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风梅颗粒中齐墩果酸、熊果酸、二羟基泽兰素和腺苷的测定
伍婉媚1，2， 张 超1*
(1． 广州医科大学药学院，广东 广州 510182;2． 广州市妇女儿童医疗中心，广东 广州 510623)
收稿日期:2014-04-12
作者简介:伍婉媚 (1985—) ，女，药师，从事临床药学服务。E-mail:lunwenwuwanmei@ 163． com
* 通信作者:张 超 (1964—) ，男，副教授，从事药物化学和天然药物化学研究。E-mail:lunwenzhangchao@ 163． com
摘要:目的 建立测定风梅颗粒 (东风桔、岗梅、枇杷叶、山白芷、广东土牛膝、紫苏梗、薄荷脑)中齐墩果酸、熊
果酸、二羟基泽兰素和腺苷的方法。方法 采用高效液相色谱法。测定齐墩果酸和熊果酸的色谱柱为 Agela venusil
XBP-C18 (4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ;流动相为甲醇-0. 05 mol /L 醋酸铵溶液 (88 ∶ 12) ;柱温为室温;体积流量 1. 0
mL /min;进样量 20 μL;检测波长为 215 nm。测定二羟基泽兰素和腺苷的色谱柱为 Diamonsil C18 (4. 6 mm × 250 mm，
5 μm) ;以乙腈为流动相 A，0. 2%磷酸水溶液为流动相 B，梯度洗脱;体积流量 1. 0 mL /min;柱温为 30 ℃;检测波
长为 0 ～ 20 min时 260 nm，20 ～ 60 min 时 240 nm。结果 齐墩果酸和熊果酸线性范围分别为 2. 5 ～ 15 μg、5 ～ 30 μg
(r≥0. 999 0) ;平均回收率分别为 100. 6%和 100. 4%。二羟基泽兰素和腺苷线性范围分别为 1. 05 × 10 －2 ～ 6. 3 × 10 －2
μg、0. 101 ～ 0. 606 μg (r≥0. 999 0) ;平均回收率分别为 101. 0%、100. 3%。结论 该方法可用于风梅颗粒中齐墩果
酸和熊果酸、二羟基泽兰素和腺苷的定量测定，准确可靠。
关键词:风梅颗粒;齐墩果酸;熊果酸;二羟基泽兰素;腺苷
中图分类号:Ｒ927. 2 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2015)06-1379-04
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2015. 06. 052
风梅颗粒由东风桔、岗梅、枇杷叶、山白芷、广东土
牛膝、紫苏梗、薄荷脑 7 味中药组成，功效镇咳祛痰，用
于治疗伤风感冒，支气管炎等引起的咳嗽，被收载于《国
家中成药标准汇编》内科肺系 (二)分册，执行标准 WS-
11423 (ZD-1423)-2002［1］。但原质量标准仅对东风桔和枇
杷叶进行了简单的显色鉴别，未对处方中其他药材进行控
制。为进一步提高风梅颗粒的质量控制标准，确保用药安
全可控，本实验采用高效液相色谱法对其中用量较大的枇
杷叶和广东土牛膝的主要成分齐墩果酸、熊果酸、二羟基
泽兰素和腺苷进行测定方法研究。
1 试药与仪器
LC-20ATVP型高效液相色谱仪、SPD-20AVP 型紫外可
见检测器 (日本岛津公司) ，HW-2000 色谱工作站 (南京
千谱软件有限公司)。齐墩果酸 (纯度 98%，批号 110709-
201205)、熊果酸 (纯度 98%，批号 110742-201218)、二
羟基泽兰素 (纯度 97%，批号 2012081)、腺苷 (纯度
99%，批号 2012018)对照品，均购于上海江莱生物科技
有限公司;风梅颗粒 (自制，每袋装 10g，批号分别为
20130615、20130616、20130617) ;甲醇、乙腈 (色谱纯，
上海江莱生物科技有限公司)。
2 方法与结果
2. 1 齐墩果酸和熊果酸的测定［2-9］
2. 1. 1 对照品混合溶液制备 精密称取齐墩果酸和熊果酸
对照品适量，甲醇溶解，摇匀，即得对照品混合溶液 (齐
墩果酸质量浓度为 0. 5 mg /mL，熊果酸质量浓度为 1. 0
mg /mL)。
2. 1. 2 供试品溶液配制 精密称定本品 5. 0 g，研细，置
于具塞锥形瓶中，甲醇 10 mL 溶解，超声处理 (300 W，
25 kHz)30 min，加甲醇补足减失的质量，摇匀，微孔滤
膜 (0. 45 μm)滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
9731
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中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
June 2015
Vol． 37 No． 6
2. 1. 3 阴性供试品溶液配制 按风梅颗粒处方和工艺，制
备不含枇杷叶的阴性样品和阴性供试品溶液。
2. 1. 4 色谱条件及系统适应性 Agela venusil XBP-C18色谱
柱 (250 mm ×4. 6 mm，5 μm) ;流动相为甲醇-0. 05 mol /L
醋酸铵溶液 (88 ∶ 12) ;柱温为室温;体积流量 1. 0
mL /min;进样量 20 μL;检测波长为 215 nm。在此条件下，
齐墩果酸和熊果酸与其他组分分离效果良好，且阴性样品
无干扰。另外，以齐墩果酸和熊果酸计，理论塔板数应不
低于2 500，分离结果见图 1。
1． 混合对照品 2． 样品 3． 阴性样品 A． 齐墩果酸 B． 熊
果酸
图 1 齐墩果酸和熊果酸的 HPLC
2. 1. 5 线性范围考察 精密吸取对照品混合溶液 5、10、
15、20、25、30 μL，按“2. 1. 4”项下色谱条件测定，以
峰面积积分值 (Y)为纵坐标，齐墩果酸和熊果酸量 (X)
为横坐标分别绘制标准曲线，得到回归方程。齐墩果酸为
Y = 2. 187 4X + 1. 080，r = 0. 999 2，线性范围 2. 5 ～ 15 μg;
熊果酸为 Y = 1. 025 1X + 2. 007 9，r = 0. 999 5，线性范围
5 ～ 30 μg。
2. 1. 6 精密度试验 精密吸取“2. 1. 1”项下混合对照品
溶液 20 μL，连续进样 6 次，按“2. 1. 4”项下色谱条件，
测定齐墩果酸和熊果酸的峰面积，两者 ＲSD 分别为 0. 3%
和 0. 7%，表明仪器精密度良好。
2. 1. 7 重复性试验 精密称取批号为 20130615 的样品，
按“2. 1. 2”项下方法制备 6 份供试品溶液，分别测定齐墩
果酸和熊果酸的峰面积，两者 ＲSD 分别为 0. 5%和 0. 3%，
表明重复性良好。
2. 1. 8 稳定性试验 精密吸取批号为 20130615 的样品，
于 0、1、2、4、6、8 h 测定齐墩果酸和熊果酸的峰面积，
两者 ＲSD分别为 0. 5%、0. 5%，表明供试品溶液 8 h 内稳
定性良好。
2. 1. 9 加样回收率 分别称取批号为 20130615 的含有量
已知的样品 (齐墩果酸 9. 66 mg /袋，熊果酸 17. 68 mg /袋)
适量，精密加入另配的对照品混合溶液 1 mL (熊果酸质量
浓度为 5. 13 mg /mL，齐墩果酸质量浓度为 2. 60 mg /mL) ，
即得供试品溶液，测定，结果见表 1。可见其平均回收率
分别为 100. 6%和 100. 4%，ＲSD分别为 1. 5%和 0. 7%，符
合分析要求。
表 1 齐墩果酸和熊果酸回收率试验结果 (n =6)
称样量 /
g
样品中量 /
mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率 /
%
平均值 /
%
ＲSD /
%
齐墩果酸 2. 501 2 2. 416 2 2. 60 5. 01 102. 31
2. 503 1 2. 418 0 2. 60 5. 03 100. 19
2. 502 5 2. 417 4 2. 60 5. 09 99. 85 100. 6 1. 5
2. 508 9 2. 423 6 2. 60 5. 04 101. 26
2. 507 8 2. 422 5 2. 60 4. 98 99. 76
2. 506 2 2. 421 0 2. 60 5. 06 101. 10
熊果酸 2. 501 2 4. 422 1 5. 13 9. 52 99. 37
2. 503 1 4. 425 5 5. 13 9. 58 100. 48
2. 502 5 4. 424 4 5. 13 9. 61 101. 08 100. 4 0. 7
2. 508 9 4. 435 7 5. 13 9. 56 99. 89
2. 507 8 4. 433 8 5. 13 9. 57 100. 12
2. 506 2 4. 431 0 5. 13 9. 63 101. 35
2. 2 样品中二羟基泽兰素和腺苷的测定［10-13］
2. 2. 1 对照品混合溶液的制备 分别精密称取二羟基泽兰
素和腺苷对照品适量，流动相溶解，摇匀，即得对照品混
合溶液 (二羟基泽兰素质量浓度为 2. 1 μg /mL，腺苷质量
浓度为 20. 2 μg /mL)。
2. 2. 2 供试品溶液的制备 精密称取本品 10 g，加水 20
mL溶解，60 ℃下超声提取 30 min，乙酸乙酯萃取 2 次，
每次 10 mL，合并乙酸乙酯液，浓缩蒸至 0. 5 mL，流动相
溶解，定容至 10 mL，摇匀，微孔滤膜滤过，即得供试品
溶液。
2. 2. 3 阴性对照溶液的制备 按风梅颗粒处方和工艺，制
备不含广东土牛膝的阴性样品和供试品溶液。
2. 2. 4 色谱条件及系统适应性 Diamonsil C18色谱柱 (4. 6
mm × 250 mm，5 μm) ;以乙腈为流动相 A，0. 2%磷酸水
溶液为流动相 B，梯度洗脱 (0 ～ 20 min，22% A;20 ～ 30
min，22%A→65%A;30 ～ 60 min，65% A) ;体积流量 1. 0
mL /min;柱温为 30 ℃;检测波长为 0 ～ 20 min 时 260 nm，
20 ～ 60 min时 240 nm。在此条件下，二羟基泽兰素和腺苷
与其他组分离效果良好，且阴性样品无干扰。另外，以二
羟基泽兰素和腺苷计，理论塔板数应不低于 2500，分离结
果见图 2。
2. 2. 5 线性范围考察 精密吸取对照品混合溶液 5、10、
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Vol． 37 No． 6
A． 混合对照品 B． 样品 C． 阴性样品
1． 腺苷 2． 二羟基泽兰素
图 2 二羟基泽兰素和腺苷的 HPLC
15、20、25、30 μL，按“2. 2. 4”项下色谱条件测定，以
峰面积积分值 (Y)为纵坐标，二羟基泽兰素和腺苷量
(X)为横坐标分别绘制标准曲线，得到回归方程。二羟基
泽兰素为 Y = 4. 581 5X + 0. 858 3，r = 0. 999 9，线性范围
1. 05 × 10 －2 ～ 6. 3 × 10 －2 μg;腺苷为 Y = 0. 229 9X －
0. 393 3，r = 0. 999 5，线性范围 0. 101 ～ 0. 606 μg。
2. 2. 6 精密度试验 精密吸取“2. 2. 1”项下混合对照品
溶液 20 μL，连续进样 6 次，按“2. 2. 4”项下色谱条件，
测定二羟基泽兰素和腺苷的峰面积，两者 ＲSD 分别为
0. 4%和 0. 6%，表明仪器精密度良好。
2. 2. 7 重复性试验 精密称取批号为 20130615 的样品，
按“2. 2. 2”项下方法制备 6 份供试品溶液，分别测定二羟
基泽兰素和腺苷的含有量，两者 ＲSD 分别为 0. 9% 和
0. 7%，表明本方法重复性良好。
2. 2. 8 稳定性试验 精密吸取批号为 20130615 的样品，
于 0、1、2、4、6 和 8 h 测定二羟基泽兰素和腺苷的峰面
积，两者 ＲSD分别为 1. 0%和 1. 0%，表明供试品溶液 8 h
内稳定性良好。
2. 2. 9 加样回收率试验 分别称取批号为 20130615 的含
有量已知的样品 (二羟基泽兰素 21. 25 μg /袋、腺苷
225. 36 μg /袋)适量，精密加入另配的对照品混合溶液 1
mL (二羟基泽兰素质量浓度为 10. 51 μg /mL，腺苷质量浓
度为 113. 23 μg /mL) ，即得供试品溶液，测定，结果见表
2。可见其平均回收率分别为 100. 9%和 100. 3%，ＲSD 分
别为 1. 1%和 0. 8%，符合分析要求。
表 2 二羟基泽兰素和腺苷回收率试验结果 (n =6)
化合物
称样量 /
g
样品中量 /
μg
加入量 /
μg
测得量 /
μg
回收率 /
%
平均值/%
ＲSD /%
二羟基泽 5. 012 1 10. 651 10. 51 21. 28 101. 13 100. 9
兰素 5. 014 2 10. 655 10. 51 21. 31 101. 38 (1. 1 )
5. 002 1 10. 629 10. 51 21. 13 99. 91
5. 008 4 10. 643 10. 51 21. 09 99. 40
4. 996 3 10. 617 10. 51 21. 31 101. 74
4. 998 8 10. 622 10. 51 21. 35 102. 07
腺苷 5. 012 1 112. 95 113. 23 225. 39 99. 30 100. 3
5. 014 2 113. 00 113. 23 225. 43 99. 29 (0. 8)
5. 002 1 112. 73 113. 23 226. 71 100. 66
5. 008 4 112. 87 113. 23 227. 31 101. 07
4. 996 3 112. 60 113. 23 226. 58 100. 67
4. 9988 112. 65 113. 23 226. 75 100. 77
2. 3 样品测定 取 3 批样品按“2. 1”项和“2. 2”项下
方法测定，结果见表 3。
表 3 样品测定结果 (x ± s，n =3)
批 号 齐墩果酸 /(mg·袋 － 1) 熊果酸 /(mg·袋 － 1) 二羟基泽兰素 /(μg·袋 － 1) 腺苷 /(μg·袋 － 1)
20130615 9. 66 ± 0. 021 17. 68 ± 0. 01 21. 25 ± 0. 095 225. 36 ± 0. 95
20130616 9. 57 ± 0. 04 17. 72 ± 0. 044 20. 91 ± 0. 061 225. 35 ± 0. 21
20130617 9. 81 ± 0. 025 17. 72 ± 0. 035 20. 87 ± 0. 066 225. 62 ± 0. 095
3 讨论
3. 1 枇杷叶和广东土牛膝为风梅颗粒主要成分。枇杷叶归
肺、胃经，具有清肺止咳、降逆止呕等功效，临床上用于
肺热咳嗽、气逆喘急、胃热呕逆、烦热口渴［14-15］;广东土
牛膝为菊科泽兰属植物，有祛风、消肿、清热、解毒、行
瘀等功效，主治白喉、乳蛾、咽喉肿痛、吐血、咯血、血
淋、外伤肿痛、跌打瘀痛等症状［16-18］。另外，齐墩果酸和
熊果酸为枇杷叶主要成分，而二羟基泽兰素和腺苷为广东
土牛膝主要成分。本实验采用高效液相色谱法对风梅颗粒
中齐墩果酸、熊果酸、二羟基泽兰素、腺苷进行定量测定
方法研究，对完善本品的质量标准具有十分重要的作用，
能有效控制产品的内在质量。
3. 2 检测波长的选择 分别取齐墩果酸和熊果酸对照品适
量，加流动相溶解，制成每 1 mL含 0. 10 mg的溶液，按紫
外—可见分光光度法在 200 ～ 400 nm波长处进行紫外扫描。
结果发现，齐墩果酸和熊果酸对照品在 215 nm处均有最大
吸收，故检测波长定为 215 nm;分别取二羟基泽兰素和腺
苷对照品适量，加流动相溶解，前者制成每 1 mL含 1. 5 μg
的溶液，后者制成每 1 mL 含 8. 2 μg 的溶液，按紫外—可
见分光光度法在 200 ～ 400 nm 波长处进行紫外扫描。结果
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发现，前者在 240 nm 处有最大吸收，后者在 260 nm 处有
最大吸收，故检测波长分别定为 240 nm和 260 nm。
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Vol． 37 No． 6