全 文 ：4　讨论
本制剂中 , 黄芩苷的含量远高于绿原酸的含量 , 且用高效液
相色谱法测定其含量 ,操作简单 , 快捷。
表 4　黄芩苷加标回收率测定结果
样品含量
m/mg
加入量
m/mg
测得总量
m/mg
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
0.477 0 0.390 0 0.866 6 99.9
0.524 7 0.351 0 0.868 7 98.0
0.572 4 0.312 0 0.876 6 97.5 98.2 1.4
0.620 1 0.273 0 0.891 2 99.3
0.667 8 0.234 0 0.893 6 96.5
黄芩苷和绿原酸在 50%的甲醇中都能较好溶解 , 所以选用
50%的甲醇作提取剂。
参考文献:
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黄芩苷含量 [ J] .中成药, 2005, 27(1):96.
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原酸和黄芩苷的含量 [ J].中国医院药学杂志 , 2006:26(2):240.
收稿日期:2007-04-08;　修订日期:2007-08-15
作者简介:陈文青(1980-),女(汉族),广东梅州人 ,现为广东医学院检验
学院 2004级在读硕士研究生 ,学士学位 ,主要从事微生物与免疫学检验
研究工作.
螺旋藻多糖对免疫低下小鼠
淋巴细胞增殖及促进 IFN-γ的诱生作用
陈文青 , 吕世静 , 何　德
(广东医学院检验学院 ,广东 湛江　524023)
摘要:目的 观察螺旋藻多糖对环磷酰胺所致的免疫低下小鼠淋巴细胞增殖作用和细胞因子 IFN-γ的影响 , 探讨其对
机体的免疫调节作用。方法 选择健康的雄性昆明种小鼠腹腔注射环磷酰胺制备免疫低下小鼠模型。采用 MTT法检测
细胞增殖;酶联免疫法测定脾细胞培养上清 IFN-γ的浓度。结果 用药组小鼠脾细胞 、胸腺细胞增殖 OD值及小鼠脾细
胞培养上清 IFN-γ值与模型对照组相比均有显著性差异(P<0.05或 P<0.01)。结论 螺旋藻多糖能够促进小鼠淋巴
细胞增殖 , 并通过诱生 IFN-γ而发挥免疫调节作用。
关键词:螺旋藻多糖;　免疫低下;　淋巴细胞增殖;　γ-干扰素
中图分类号:R282.77　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)04-0941-02
TheEffectofSpirulinaplatensisPolysaccharideonLyphocyteProliferationandIFN-γ
InductioninImmunosuppressiveModelMice
CHENWen-qing, L Shi-jing, HEDe
(InstituteofLaboratoryMedicineofGuangdongMedicalColege, Zhanjiang524023, China)
Abstract:ObjectiveToobservetheeffectofSpirulinaplatensispolysaccharideonlymphocyteproliferationandIFN-γinduc-
tioninimmunosuppressivemodelmicecausedbycyclophosphamide.MethodsHealthymaleKunmingmicewereinducedtoes-
tablishimmunosuppressivemodelbytheperitonealinjectionofCyclophosphamide.MTTcolorimetrywasusedtoexaminethecel
proliferationofspleencellandthymuscel.IFN-γconcentrationofculturalsupernatantfromspleencellwasdeterminedbyen-
zymelinkedimmunosorbentassay.ResultsComparedwiththemodelgroup, thelymphocyteproliferationandIFN-γproduction
wereincreasedsignificantlyinPSPgroups(P<0.05, 0.01).ConclusionPolysaccharidefromSpirulinaplatensishasimmune
regulativeeffectbypromotingthecellproliferationandIFN-γinduction.
Keywords:PolysaccharidefromSpirulinaplatensis;　immunosuppression;　Lymphocyteproliferation;　IFN-γ
　　螺旋藻多糖(polysaccharidefromSpirulinaplatensis, PSP)是
从螺旋藻中提取的一种酸性 、水溶性的杂多糖 , 除了具有丰富的
营养价值外 , 还具有多种生物活性和免疫调节功能 , 如:抗肿瘤 、
抗病毒 、抗氧化 、抗辐射等作用 , 已成为国内外药物研究开发的热
点之一。本实验观察了 PSP对免疫低下小鼠淋巴细胞的增殖情
况及其对 IFN-γ的诱生作用 ,为阐明 PSP的免疫调节作用机制
提供实验依据。
1　器材与方法
1.1　材料
1.1.1　螺旋藻多糖的提取 采用改良的三氯乙酸去蛋白法从螺
旋藻中提取出的粗多糖 ,硫酸蒽酮法测定糖含量为 90%以上。
1.1.2　动物 昆明种小鼠(KM小鼠),雄性 , 6 ～ 8周龄 ,体重 18
～ 22 g, 由广东医学院实验动物中心提供。
1.2　试剂与仪器 RPMI-1640培养基(美国 GIBCO产品);新
生牛血清(杭州四季青生物工程研究所);ConA(Sigma公司);四
甲基偶氮唑盐(MTT, Sigma公司);ELISA试剂盒(武汉博士德生
物公司),其余试剂为国产分析纯 。酶标仪:ELx8009(BIO-TEK
公司)。
1.3 　动物模型分组 、制备及给药方法 取健康昆明小鼠 50只 ,
随机分为 5组:正常对照组(A组)、模型对照组(B组)和 3组不
同浓度螺旋藻多糖模型组(C, D, E组), 每组 10只。 A组每只小
鼠腹腔注射生理盐水 1ml/d, 连续 10 d;B, C, D和 E组每只小鼠
先腹腔注射环磷酰胺 2mg/d,连续 3d,第 4天开始分别注射生理
盐水和不同浓度的螺旋藻多糖 ,连续 7d;观察免疫低下模型组小
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.4 时珍国医国药 2008年第 19卷第 4期
鼠与正常对照组小鼠比较 , 活动度降低 、毛皮颜色较暗 、无光泽
等 , 表明造模成功。
1.4　 检测指标
1.4.1　小鼠脾细胞和胸腺细胞悬液的制备 无菌条件下拉颈处
死小鼠 , 取出脾脏和胸腺 ,去脂肪和结缔组织 ,分别放入盛有适量
RPMI-1640培养液的培养皿内 ,剪碎置于培养皿中 , 用毛玻璃轻
轻研磨 , 使细胞悬于 RPMI-1640培养液中 , 然后用 8层无菌纱
布滤出单细胞悬液 , 然后用 RPMI-1640培养液洗两次 , 将洗过
的细胞悬液悬浮于含 10%新生小牛血清的 RPMI-1640完全培
养液中 , 用 0.4%台盼蓝染料计数细胞的活细胞率为 95%以上。
1.4.2　小鼠脾细胞和胸腺细胞增殖实验 将细胞悬液接种于 96
孔培养板 , 脾细胞 2×105 /孔 、胸腺细胞 4×106 /孔 , 然后每孔加
入 5μg/mlConA50μl,六复孔培养 , 于 37℃, 5%CO2培养箱中培
养 68h后 , 加入 5μg/mlMTT10μl/孔 , 继续培养 4h,再加入三联
液 100 μl/孔 ,混匀 , 放置过夜 , 次日用酶标仪检测各孔的吸光度
OD570nm值。
1.4.3　对脾细胞产生 IFN-γ的影响 将脾细胞悬液接种于 24
孔培养板 , 5×105 /孔 , 在 37℃, 5%CO
2
培养箱中培养 48 h, 收集
上清 , 冻存于 -20℃。根据 ELISA试剂盒方法说明操作 , 测定
IFN-γ的含量。
1.5　统计学处理 用 x±s表示 , 应用 SAS8.1统计软件进行单
因素方差分析。
2　结果
2.1　螺旋藻多糖对环磷酰胺所致免疫低下小鼠脾细胞 /胸腺细
胞增殖反应的影响 结果见表 1。
表 1　螺旋藻多糖对环磷酰胺所致免疫低下
小鼠脾细胞 /胸腺细胞增殖反应的影响( x±s)
组别 脾细胞 OD 胸腺细胞 OD
正常对照 0.184±0.007 0.130±0.003
模型对照 0.112±0.005## 0.088±0.004##
低浓度药物 0.125±0.003＊＊ 0.102±0.004＊
中浓度药物 0.132±0.003＊＊ 0.112±0.004＊＊
高浓度药物 0.140±0.003＊＊ 0.120±0.003＊＊
　　与正常对照组比较 , ##P<0.01;与模型对照组比较 , ＊P<0.05,
＊＊P<0.01;n=6
表 1结果表明 , 与正常对照组相比 ,模型组小鼠的脾细胞增
殖 OD值显著降低(P<0.01),胸腺细胞增殖 OD值显著降低(P
<0.01), 说明制备免疫低下模型成功。高 、中 、低剂量螺旋藻多
糖可显著促进免疫低下小鼠脾细胞和胸腺细胞增殖(P<0.05或
0.01)。
2.2 　螺旋藻多糖对环磷酰胺所致免疫低下小鼠脾细胞产生细
胞因子 IFN-γ的影响 结果见表 2。
表 2　螺旋藻多糖对环磷酰胺所致免疫
低下小鼠脾细胞产生 IFN-γ的影响( x±s)
组别 IFN-γ/pg· ml-1
正常对照 112.33±3.08
模型对照 64.50±2.74##
低浓度药物 67.17±2.31＊
中浓度药物 77.17±2.32＊＊
高浓度药物 85.50±2.34＊＊
　　与正常对照组比较 , ##P<0.01;与模型对照组相比较 , ＊P<0.
05, ＊＊P<0.01;n=10
表 2结果表明 , 与模型组相比 , 高 、中 、低剂量螺旋藻多糖组
均可促进免疫低下小鼠分泌 IFN-γ(P<0.05或 P<0.01)
3　讨论
普遍认为多糖是一种免疫调节剂 , 具有无细胞毒性的特点 ,
来源不同的多糖对机体的免疫功能具有不同程度的免疫调节作
用 , 能够分别或同时激活 T细胞 、B细胞 、NK细胞和巨噬细胞等
免疫细胞 ,促进免疫细胞分泌细胞因子 , 增强机体的非特异性免
疫 、体液免疫和细胞免疫 , 被认为是一种重要的生物效应调节剂。
螺旋藻多糖是一种无毒性的水溶性酸性多糖 , 其分子量约为
12 000 ～ 16 000, 是由多种单糖组成的杂多糖。小鼠腹腔注射螺
旋藻多糖能明显增加脾重 ,显著促进小鼠血清溶血素的形成和提
高小鼠巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数 [ 1];螺旋藻由于其高浓度
的营养成分使其具有多种生物活性和营养作用 ,具有生物调节和
免疫调节的功能。不同的螺旋藻制剂能够影响免疫系统 ,如增加
巨噬细胞的吞噬活性 、刺激抗体和细胞因子的产生 、提高组织中
NK细胞的积聚 、提高 NK细胞的杀伤能力以及激活 、活化 T、B淋
巴细胞 [ 2, 3] 。 Al-BatshanHA等 [ 4]研究发现螺旋藻能够增强鸡
的单核巨噬细胞功能 , 从而增强鸡的抗病能力。 Hirahashi等 [ 5]
采用热水抽取法提取螺旋藻多糖 ,并研究发现其能增强 NK细胞
的杀伤能力。
胸腺和脾脏是机体的重要免疫器官。一些免疫增强剂可以
使胸腺和脾脏增重 ,而免疫抑制剂则可使其萎缩。免疫器官细胞
增殖分化受到抑制 ,就会使机体淋巴细胞总数降低 ,从而使机体
免疫功能下降。环磷酰胺是较强的烷化剂 , 可杀伤各种免疫细
胞 , 抑制各种动物的体液与细胞免疫应答 [ 6] , 使 CD4 +T细胞明显
抑制 , 导致免疫抑制小鼠 IFN-γ分泌降低。本实验结果表明 , 环
磷酰胺能够明显抑制小鼠脾细胞和胸腺细胞的增殖和脾细胞分
泌细胞因子 IFN-γ,说明制备免疫低下模型成功。运用 MTT法
检测了正常对照组 、模型组及螺旋藻多糖治疗各剂量组小鼠脾细
胞和胸腺细胞的增殖情况 ,发现用螺旋藻多糖治疗各剂量组均能
逆转由环磷酰胺引起的脾细胞和胸腺细胞增殖抑制 ,显著促进脾
细胞和胸腺细胞增殖 , 说明 PSP能明显增强环磷酰胺处理的小
鼠淋巴细胞对 ConA诱导的转化能力 , 从而提高了免疫细胞的免
疫活性 。
IFN-γ是一种主要由 Th1细胞分泌或旁分泌的细胞因子 ,
可通过活化 NK细胞和细胞毒性 T细胞 , 发挥抗病毒 、抗肿瘤和
免疫调节等生物活性。 PSP能够促进环磷酰胺处理的小鼠脾淋
巴细胞 IFN-γ的分泌 ,说明 PSP可以通过调节细胞因子的分泌
而影响机体的免疫功能。
本实验研究结果表明螺旋藻多糖通过增强机体淋巴细胞增
殖功能和影响细胞因子的分泌来调节机体免疫系统 ,有助于进一
步说明 PSP的免疫调节作用机制 , 对 PSP进一步的开发利用提
供了实验依据。
参考文献:
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