonserumhemolysinlevelanddinitrochlorobenzene(DNCB)-induceddelayed-typehypersensitivity
(DTH)innormalmicewereobserved.Meanwhile, efectsofRMSinhigh, middleandlowdoseonspleenindex,
thymusindexandcarbonclearanceindexwerealsoobservedinprednisone-acetate-inducedimmunodepressive
mice.Results　RMSincreasedspleenindex, thymusindexandenhancedcarbonclearanceindexinnormalmice,
andinhibitedDNCB-inducedDTHinthemodelmicetovariousdegrees, butthediferencewasinsignificant(P>
0.05).RMSsignificantlyenhancedserumhemolysinlevelinthemodelmice(P<0.05), andincreasedspleen
index, thymusindexandcarbonclearanceindexinimmunodepressivemice(P<0.05orP<0.01).Conclusion
　RMScanimprovetheimmunefunctioninnormalandimmunodepressivemicetovariousdegrees.
Keywords:RADIXMILLETTIAESPECIOSAE/pharmacology;　IMMUNEHYPOFUNCTION/TCDtherapy;
HEMOLYSIN/blood;　DISEASEMODELS, ANIMAL;　MICE
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