全 文 ：L ISH IZ于IE N M E D IC IN E A N l jM A T E R IA M E D IC A I之E SE A R C H 1 9 9 9 V O L . 1 0 N O . 6 时珍国医国药 1 99 9年第 10 卷第 6期
薄层扫描法测定延寿片中齐墩果酸含量
杨安东 徐学民
四 川省 中药研究所 , 成都 61 。。 41
提要 采用 、 波长薄层扫描法测定延 寿 片中齐墩果酸的含童 。 方法简便易行 ,平 均回 收率 98 . 7 % ,尸￡ , ~ 1 . 84 % 。
关键词 薄层扫描法 ; 齐墩 果酸 ; 延寿片
T L C D e n s i t o m e t r i e D e t e r m i n a t i o n o f o l e a n o l i e A c i d i n Y a n s h o u T a b e l l a e
Y a n g A n d o n g
,
X u X u e m i n
S ie h u a n I n s t i t u t e o f C h i n e s e M a t e r ia M e d ie a
,
C h e n g d u 6 1 0 0 4 1
A b s t r a C t A
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K e y w o r d s
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一
C 一 d e n s it o m e t r y 15 r e p o r t e d . T h e
r a p id
.
T h
e a v e r a g e r e e o v e r y r a t e 15 9 8
.
7 7%
,尸 5 口 = 1 . 4 8 % .
T I
J
C 一 d e n s i t o m e t r y ; ( ) le a n o l ie a e id ; Y a n s h o u t a b e lla e
延寿片是由女贞 子 、 制首乌等 5 味常用 中药组成 , 具有补 肾助
阳 、 填精补髓 、 益气 固本 之功效 。 为 了控制其质量 、 保证疗效 , 本文
采用双波长薄层扫描 方法 . 测定 了延 寿片中齐墩果酸的含量 。
1 仪器与药品
C S 一 9 3 0 薄层 扫描 仪 ( 日本 岛津 ) , P BQ 一 I 型 薄层 自铺板 器
( 重庆南岸新力电器厂制造 ) : 齐墩果酸对照品 ( 购 自中国药品生物
制品检定所 ) ;硅胶 G (薄层层析 用 , 青岛海洋化工厂出品 ) ; 其它化
学试剂均为分析 纯 。
2 对照品溶液及供试品溶液的制备
2
.
1 对照品贮备液 的配制 :精 密称干燥至恒 重的齐墩果酸 (对照
品 ) 3 0 m g , 置 25 m l 量瓶中 , 加氯仿溶解并稀释至刻度 , 摇匀 , 即得
对照品贮备液 。
2
.
2 供试品 液的制备 : 取 延寿 片 2 0 片 . 除去糖衣 , 准确称重 . 研
细 . 精密称 出 3 . 0 9 , 置 2 5 0 m l 圆底烧瓶 中 . 依次加水 30 m l , 浓盐
酸 s m l , 氧仿 s o m l 。 于 水浴 上加热 回流水解 s h , 冷却 , 分 出氛仿
液 . 酸水液再加氯仿 30 r l . 加热 回流 30 m ln 冷却 , 分 出氯仿 液 , 合
并氯仿液 , 回 收溶 剂 , 残余物转 至 25 m l 容量瓶 中 . 用氯仿溶解 , 稀
释 至 刻度 。
3 实验条件
3
.
1 薄层条件
薄层板 : 硅胶 G , 以 0 . 5 % C M C 一 N a 为 粘合剂 . 湿 法铺板 , 板
厚 0 . 5 m m , 1 1 0 C 活化 3 0 m in ;
展开剂 : 苯一醋 酸乙酷 ( 7 : 3 ) . 展距 1 5 c m ;
显 色 : 10 %浓硫 酸乙 醇溶液 为显 色剂 1 10 C 加热 5一 7 m in 显
色 。 齐墩 果酸 斑 点 呈 红 色 火了值 为 0 . 6 5 . 且 能 与 熊果 酸 沂了值
()
.
5 5) 等其它组分很 地好分离 。
3
.
2 仪器条件 : 薄层板 显 色后 , 在 4 0 0 一 7 5 0 n m 范围内对齐墩果
酸斑点进行扫描 , 在 53 0 n m 处 有最大 吸收 , 7 0 0 n m 有最 小吸收 。
故确定舫 5 3 0 n m 、 汉r 7 0 0 n m . 反射锯齿法扫描 , 叹丫 一 3 . 狭缝 1 . 2
m rn 只 1 . 2 m m .
4 线性关系
精密吸取对照品贮 备液 1 、 2 、 3 、 4 、 s m l各置 s m l量瓶中 , 以氯
仿稀释至刻度 , 得浓 度为 0 . 2 5 6 科 g / 1 1、 0 . 5 1 2 2: g / 拜l 、 0 . 7 6 8 拜g /拌l 、
1
.
02 4 拌 g /川、 1 . 28 。 拜g /川的对照 品溶液 , 用定量 毛细 管分别精密
吸取 4 闪点于 同一薄层 板上 , 展开后挥 干溶剂 、 显色 . 按上述仪器
条件扫描 , 测定吸收度积分值 A , 结果见表 1 。
表 1 对照品吸收度积分值的测定
C (拜 g ) 0 2 4 2
,
0 4 8 3
.
0 7 2 4
.
0 9 6
A 4 0 2 4 6
.
7 9 67 4 5 4
.
0 2 95 4 5 1
.
2 6 1 2 3 2 4 8
.
5 0 1 4 6 0 4 5
.
7 4
点样 量 ( y 在 1 . 0 24 一 5 . 1 2 0 拌g 间与 吸收度积分值 (X ) 呈良
好 的 线性关系 , 回 归方程 为 : y ~ 3 . 82 5 x 1 o 一势 一 0 . 54 2 , z -
。 . 9 9 9 3 。 由于 标准曲线未通过原点 , 宜按外标两点法计算含量 。
5 精密度考察 :
5
.
1 仪器精密度 : 薄层板上精密点样 (对照品溶液 . 浓度为 1 . 280
拌 g /川)4 川 , 展开后挥干溶剂 , 显色 、 对同一块薄层板上齐墩果 酸斑
点重复测定 6 次 。 结果见表 2 。
表 2 仪器精密度试验
N O 1 2 3 4 5 6
A 14 3 1 2 4
.
3 4 l 4 8 9 6 4
.
7 2 1 4 4 2 l 9
.
5 8 l 4 3 8 5 3
.
1 4 l 4 4 7 2 9
.
6 2 l 4 8 2 3 4
.
6 8
由表 2 可见X 一 14 5 52 1 . 01 ,尸 5力 一 1 . 69 % . 仪器精密度好 。
5
.
2 板上精 密度 : 在 同一薄层 板上精 密点样 (对照品溶 液 )4 川.
共 6 点 . 展开 . 晾干 , 显色 , 测定 。 结 果见表 3 。
表 3 板上精密度试验
N O 1 2 3 4 5 6
A 1 4 6 9 0 5 0 l 14 3 8 2 0
.
8 7 l 4 82 2 7 3 3 1 4 8 3 7 4
.
1 6 1 4 5 8 7 6
.
8 2 1 5 0 5 4 7
.
6 3
由表 3 可见 ,无 ~ 1 4 7 291 . 97 , 掀5刀 ~ 1 . 57 % , 板上精密度好 。
6 方法的重现性及稳定性考察
6
.
1 重现性试验 : 在 6 块薄 层板上分 别精 密点样 ( 对照品溶液 )4
闪 , 展开 、 挥干溶 剂后 显色 , 测定 , 结果见表 4 。
表 4 重现性试验结果
N O 1 2 3 4 5 6
A 1 4 6 3 9 4
.
6 1 l 4 7 2 7 2 7 9 l 4 4 9 3 0
.
8 4 1 4 6 9 8 0 3 6 1 4 6 10 1
.
7 6 1 4 5 3 6 9
.
7 4
由表 4 可 知 : 元~ 14 61 75 . 0 , 尸人刀 ~ 0 . 6 2 % , 方法 的重现性很
好 。
6
.
2 稳定性考察 :精密吸取浓度 0 . 2 5 6 拜g扣 l , 0 . 5 1 2 拌g扭 l , 1 . 0 2 4
拌 g /川的对照品溶液各 4 闪 , 点于 同一薄层板上 , 展开后挥去溶剂 .
显色 、 间隔 3 0 m in 测定 l 次 , 结果 见表 5 。
4 0 7
时珍国医国药 1 9 9 9年第 10 卷第 6期 L IS H IZ H E N M E D IC I N E A N D M A T E R I A M E D IC A R E S E A RC H 1 9 9 9 V O L . 1 0 NO . 6
刺五加对辐射损伤后小鼠胸腺影响
张明溪①
① 湖北黄石高等 专科 学校 4 3 5 0 0 3
戎诚兴②
② 湖北医科大学 , 武汉 4 3 0 0 7 1
提要 用组织 学和 组织化学方法探讨刺五加对 60 co 一了射线照射后所致小 鼠胸腺损伤的影响 。 结果 :胸腺皮质淋 巴细胞
对辐射损伤敏感性明显 高于髓质 。 刺 五加能加速胸腺淋 巴细胞的持续恢复 , 促进骨髓干细胞增技并迁拄胸腺 , 保 证 了胸腺淋 巴
细 胞正常增殖功能
关键词 刺五加 ; “ o co 一 下射线 ; 胸腺
刺五加与人参同属 .其根 、 茎 是主要药用部分川 。 它含多种 与 次 处死 3 只 , 用 药组 、 盐 水组 第 3 、 7 d 各 10 只 , 第 17 、 25 d 各 12
人参相似的有效成份 . 如刺五加贰 、刺 五加 多糖 、 多种微量元素等 。 只 , 取胸腺 。
近代研究表 明 , 刺 五加的 固本 强壮功 用主要机理 可能是其有效成 1 . 4 观察指标
份能促 进葡萄糖 6一磷酸合成 . m R N A 修 复 , 刺激 细胞再 生 , 诱导 1 . 4 . 1 常规 H E 染 色观察 : 每 蜡块隔 50 张切片取 l 张 , 共取 5 张
干扰素 , 增强单核吞噬细胞系统的吞噬能力 和提高机体免疫能力 。 作 H E 染色 、 组织化学 染色备用 。 H E 染色后 , 在 10 0 倍光镜下每 片
本实验用组织学和 组织 化学 方法观察 刺五加对 肋 C 。 一 丫射线照射 随机测量 3 处 胸腺皮质厚度 ; 4 0 0 倍镜下计淋 巴 细胞数 . 分别求 出
后所致 小鼠胸腺 的变化 . 并探讨其机理 。 均数 。
1 材料和方法 1 . 4 . 2 免疫母 细胞观察 : 甲基绿 派若宁法显示 R N A 。
1
.
1 实验动物 : 成年小 鼠 1 10 只 ( 雌雄随机 ) . 体重 20 ~ 2 5 9 。 分 3 1 . 4 . 3 分别取第 17 、 25 d 胸腺组织 0 . 1 9 , 制成 2 %的胸腺组织匀
组 : 正常组 10 只 ; 用药组 、 生理盐 水组 ( 简称盐水组 )各 50 只 。 浆 , 用生物化学方法提取 D N A , 二苯胺法测定 D N A 中脱氧核糖 .
1
.
2 实验药品 :刺五加注射 液 , 黑龙江省完达 山制药厂生产 , 每安 确定胸腺组织 中 D N A 含量 。
瓶 20 ml , 每 m l 相 当 1 9 生药 ;注射 用无 菌 ’ L理盐 水 。 2 结果
1
.
3 方法 2 . 1 H E 标本观察 (见表 l 、 表 2)
1
.
3
.
1 照射 方法 : 将 小 鼠分装 于特别 有小方格的有机 玻璃盒 中 , 正常组小 鼠胸腺 组织结构与人相似 , 有不对称的左右两叶 。 被
使用湖北 医科大学 附二 医 院姑机进行 一 次性均匀 全身照射 。 总剂 膜深人实质将胸腺分 隔成许多胸腺小 叶 。 每小叶皮质位于周边 , 分
量 4 G .y 剂量率 1 . 2 5 G y/ m ln . 照射时间 3 n n n , 距离 6 0 c m 。 隔 ; 髓质位于中间连成一片 。 皮质主要 由大量 密集淋 巴细胞和上皮
1
.
3
.
2 用药组 :受 照后 Z h 开始注射稀 释刺五加注 射液 (按 2 0 9 性 网状细胞组成 , 髓质则 由大量上 皮性 网状细胞 和少量淋巴 细胞
生药 / k g 计算 )0 . 35 ~ 一。 . 巧 I二 l/ (d · 只 ) , 连续给药 Zo d 。 组成 。 皮质 (染色深 )与髓质 (着色浅 ) 界线明显 。
1
.
3
.
3 盐水组 : 时间同 匕 . 注射生理盐水 . 与用药组等量 。 受 照后第 3 d , 两组小 鼠胸 腺皮质 淋 巴细 胞大量减 少 . 以 致皮
1
.
3
.
4 正常组 : 不受 “丫 。 一了 射线照射 . 喂养条件 同前两组 。 质 、 髓质界 线不 清 。 髓质淋 巴 细 胞未见 减 少 。 两 组 差异 无显著性
各组分 别在 第 3 、 7 、 1 7 、 25 d 分 4 批颈椎脱 臼处死 。 正 常组 每 ( P > 0 . 0 5 ) 。
, `父亚义亚又几丫 。 交立义泛义它义 履义立父 亚戈丈 , 应夕心又右夕 应义 亚夕 女又泣又立夕 亚又应又立 又立又立又丈夕立又立又交又友又交夕立又亚又立又交父立交驻交应夕友戈凌义丈戈丈又女又立又泣
表 三 显色后稳定性试验结果
鹰愿;。 石代57〕 ( % )1 2 0 m 一 n
今`止Oq八J一汤0
.
2 5 6
0 5 1 2
1
.
0 1 4
3 9 9 6 3
.
8 2
6 7 6 5 6
.
3 8
2 2 7 5 5
.
4 8
4 0 卜! 居 . 35
` 7 9才了. 吧 )(J
1 2 2 8丁污. 26
10 0 1 5 5 6
6 73 15 6 7
」2 艺3 8G . 7 7
3 9 5 2 4
6 7 4尔」
1 2 2 6 二l
3 9 44 5 1 7
6 6 58 5
.
60
1 20 7 9 3
.
0 6
1 0 3
0
.
7 5
0
.
7 0
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介j,J
比081433,d八八勺曰Jnj竹O
一é
由表 5 可 以看 出 . 斑点显色后在 Z h 内是稳定的 。
7 加样回收率试验
准确称 取已 知含量 的延寿 片细 粉 1 . 0 9 . 共 4 份 . 其中 l 份作
空 白 ·另 3 份分别 加对照 品 1 0 、 1 5 、 2 0 m g . 按供试品溶液制备方 法
制备样品液 。 精密 吸取样 品液 和浓 度为 0 . 2 5 6 ,, g /浏、 1 . 2 8 拜 g /川
的对照品液各 4 闪 . 点 寸 同 一薄 层板上 , 展 开 , 挥 干溶刊 . 显 色 . 测
定齐墩 果酸斑点 的吸收 度积分值 . 并计算其含 量 、 加样 回 收率及其
R S D
。 结果见表 6 。
表 ` 加样回收率试验结果
精密 吸取浓度为 0 . 25 6 拜g /讨、 1 . 2 8 拜 g /闪的 对照品溶液和供
试品溶液各 4 川 . 点 于同一薄层 板上 , 展层 及 显色后在 Z h 内测定
吸收度积分值 , 按外标两点法计算含 量 , 结果见表 7 。
表 7 3 批样品中齐墩果酸含量测定结果
批 号 茹聋吞 对照品吸 收度积分 值0 . 25 6 拜 g /户 试品吸收度积分值 侧得齐墩果酸量 (拜g J 齐墩果酸最 ( m g )每 片值 平均值
9 20 40 1 0
.
3
9 20 40 2 0 3
9 20 40 3 0
.
3
4 0 1 2 7
.
6 0
3 9 9 2 6
.
8 9
4 0 4 8 7 9 3
3 9 7 2 6 3 2
3 9 9 6 7 7 1
4 0 0 0 7 2 2
4 0 3 2 8
.
2 4
4 0 2 4 7
.
9 8
4 0 4 8 8
.
1 4
1
.
2 8 拜 g /卜 l
14 5 6 9 8
`
1 5
14 6 4 2 6
.
5 7
14 5 84 7
.
5 6
14 5 60 6
`
7 5
1 4 4 9 6 9
.
6 6
14 3 30 9 0 0
1 4 6 18 9
.
1 8
14 6 0 4 3
.
5 7
1 4 5 98 9
.
4 0
14 4 3 19
.
2 4
14 15 15
.
0 2
14 33 4 9 7 1
14 0 8 0 6
.
4 4
14 2 1 58
.
7 5
13 66 (又 . 7 1
14 25 0 9
.
5 8
14 36 86
.
1 8
14 68 0 8
.
9 5
5 0 6 6 5
4 9 3 1 1
5
.
0 2 2 9
4
.
9 3 4 3
5
.
0 10
4
t
85 4
4 9 8 0 8
5 0 2 8 7
5 1 5 1 8
编号 供试品 中齐墩 供试品中加 人齐 测得 齐墩果果酸量协 g ) 墩果酸量恤 g ) 酸 量恤g ) 加样
10 1
收率 ( % )
1
.
6 6 4
1
.
6 6 4
〕 . 6 6 4
3 8 8
4 0 4 2
1 8 3 6
2飞2 1
() 7 6 3
7 9
一
1 3
9 7
.
4 9
1 0 0
.
3 4
9 8 3 2
由表 6 可知 , 加样 回 收率 (平均值 ) 一 98 . 7 % . 尸汤口 一 1 . 48 %
8 样品分析
每批延 寿片 ( 2 0 片 )除去糖衣后 , 平均重量 0 . 3 9 , 每片含齐墩
果 酸 3 . 0 8一 3 . 16 m g , 符合延 寿 片质量标 准关于 齐墩果酸含 量不
得低于 3 m g 的规定 。
参考文献
1 董 林 , 李 毅 . 大孔树 脂吸 收附 一 比色 法测定逐 疲化痰汤 中人 参皂
贰 . 华西药学杂志 . 2 9 90 , 5 ( 4 ) , 2 6 1
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3 章观 德 , 周志华 , 王慕邹 , 等 . 人参的分析 I 一 人参皂贰 的测定 . 药学学
报 , 1 9 8 0 , 1 5 : 17 5 ( 19 9 8一 1 1一 1 6 收稿 )
4 0 8