全 文 ：收稿日期:2008-12-12;　修订日期:2009-03-16
基金项目:江苏省自然科学基金(No.BK2006156)
作者简介:万元松(1982-), 男(汉族), 江苏淮安人 , 现为南京工业大学
2006级硕士研究生 ,学士学位 ,主要从事中药制剂与药品质量研究工作.
＊通讯作者简介:杨文革(1968-), 男(汉族),河北邯郸人 , 现任南京工业
大学制药与生命科学学院副研究员 , 学士学位 ,主要从事新药研究与开
发 、天然产物化学成分研究工作.
高效液相色谱法测定肠泰颗粒中齐墩果酸含量
万元松1 ,杨文革 1＊ ,黄一平2
(1.南京工业大学制药与生命科学学院 ,江苏 南京　210009;
2.江苏省中医药研究院中药新型给药系统应用技术重点实验室 ,江苏 南京　210028)
摘要:目的 建立肠泰颗粒中齐墩果酸的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法 , 以 KromasilKR100-C18柱(4.6mm×250 mm, 5μm)为分离柱 , 甲醇∶水∶冰乙酸∶三乙胺(85 ∶15∶0.04∶0.02)为流动相 ,检测波长为 220nm。结
果 齐墩果酸进样量在在 2.04 ～ 10.2μg范围内线性关系良好 , 相关系数为 0.999 2, 平均回收率为 98.60%, RSD=
1.76%。结论 方法可靠 、简单可行 ,为控制肠泰颗粒的质量提供了科学依据。
关键词:肠泰颗粒;　齐墩果酸;　高效液相色谱
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)10-2445-01
HPLCDeterminationofOleanolicAcidinChangtaiGranule
WANYuan-song1 ,YANGWen-ge1＊ ,HUANGYi-ping2
(1.ColegeofLifeScienceandPharmaceuticalEngineering, NanjingUniversityofTechnology, Nanjing210009,
Jiangsu, China;2.JiangsuProvincialKeyLaboratoryofNewDrugDeliverySystem＆ AppliedTechnologyof
ChineseMateriaMedica, Nanjing210028, China)
Abstract:ObjectiveTodevelopamethodfordeterminationofoleanolicacidinChangtaiGranule.MethodsHPLCwascarriedoutonaKR100-C
18
(4.6 mm×250 mm, 5μm)usingMeOH-H
2
O-HOAc-TEA(85∶15∶0.04∶0.02)asthemo-
bilephase, andthedetectionwavelength220nm.ResultsThestandardcurvewaslinearintherangeof2.04 ～ 10.2.μg.The
averagerecoveryandRSD% were98.60% and1.76%.ConclusionThismethodisaccurate, reliableandprovidesascientific
indexforthequalitycontrolofChangtaiGranule.
Keywords:ChangtaiGranule;　Oleanolicacid;　HPLC
　　肠泰颗粒是江苏省中西医结合医院王小宁院长的临床经验
方 ,由白花蛇舌草、薏苡仁等 7味中药材组成, 用于大肠癌的术后
辅助治疗 ,效果显著。本制剂的有效成分齐墩果酸具有护肝 、解肝
毒 、降糖降脂 、抗炎抗病毒 、抗癌等作用 [ 1] ,齐墩果酸的抗癌作用几
乎贯穿了肿瘤发展的各个阶段 ,包括抑制肿瘤的生成 、诱发以及诱
导细胞的分化 , 能有效地抑制肿瘤血管的生成、肿瘤细胞的侵袭和
转移 [ 2] , 可作为衡量制剂质量的指标之一。用于齐墩果酸的含量
测定方法很多, 较早应用比色法 、中和法 , 操作复杂 , 显色误差较
大 ,对酸性杂质无分辨力和选择性 ,所以近年来已少应用。薄层扫
描法应用广泛 , 高效液相(HPLC)法有操作快速和准确性高的优
势 ,正在取代其它方法。本文采用高效液相色谱法测定方中齐墩
果酸的含量, 为肠泰颗粒的质量标准研究奠定基础 [ 3] 。
1 　仪器与试药
1.1 　仪器 Agilent1100高效液相色谱仪(美国 Agilent公司);
HH-6数显恒温水浴锅(金坛市丹瑞电器厂);AB135S十万分之
一天平(METTLER公司);DHG-9240型电热恒温鼓风干燥箱
(上海一恒科技有限公司);RE-52AA旋转蒸发器(南京金正数
字仪器有限公司)。
1.2　试药 齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所 , 批号为
110709 -200304), 乙醇(分析纯 ,南京化学试剂厂), 95%医用乙
醇 , 水为乐百氏纯净水 ,乙腈 、甲醇(色谱纯 , 美国天地公司)。肠
泰颗粒(江苏省中医药研究院中药制剂室自制)。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 [ 4] 色谱柱为 KromasilKR100-C18柱(4.6 mm
×250 mm, 5μm)(带保护柱), 流动相为甲醇∶水∶冰乙酸:三
乙胺(85 ∶15∶0.04∶0.02), 流速 0.5 ml· min-1 , 检测波
长 220 nm,柱温 20 ℃, 进样 15 μl。图谱见图 1 。
a-对照品溶液　b-供试品溶液 　c-阴性对照溶液
图 1　HPLC色谱图
2.2　对照品溶液的制备 精密称取齐墩果酸对照品 2.04 mg,
置 10ml量瓶中 ,用甲醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀 ,即得(每毫升
含齐墩果酸 0.204 mg)。
2.3　供试品溶液的制备 取肠泰颗粒(批号 071224)6g,置于具
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.10 时珍国医国药 2009年第 20卷第 10期
塞三角瓶中 , 加甲醇 50 ml, 密闭超声 30 min,补足重量 , 滤过 ,取
续滤液 25ml, 水浴挥干溶剂 ,残渣用甲醇溶解并定容至 5 ml,摇
匀 , 0.45μm滤膜滤过。
2.4　阴性对照品溶液的制备 取处方中缺白花蛇舌草等含齐墩
果酸的药材 , 制成阴性对照颗粒 , 取阴性对照颗粒按供试品溶液
制备法制得阴性对照溶液。
2.5　线性关系考察 精密吸取对照品溶液 10 , 15 , 20 , 25 , 40,
50 μl分别进样测定。以对照品进样量(μg)为横坐标 ,峰面积积
分值为纵坐标 , 绘制标准曲线得回归方程 Y= 363.19X -
74.10, r=0.999 2, 齐墩果酸在 2.04 ～ 10.2 μg范围内线性关系
良好。
2.6　精密度实验 精密吸取齐墩果酸对照品溶液重复进样 5次。
峰面积积分值 RSD为 1.27%, 表明仪器精密度良好。
2.7　重复性实验 取肠泰颗粒(批号 071224)5份 ,每份 6 g, 按供
试品溶液制备方法 , 制得供试品溶液 , 按上述色谱条件进行测
定 , 测得供试品中含齐墩果酸含量 RSD=1.31,表明重复性较好。
2.8　稳定性实验 取同一供试品溶液 , 分别在 0, 3, 6, 9, 12 h进
样 , 峰面积积分值 RSD为 2.37 %,表明样品稳定性良好。
2.9　回收率测定 取肠泰颗粒(批号 071224)6份 , 每份 3 g,分
别加入精密称取的齐墩果酸 1.035 mg,按 “ 2.3”项下同法处理。
按上述色谱条件进行测定。计算其回收率。结果见表 1。
2.10　含量测定 取 4批样品 , 按上述 “ 2.3”方法操作 , 制备供试
品溶液 , 按上述色谱条件进行测定。结果见表 2。
3　讨论
流动相曾选择乙腈 -磷酸盐缓冲液体系 、甲醇 -水体系 [ 5] 、
分离效果均不好 , 最后选用甲醇 -水 -冰乙酸 -三乙胺体系 ,分
离效果最好 , 达到基线分离。
表 1　齐墩果酸回收率实验结果( x±s)
样品中齐墩果
酸含量C/mg
添加齐墩
果酸 /mg
测得齐墩果
酸的量 C/mg
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
1.024 1.035 2.031 97.28
1.042 1.035 2.091 101.39
1.035 1.035 2.050 98.02 98.60 1.76
1.041 1.035 2.052 97.61
1.031 1.035 2.067 100.10
1.008 1.035 2.014 97.18
表 2　齐墩果酸含量测定结果( x±s)
批号 含量 C/mg· g-1 平均值 C/mg· g-1 RSD(%)
071224 0.340
080702 0.338 0.338 1.10
080708 0.337
080715 0.333
实验过程中 ,曾比较了索氏提取与超声提取 , 结果含量基本
一致 , 但索氏提取耗时较长 , 超声提取时间较短 , 易操作 , 所以采
用超声提取的方法。
参考文献:
[ 1 ] 　田丽婷 ,马　龙 ,堵年生.齐墩果酸的药理作用研究概况 [ J] .中国
中药杂志 , 2002, 12(27):884.
[ 2 ] 　杜　瑜 ,李焕德.齐墩果酸的研究进展 [ J] .中国药房 , 2006, 17(4):
304.
[ 3 ] 　王德仁.齐墩果酸研究新进展 [ J].天津药学 , 2003, 15(3):56.
[ 4 ] 　兰保强 , 邱宏聪 ,覃　潇.HPLC法测定复方护肝颗粒中齐墩果酸
的含量 [ J] .中医药学报, 2007, 35(1):47.
[ 5 ] 　邹盛勤., RP-HPLC法同时测定不同采收期连翘中乌索酸和齐墩
果酸的含量 [ J] .沈阳药科大学学报 , 2007, 24(3):164.
收稿日期:2008-12-30;　修订日期:2009-03-22
基金项目:山东省中医药管理局课题(No.2005-115)
作者简介:张　栋(1974-),男(汉族),山东青岛人 ,现任青岛市海慈医疗
集团主治医师 ,硕士学位 ,主要从事中西医结合肿瘤的防治工作.
＊通讯作者简介:孙　静(1975-), 女(汉族),山东青岛人 , 现任山东中医
药大学讲师 ,博士学位 ,主要从事中西医结合肿瘤的防治工作.
益气养阴方对小鼠肝癌血道转移的影响
张　栋 1 , 孙　静2＊
(1.青岛市海慈医疗集团 ,山东 青岛　266033;　2.山东中医药大学 ,山东 济南　250307)
摘要:目的 观察益气养阴方对小鼠肝癌血道转移的影响。方法 小鼠经尾静脉接种 H22肝癌细胞悬液后 14 d, 观察中药
对荷瘤小鼠的肺部转移瘤生长情况影响等。结果 益气养阴方组的肺部转移结节较模型组明显减少 , 中药组明显改善化
疗对机体的免疫损伤。结论 益气养阴方对 H22肝癌血道转移有一定的抑制作用 , 并且增强机体的免疫功能。
关键词:益气养阴方;　H22腹水型肝癌;　血道转移
中图分类号:R285.5　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2009)10-2446-02
　　经血道转移是大多数恶性肿瘤转移的重要途径之一。临床
上中医药在改善肿瘤患者生存质量 ,延长带瘤患者生存时间以及
减少远处转移灶发生等方面具有独特的优势 , 已成为肿瘤的手
术 、放疗 、化疗 、生物疗法之外的另一重要治疗大法 , 探索中医药
在防治肿瘤转移的作用受到越来越广泛的重视。益气养阴方在
临床抗肿瘤转移治疗中多有应用 ,但动物实验对于益气养阴方的
抗肿瘤转移研究目前尚无报道。 为了进一步了解益气养阴方抗
肿瘤转移的疗效及作用机理 ,本实验根据以往对益气养阴方的抗
肿瘤转移的筛选工作结果 ,通过其对腹水型 H22肝癌小鼠血道转
移的抑制作用进行了观察研究。现报道如下。
1　材料
1.1　瘤株及动物 小鼠腹水型 H22肝癌瘤株 , 由山东省医学科学
院药物所肿瘤室提供。昆明种小鼠 30只 , 体质量(20 ±2)g, 雌
性 , SPF级 , 由山东中医药大学实验动物中心提供(动物合格证
号:SCXK鲁 20030004)。
1.2　药品 益气养阴方中药由建联中药店提供 , 经山东中医药大
学中药专家鉴定质量符合实验要求。注射用环磷酰胺(cytoxan,
CTX),规格:200 mg/支 ,批号:031002,上海华联制药有限公司产
品。
2　方法
2.1　转移模型的建立 选取接种 7 d的腹水瘤小鼠 6只 , 各抽吸
腹水 1 ml,放入无菌容器中混匀。 D-Hanks液洗涤 3次 ,台盼蓝
染色 , 计数肿瘤细胞存活率 >95%。参考文献 [ 1]调整细胞浓度为
5×106 cell· ml-1 ,每只小鼠尾静脉注射细胞悬液 0.2 ml。
2.2　分组与给药 实验小鼠随机分为 3组 , 每组各 10只 , 分别
为:模型对照组(简称造模组)、益气养阴方组(简称中药组)、环
磷酰胺对照组(简称西药组)。造模组小鼠每天灌胃生理盐水
0.1 ml/10 g;常规方法制备益气养阴方水煎液 , 浓缩至相当于原
生药材 4.3 g/ml药液 ,冷却装入灭菌药瓶 , 置 4℃冰箱备用。 按
人鼠等效剂量换算给药 , 中药组小鼠分别每天灌胃中药水煎液
0.1 ml/10 g。西药组给予临床常用化疗药物环磷酰胺腹腔注射
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 10期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.10