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2010年第 2期
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实验技术
Optimizationontheultrasonictreatmentextractingprocessfor
chlorogenicacidfromLonicerajaponicaThunb.byorthogonaldesign
SONGDe-hua, LIANGYun-xia, YANGGuang-yu
(HeilongjiangVocationalCollegeofAnimalHusbandryandVeterinaryScience, ShuangchengHeilongjiang150111, China)
Abstract:Objective:TooptimizetheultrasonictreatmentextractingprocessforchlorogenicacidfromLonicerajaponica
Thunb..Methods:Orthogonaldesignwasusedtodeterminetheoptimumextractingprocesswiththeextractingrateofchlorogenic
acidasmakers.Results:TheultrasonictreatmentoptimumextractingprocessforchlorogenicacidfromLonicerajaponicaThunb.
wasthatadding8foldsof70% ethanol, refluxingfor30 min.Conclusion:Theextractingprocessforchlorogenicacidshowshigh
extractingrateandgoodstability.
Keywords:LonicerajaponicaThunb.;chlorogenicacid;extractingrate;orthogonaldesign;HPLC
向日葵叶抗氧化成分 24-亚甲基环木菠萝烷醇的分离提取
曾佑玲 ,吉庆发 ,易　琼 ,郭　庆 ,何炳坤 ,王　鲁
(贵州大学动物科学学院 ,贵州贵阳　550025)
　　摘　要:　通过对向日葵叶乙酸乙酯 、0.5%稀盐酸混合液提取物的氯仿萃取部分的分离纯化 ,
得到一个化合物 。经 MS鉴定其分子量为 440,为 24-亚甲基环木菠萝烷醇 ,且为首次从该植物中
分离得到 。用普鲁士蓝法以茶多酚为对照研究该化合物的抗氧化活性 。结果表明 , 24-亚甲基环
木菠萝烷醇具有抗氧化活性 ,但比同浓度茶多酚的抗氧化活性要弱。
　　关键词:　向日葵叶;24-亚甲基环木菠萝烷醇;抗氧化
　　中图分类号:S853.74　　文献标识码:A　　文章编号:1000-6354(2010)02-0040-02
　　自 20世纪 60年代起 ,国外已对向日葵属植物
地上部分的植物化学成分进行了系统研究。目前国
内对向日葵的研究热点主要集中在向日葵籽中绿原
酸和脂肪酸 ,对向日葵叶的研究主要局限在对其化
学活性成分和绿原酸 。 24-亚甲基环木菠萝烷醇最
先由 WiliamsBL从葡萄柚的果皮中分离得到 ,国
内主要在金毛狗脊 [ 1]和小油桐叶 [ 2]中分离出 ,但是
关于其化学活性的研究国内尚属空白。前期试验研
究中表明 ,向日葵叶总提取物具抗氧化活性 ,为了进
一步明确其抗氧化成分 ,笔者等对向日葵叶总提取
物进行了分离 、纯化 ,并首次成功地从向日葵叶中分
离到 24-亚甲基环木菠萝烷醇 ,同时初步探讨了其
抗氧化能力。
1　材料
1.1　材料和试剂
向日葵叶(采自贵阳某种植场),无水乙醇 、三
收稿日期:2010-01-04
基金项目:贵州大学 SRT项目 [贵大 SRT字(20)号 ]
作者简介:曾佑玲(1988-),女 , 在读本科生。通讯作者:王鲁 , E-
mail:wanglu7007@163.com
氯甲烷 、甲醇 、石油醚 、乙酸乙酯 、三氯乙酸 、盐酸 、三
氯化铁 、磷酸二氢钠 、磷酸氢二钠 、六氰合铁酸钾
(以上试剂均为国产分析纯),柱层析硅胶 、薄层层
析硅胶(青岛海洋化工有限公司),茶多酚(贵州大
学食品科学系提供 ,纯度 >95%)。
1.2　主要仪器及设备
HP5973-质谱仪(HP公司)、紫外分析仪 WD
-9403B(北京市六一仪器厂)、HH-4数显恒温水
浴锅(常州澳华仪器有限公司)。
2　方法与结果
2.1　提取与分离方法
取干燥向日葵叶 ,按每 30 g加 450 mL乙酸乙
酯和 0.05%盐酸混合溶液(4∶1)浸泡 30 min,后在
65 ℃水浴锅上回流提取 ,重复提取 2次 ,每次 3 h,
第 2次提取时盐酸用量减 1/3 ,收集提取液。总计
提取 1 050 mL,合并提取液 , 30 ℃减压浓缩至无乙
酸乙酯味 ,收集浓缩液 ,过滤 ,除去不溶物后以 60℃
减压浓缩至一半体积时 ,收集浓缩液 。按 1∶1体
积加入无水乙醇 ,静置 24h后过滤 ,滤液 40℃减
压浓缩至无醇味 , 收集浓缩液 , 加入氯仿反复萃
DOI :10.13823/j.cnki.j tcvm.2010.02.003
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实验技术
取 3次 ,收集氯仿萃取液 ,将其浓缩成膏状 ,自然
干燥至恒重 ,得样品 2.897 6 g, 收率为 0.27%,
该样品用硅胶柱色谱分离 , 经石油醚洗脱 ,然后
再用石油醚∶氯仿(10∶1)洗脱 。洗脱部分经反复
纯化后得结晶状化合物 A 0.058 6 g, 收率为
0.005 6%。
2.2　抗氧化活性评价
参考文献 [ 3] ,采用普鲁士兰法测定分离物的总
抗氧化活性 ,取试样 1 mL,加 pH值 6.6磷酸缓冲液
2.5 mL和质量分数 1%铁氰化钾溶液 2.5 mL,混
合 ,后在 50 ℃静置 20 min,加入质量分数 10%的三
氯乙酸溶液 2.5 mL混合 ,取混合液 2.5 mL, 加入
2.5 mL蒸馏水和质量分数 0.1%氯化铁 2.5 mL混
匀 ,静置 10 min。在 700 nm处测定吸光强度 ,吸光
强度越高 ,抗氧化性越好 , 还原力越强 。根据文
献[ 4]报道茶多酚浓度在 0-0.6 mg/mL内均具有良
好的量效关系。因此我们将 24-亚甲基环木菠萝
烷醇和茶多酚以甲醇做溶剂均配成 0.1 mg/mL
的浓度 ,以甲醇做阴性对照 ,每样平行测 3次 ,取
平均值 。
2.3　质谱鉴定及抗氧化活性评价
2.3.1　质谱鉴定　试样用甲醇溶解 ,用 HP5973-质
谱仪检验 ,其纯度为 99%,其 m/z:440,并与文献[ 1]
报道数据进行比对 ,证明化合物 A是 24-亚甲基环
木菠萝烷醇。
2.3.2　抗氧化能力　在 700 nm处茶多酚的吸光强
度为 0.381, 24-亚甲基环木菠萝烷醇为 0.323。
3　讨论
向日葵作为经济作物在我国农村已有广泛
的种植 ,其果盘 、花瓣 、茎叶等均可作药用 。为了
提高农产品的附加值 ,笔者等以抗氧化活性为跟
踪目标 ,对向日葵叶的抗氧化活性成分进行提取
分离 。并首次从向日葵叶中分离到 24 -亚甲基
环木菠萝烷醇 ,国外学者主要研究 24 -亚甲基环
木菠萝烷醇在植物甾醇的合成过程中所起的作
用 ,目前基本证实它是植物甾醇生物合成的环阿
乔醇路线中的重要中间体 [ 5] 。但是关于它的其
他化学性质研究较少 。该研究就其抗氧化能力进
行了初步探讨 ,发现 24-亚甲基环木菠萝烷醇具
有较强的抗氧化能力 ,但是其抗氧化能力弱于同
样浓度的茶多酚 。至于该物质是否就是向日葵
叶中的主要抗氧化物质 ,是否具有开发成为天然
抗氧化剂及功能性食品的开发资源还有待进一
步的探讨 。
参考文献:
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Extractionandisolationofantioxidantconstituent24-methylenecycloartanolfromsunflowerleaves
ZENGYou-ling, JIQing-fa, YIQiong, GUOQing, HEBING-Kun, WANGLu
(CollegeofAnimalScience, GuizhouUniversity, GuiyangGuizhou550025, China)
Abstract:Acompoundwasisolatedfromthemixtureofethylacetatewith0.5% hydrochloricacid-solubleofchloroformex-
tractsfromsunflowerleaves.IdentificationbyMSshoweditsmolecularweightwas440, for24-methylenecycloartanol, whichwas
isolatedfromthisplantforthefirsttime.ThentheantioxidantactivityofthecompoundwasstudiedbyPrussianbluemethodwithtea
polyphenolsascontrol.Theresultsshowedthat24-methylenecycloartanolhaveantioxidantactivitywhichwaslowerthanthesame
concentrationofteapolyphenols.
Keywords:sunflowerleaves;24-methylenecycloartanol;antioxidant