全 文 ：收稿日期:2007-08-12;　修订日期:2007-12-20
基金项目:黑龙江省普通高等学校骨干教师创新能力资助计划(No.
1054G054)
作者简介:杨　波(1962-),女(汉族),黑龙江佳木斯人 ,现任绍兴文理学
院化学化工学院药学系教授 , 学士学位 ,主要从事天然药物研究与开发
工作.
黄花败酱总皂苷胶囊中齐墩果酸的含量测定
杨　波1, 2 ,徐丽云 2 , 沈德凤1
(1.佳木斯大学化学与药学院 ,黑龙江 佳木斯　154007;
2.绍兴文理学院化学化工学院 ,浙江 绍兴　312000)
摘要:目的 建立一种黄花败酱总皂苷胶囊质量控制的定量方法 。方法 采用薄层色谱扫描法。以石油醚 -醋酸乙酯(3
∶1)为展开剂 , λS=530 nm,参比波长 λR=700nm, SX=3。结果 此系统分离效果好 ,斑点前后无杂质干扰 , 适于定量分
析。黄花败酱胶囊中含齐墩果酸 1.655 mg/g。结论 该方法灵敏 、简便 、准确 , 可用于该制剂的含量测定。
关键词:黄花败酱总皂苷胶囊;齐墩果酸;薄层扫描法
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)07-1618-01
TheQuantitativeDeterminationofOleanolicAcidinPatriniascabiosaefoliaFischTotal
SaponinCapsule
YANGBo1, 2 ,XULi-yun2 , SHENDe-feng1
(1.ColegeofChemistryandPharmacology, JiamusiUniversity, Jiamusi, Heilongjiang154002, China;2.Phar-
maceuticalDepartmentofColegeofChemistryandChemicalEngineering, ShaoxingColegeofArtsandSci-
ences, Shaoxing, Zhejiang312000, China)
Abstract:ObjectiveTodevelopamethodforthequantitativedeterminationofoleanolicandinPatriniascabiosaefoliaFischto-talsaponingleationcapsule.MethodsTLCSmethodwassetupwithligarine-ethylacetate(3∶1)asthemobilephase, λS=530nm, λR=700nm, SX=3.ResultsThecontentofoleanolicacidwas1.6554 mg/g.ConclusionThemethodissensitive, simple,specificandaccurateforthedeterminationofoleanolicacidinPatriniascabiosaefoliaFischtotalsaponincapsule.
Keywords:PatriniascabiosaefoliaFisch;　Oleanolicacid;　TLCSmethod
　　黄花败酱系败酱科(Valerianceae)败酱属植物黄花败酱
PatriniascabiosaefoliaFisch的根 、根茎或带根全草。具有清热解
毒 、排脓破淤之功效。可用于治疗肠痈 、下痢 、赤白带下 、产后淤
滞腹痛 、目赤肿痛 、痈肿疥癣等症 [ 1] 。文献报道其具有镇静催
眠 、抗菌 、抗病毒 、抗肿瘤 、升白 、防治骨类疾病等多方面药理作
用 [ 2] 。其抗肿瘤作用的主要有效成分是总皂苷类化合物 , 其中 ,
单糖链皂苷的作用最强 [ 3] 。因此 , 我们将黄花败酱根及其根茎
经提取 、水解 、纯化等步骤制备成单糖链总皂苷的胶囊剂 ,其皂苷
中的苷元为齐墩果酸和常春藤皂苷元。为了保证药效 、控制药品
质量 , 本实验采用薄层色谱扫描法对其中的齐墩果酸进行了定性
鉴别和含量测定。
1 　仪器和试剂
日本 CS-9301PC型薄层扫描仪(日本岛津),定量点样毛细
管 , 硅胶 H(青岛海洋化工厂), 齐墩果酸对照品 (中国药品生物
制品检定所), 黄花败酱胶囊(实验室自制), 所有试剂均为分
析纯。
2 　方法与结果
2.1　供试品溶液制备 取胶囊内容物约 0.5 g, 精密称定。加
10%硫酸溶液 10 ml, 于水浴中回流加热 1 h, 放冷 , 置分液漏斗
中 , 用 15 ml醋酸乙酯分 3次萃取 , 分取醋酸乙醋层 , 合并 , 水浴
蒸干 , 加少量醋酸乙酯溶解残渣 , 转入 10 ml容量瓶中 , 用醋酸乙
酯定容 , 作为供试品溶液。
2.2　对照品溶液的制备 精密称定齐墩果酸对照品 , 加入醋酸乙
酯制成每毫升含有 1 mg的对照品溶液。
2.3　薄层条件 薄层板为含 0.3%羧甲基纤维素钠的硅胶 H板 ,
石油醚 -醋酸乙酯(3:1)为展开剂 , 预饱和 15 min, 展开 , 取出 ,
晾干 , 喷 10%硫酸乙醇溶液 , 置 105℃干燥箱烘约 10 min至呈紫
红色斑点 ,取出 , 在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板 ,周围用胶布
固定。
2.4　层析及结果 取硅胶 H板 , 按薄层色谱法 [ 4]实验。吸取上
述供试品 、对照品溶液各 4 μl分别点于同一硅胶 G薄层板上 , 按
上述展开系统展开 15 cm,取出晾干 ,喷以 10%浓硫酸乙醇溶液。
于 105℃烘 10 min供试品色谱中与对照品色谱相应的位置上有
相同颜色的斑点。
2.5　含量测定
2.5.1　扫描条件 双波长反射法锯齿扫描 λS=530nm, λR=700nm, SX=3。
2.5.2　线性关系考察 用定量毛细管分别精密吸取齐墩果酸对
照品溶液 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0 μl点于同一块硅胶 H薄层板
上 , 展开。取出 , 晾干 , 喷以显色剂 , 烘烤 10 min到出现紫色斑
点 , 按上述条件展开 , 扫描测定其峰面积 ,以齐墩果酸的量为横坐
标 , 以斑点峰面积积分值为纵坐标作图 , 绘制标准曲线。得回归
方程为 Y=123.0X+8.693, r=0.998 0 (n=5)。结果表明 , 点
样量在 2.0 ～ 6.0 μg范围内 , 浓度和峰面积线性关系良好。
2.5.3　精密度及重复性 同一点测定齐墩果酸RSD=1.29%(n
=5);异板测定 RSD=2.8%(n=5);同板测定 RSD=1.72%(n
=5)。
2.5.4　稳定性实验 精密吸取齐墩果酸对照品溶液和供试品溶
液 5 μl点于同一块薄层板上 ,展开 , 显色后每隔 30 min测定 1次
峰面积 。结果在 2 h内斑点面积值基本稳定。齐墩果酸对照品
RSD=0.14%,供试品溶液 RSD=0.08%。
2.5.5　回收率实验 精密称取已知含量的样品 3份 , 加入一定量
的齐墩果酸。按供试品溶液的制备方法操作 , 依法测定 , 计算回
收率为 99.02%, RSD为 1.66%。结果见表 1。
2.5.6　样品含量测定结果 精密吸取 3份供试品溶液 5μl,
齐墩果酸 4 , 6μl, 分别交叉点于同一硅胶 H薄层板 , 进行扫描
测定 , 用外标二点法计算供试品溶液中齐墩果酸含量 。结果
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 7期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.7　
见表 2。
表 1　回收率实验结果
编号 样品量m/g
齐墩果酸
的量 m/mg
加入齐墩果
酸的量 m/mg
测得值
m/mg
回收率
(%)
平均回
收率(%)
RSD
(%)
1 0.506 3 0.838 1 0.200 0 1.034 98.05
2 0.506 0 0.837 6 0.200 0 1.036 99.15 99.02 1.66
3 0.505 9 0.837 1 0.200 0 1.037 99.85
表 2　黄花败酱胶囊中齐墩果酸的含量测定结果
编号 样品量m/g
齐墩果酸
含量 m/mg·g-1
平均含量
C/mg· g-1
RSD
(%)
1 0.503 5 1.639
2 0.505 0 1.661 1.655 1.49
3 0.506 4 1.667
3　讨论
近年来研究认为 , 黄花败酱单糖链皂苷有抗肿瘤作用。我国
黄花败酱野生资源十分丰富 ,本项研究将黄花败酱根及其根茎经
提取 、水解 、纯化等步骤制备成单糖链总皂苷的胶囊剂。采用薄
层色谱扫描法对其皂苷的苷元进行定性和定量鉴别 ,为黄花败酱
胶囊的质量控制提供了可靠的定性 、定量方法。
用薄层扫描法测定齐墩果酸的含量 , 对于薄层展开剂的选
择 , 根据文献资料 , 先后试用了多种展开剂 , 石油醚 -醋酸乙酯
(3∶1)系统分离效果好 , Rf值适中 , 斑点前后无杂质干扰 , 适宜
于定量分析。
用 10%浓硫酸乙醇液显色后的板易褪色 ,所以必须在显色
后 , 盖上同样大小的一块玻璃板 , 四周用胶布密封 ,尽快在短时间
内扫描 ,以确保数据的准确性 , 减少误差。
只要严格按拟订方法操作 ,就能得到满意结果。实验表明 ,
本法的回收率高 、重复性好 、方法稳定 ,对产品的质量控制可行。
参考文献:
[ 1 ] 　江苏新医学院.中药大辞典 , 上册 [ M] .上海:上海科技出版社 ,
1986:1340.
[ 2 ] 　王瑞俭 ,孙宝民.黄花败酱的药理研究与临床应用 [ J] .长春中医学
院学报 , 1997, 13(62):46.
[ 3 ] 　毛金军 ,王丽敏 ,张明远 , 等.黄花败酱提取物抗肿瘤作用的实验
观察 [ J] .黑龙江医药科学 , 2004, 5:38.
[ 4 ] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ 部 [ S] .北京:化学工业出版社 ,
2000:附录 35.
收稿日期:2007-09-04;　修订日期:2007-12-28
基金项目:江苏省自然科学基金和江苏省高校自然科学基金(No.
2004048, 06KJB360085)
作者简介:耿劲松 (1983-),女(汉族),江苏灌云人 ,现任南通大学医学院
医学信息学教研室助教 ,硕士学位 ,主要从事神经系统疾病研究工作.
＊通讯作者简介:周爱玲 (1951-),女(汉族),江苏海安人 ,现任南通大学
医学院病理生理学教研室教授 ,硕士研究生导师 ,主要从事神经退行性疾
病发病机制及防治研究工作.
脑益康对阿尔茨海默病大鼠中枢胆碱能系统酶的影响
耿劲松 , 周爱玲＊ ,胡亚娥 , 朱　燕 , 茅家慧 , 施海燕
(南通大学医学院 ,江苏 南通　226001)
摘要:目的 观察中药复方脑益康对阿尔茨海默病(Alzheimersdisease, AD)大鼠中枢胆碱能系统的保护作用。 方法 采
用脑立体定位仪自双侧基底前脑 Meynert核(nucleusbasalisofMeynert, NBM)注射鹅膏蕈氨酸(Ibotenicacid, IBO)建立
AD大鼠模型 , 分别给予不同剂量脑益康对 AD大鼠进行治疗 ,测定不同组实验大鼠脑组织乙酰胆碱酯酶(acetylcholinest-
erase, AChE)、丁酰胆碱酯酶(butyrocholinesterase, BuChE)活性及胆碱乙酰转移酶(cholineacetyltransferase, ChAT)在基
底前脑的表达。结果 脑益康能抑制脑组织 AChE和 BuChE的活性;改善基底前脑 ChAT阳性神经细胞形态并增加其数
量。结论 脑益康通过促进 ChAT表达 ,增加乙酰胆碱(acetylcholine, ACh)的合成;通过降低脑组织 AChE和 BuChE的活
性 , 抑制 ACh分解;从而增加脑内 ACh含量 ,改善 AD大鼠的学习 、记忆障碍。
关键词:脑益康;　阿尔茨海默病;　乙酰胆碱酯酶;　丁酰胆碱酯酶;　胆碱乙酰转移酶
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)07-1619-03
EffectsofNaoYikangonEnzymesofCentralCholinergicSysteminRatswithAlzheimersDisease
GENGJin-song, ZHOUAi-ling,HUYa-e, ZHUYan, MAOJia-hui, SHIHai-yan(MedicalColegeofNantongUniversity, Nantong226001, China)
Abstract:ObjectiveToobservetheprotectiveefectsofNaoYikang(NYK)oncentralcholinergicsysteminratswithAlzheimersdisease(AD).MethodsBilateralinfusionsofIbotenicacid(IBO)intonucleusbasalisofMeynert(NBM)usingstereotaxicap-
paratuswasadoptedtoestablishtheratmodelofAD.NYKatdifferentdosagehasbeenadministeredtoADrats.Theactivitiesofbrainacetylcholinesterase(AChE)andbutyrocholinesterase(BuChE)aswelasthemorphologyofcholineacetyltransferase
(ChAT)-positivecelsinthebasalforebrainweredetected.ResultsNYKcouldinhibittheactivitiesofAChEandBuChE, im-
provethemorphologyandincreasethenumberofChAT-positivecellsaswel.ConclusionNYKmaybeabletoincreasethesyn-
thesisofacetylcholine(ACh)throughelevatingtheexpressionofChAT, inhibitthedegradationofAChbyinhibitingtheactivitiesof
AChEandBuChE, thuselevatingthelevelofAChinratsbrainandimprovetheabilityoflearningandmemory.Keywords:NaoYikang;　Alzheimersdisease;　Acetylcholinesterase;　Butyrocholinesterase;　Cholineacetyltransferase
　　阿尔茨海默病(AD)是发生在老年前期或老年期 ,与年龄相 关的神经系统退行性疾病。 AD的发病机制极其复杂 , 病因学尚
不清楚 , 且无特效治疗或逆转疾病进展的药物 , 其病理生理机制
及防治研究是近年来神经科学领域的研究热点之一。
祖国传统中医药理论对 AD有独到的认识 , 认为 AD属中医
学 “呆证”“善忘”等病的范畴。中药复方脑益康由制首乌 、知母 、
石菖蒲等组成。制首乌是祖国医学中一种古老的用于延年益寿 、
益脑调心的药物;中药知母能显著上调脑 M1 -毒蕈碱型乙酰胆
碱受体密度 , 且上调的幅度和改善记忆之间存在明显的正相
关 [ 1];石菖蒲有改善记忆 、扩张血管 、降压等作用。脑益康有效
成分多 , 药理作用广泛 ,可以多层次 、多靶点地发挥治疗作用 。本
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.7 时珍国医国药 2008年第 19卷第 7期