全 文 ：Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology，2015 March，Vol． 26 No． 2
六月青 5种化学成分的体外抗氧化作用
周先丽 1，2，李映新 1，林 兴 1，黄仁彬 1（1. 广西医科大学药学院，广西 南宁 530021；2. 桂林医学院生物技
术学院，广西 桂林 541004）
摘要：目的 研究六月青 5种化学成分的体外抗氧化活性。方法 采用 DPPH法、邻二氮菲法和邻苯三酚自氧
化法，以维生素 C（Vc）为阳性对照，分别测定六月青 5种化学成分的抗氧化活性。结果 化合物 1，2，3，5
对二苯代苦味酰基自由基（DPPH·）的半数抑制浓度（IC50）分别为 10.36，43.95，15.30，35.59 μ mol·L-1，OH自
由基（·OH）的 IC50分别为 17.61，36.16，29.38，31.23 μ mol·L-1，超氧阴离子自由基（O2-）的 IC50分别为 19.68，
24.39， 19.71，31.20 μ mol·L-1，均表现出明显的清除作用，且呈明显的量效关系。化合物 4对 3种自由基均未
表现出清除作用。结论 六月青化合物 1，2，3，5具有明显的体外抗氧化活性。
关键词：六月青；抗氧化；自由基
中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1003-9783（2015）02-0180-03
d o i：10.3969/j.issn.1003-9783.2015.02.010
Antioxidant Effect of Five Chemical Constituents from Goldfussia psilostachys
ZHOU Xianli1，2， LI Yingxin1， LIN Xing1， HUANG Renbin1 （1. Pharmaceutical College， Guangxi Medical
University，Nanning 530021 Guangxi，China；2. College of Biotechnology，Guilin Medical University，Guilin
541004 Guangxi，China）
Abstract：Objective To study the antioxidant activities of five chemical constituents from Goldfussia psilostachys
Liuyeqing in vitro. Methods By using DPPH method，phenanthroline method and pyrogallol autoxidation method，
and with vitamin C as positive control， antioxidant activities of five chemical constituents from Goldfussia
psilostachys were determined. Results Components 1， 2， 3， 5 had scavenging capability against DPPH free
radical（IC50 being 10.36， 43.95， 15.30， 35.59 μ mol·L-1 respectively）， OH free radical （IC50 being
17.61， 36.16， 29.38， 31.23 μ mol·L-1 respectively） ， and superoxide anion free radical （IC50 being
19.68，24.39，19.71，31.20 μ mol·L-1 respectively），and had good dose-response effect Component 4 had no
scavenging capability against the above free radicals. Conclusion Components 1， 2， 3， 5 from Goldfussia
psilostachy shave obvious antioxidant activities in vitro.
K e y w o r d s：G o l d f u s s i a p s i l o s t a c h y s；Antioxidant；Free radicals
六月青是爵床科植物顶头马兰 T a r a p h o c h l a m y s
a f f i n i s（Griff）Bremekhu [Strobilanthes affinis（griff）Y. C.
Tang]的干燥地上部分，具有疏肝利湿、消肿镇痛的
功效，用于治疗急慢性肝炎、流行性腮腺炎、肾性水
肿及高血压等疾病[1]。现代医学研究[2- 3]表明，自由基
可诱发机体多种疾病，如糖尿病、关节炎、动脉硬
化、癌症等。本课题组前期研究[4]发现，六月青粗提
物具有体外抗氧化的活性。为了进一步对其具体化学
成分的抗氧化活性进行深入和系统研究，本实验采用
DPPH法、邻二氮菲法、邻苯三酚法 3种方法研究从
六月青中提取出的 5种化学成分（表 1）对自由基的清
除作用，并评价其抗氧化活性。
1 材料与方法
1 . 1 仪器 Multiskan Spectrum全波长酶标仪，美国
Thermo公司；752N紫外可见分光光度计和 PHS- 3C
pH计，上海精密科学仪器有限公司；BS224S电子天
平，北京 Sartorius仪器系统有限公司。
收稿日期：2014- 11- 14
作者简介：周先丽，女，博士研究生，研究方向：药理学及天然产物活性物质研究。Email：xlzhou2009@163. com。通讯作者：黄仁彬，教授，博
士生导师，研究方向：药理学及天然产物活性物质研究。Email：huangrenbin518@163. com。
基金项目：广西科学研究与技术开发计划项目（桂科攻10124008-6）。
180· ·
中药新药与临床药理 2015年 3月第 26卷第 2期
1 . 2 药物及试剂 维生素 C，上海沃凯生物技术有限
公司，批号：XW00508171。1，1- 二苯 - 2- 苦基肼
（DPPH）， 上 海 晶 纯 实 业 有 限 公 司 ， 批 号 ：
D1227007；邻二氮菲、邻苯三酚，上海国药集团化
学试剂有限公司，批号分别为 20111114，20120731；
Tris–HCI，上海生工生物工程有限公司，批号 ：
1106376Z；其余化合物均为本实验室自制，纯度均
大于 95.0 %。
1 . 3 实验方法
1 . 3 . 1 样品提取与分离 将六月青粉碎，以 60 %乙醇
加热回流提取 3次，每次 2 h，合并提取液，减压浓
缩，然后，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，
再分别减压回收得到 3个部分。乙酸乙酯部分，用硅
胶柱层析以不同比例氯仿 - 甲醇进行洗脱，得 7个
组分。再用 MCI gel脱色后，第 IV部分经过 RP- 18
柱层析，以 10 %~100 %甲醇–水梯度洗脱得到 5个
组分（IV- a~IV- e）。第 IV- d 组分经过半制备 HPLC，
以 10 %~30 %甲醇–水梯度洗脱，得到化合物
1，2，3和 4。第 IV- b组分用 RP- 18以 30 %~100 %
甲醇–水进行反相柱层析后，再以半制备 HPLC
（10 %乙腈–水）进行分离纯化，得化合物 5。见表 1。
1 . 3 . 2 清除二苯代苦味酰基自由基（DPPH·）实验 参
考文献[5]方法，将 DPPH溶解于无水乙醇，配成浓度
为 2× 10-4 mol·L-1 的溶液。分别取 100 μ L的样品溶
液和 100 μ L的 DPPH溶液加入 96 孔板中混匀。室
温 20 min后，517 nm波长处测定其吸光度。每份样
品设 3个复孔，以 Vc为阳性对照，计算清除率：
清除率（%）=[1-（A1- A2）/A0]× 100 %
式中，A0为无水乙醇加 DPPH 溶液的吸光度；
A1为样品溶液加 DPPH溶液的吸光度；A2为样品溶
液加无水乙醇的吸光度。
1 . 3 . 3 清除羟自由基（·OH）实验 参照文献[6]并稍加改
进，取 0.2 mmol·L-1磷酸盐缓冲液（pH7.34）20 mL，
依次加 7.5 mmol·L-1邻二氮菲，7.5 mmol·L-1 硫酸亚
铁 1.0，不同浓度的样品溶液以及 0.1 % H2O2各 1.0
mL。37 ℃ 水浴 60 min 后，536 nm处测定吸光度。
每份样品测定 3次，计算清除率：
清除率（%）=（A0- A1）/（A2- A1）× 100 %
式中，A0为无水乙醇代替邻二氮菲的吸光度；
A1为无水乙醇代替样品溶液的吸光度；A2为无水乙
醇代替 H2O2的吸光度。
1 . 3 . 4 清除超氧阴离子自由基（O2-）实验 参考文献[7]
并加以改进，取 0.1 mol·L-1的 Tris- HCl缓冲液（pH8.
2）2.45 mL，分别加入不同浓度的样品 0.1 mL，于 25
℃ 水浴 20 min，再加入 25 ℃ 预热的 25 mmol·L-1邻
苯三酚 0.05 mL，迅速摇匀后，每隔 30 s于波长 420
nm处测定吸光度，共测 3 min。每份样品平行操作 3
次，计算清除率：
清除率（%）=（V0- V）/V0× 100 %
式中，V0为邻苯三酚自氧化速率；V为样品管
的氧化速率。
1 . 3 . 5 统计学处理方法 采用 GraphPad Prism 5进行
数据分析，绘图并计算出半数抑制浓度（IC50）。
2 结果
2 . 1 对 D P P H·的清除作用 化合物 1，2，3，5 对
DPPH·表现出明显的清除作用，IC50 分别为 10.36，
43.95，15.30 和 35.59 μ mol·L-1，具有明显的量效关
系。其中，化合物 1和 3对 DPPH·的清除作用比 Vc
（IC50=21.85 μ mol·L-1）强，化合物 2和 5对 DPPH·的
清除作用比 Vc稍弱，化合物 4未表现出明显的清除
DPPH·的作用。见图 1。
2 . 2 对·O H 的清除作用 化合物 1，2，3，5对·OH
1
taraffinisoside A
2
deacyl martynoslde
3
3， 4 -dihydroxyphenylethanol -8 -
O-[β-D-apiofuranosyl（1→3）]-β-
D- glucopyranoside
4
hydrangeifolin I
5
（6R，7S，8S）-7α-[（β-
glucopyranosyl）oxy] lyoniresinol
化合物编号及名称 结构式
表 1 六月青 5 种化合物的结构及名称
Table 1 Chemical structures and names of five compounds from
L i u y u e q i n g
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Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology，2015 March，Vol． 26 No． 2
表现出明显的清除作用，且具有明显的剂量依赖性，
IC50 分别为 17.61，36.16，29.38 和 31.23 μ mol·L-1。
其中，化合物 1对·OH的清除作用比 Vc（IC50=19.51
μ mol·L-1）强，化合物 2，3，5对·OH的清除作用比
Vc稍弱。化合物 4未表现出明显的清除·OH的作用。
见图 2。
图 2 六月青 5 种化学成分对·O H 的清除作用
Figure 2 Scavenging effect of 5 compounds from L i u y u e q i n g on
OH free radical
2 . 3 对 O 2 -的清除作用 化合物 1，2，3，5对 O2- 表
现出明显的清除作用， IC50 分别为 19.68，24.39，
19.71，31.20 μ mol·L-1，并且具有明显的量效关系。
其中，化合物 1，2，3，5 对 O2- 的清除作用比 Vc
（IC50=37.10 μ mol·L-1）强。化合物 4 未表现出明显的
清除 O2- 的作用。见图 3。
3 讨论
六月青作为广西特色中草药，本课题组在前期研
究[1，4]的基础上，进一步对其具体化学成分的抗氧化活
性进行了研究。由于体外抗氧化评价方法快速、高
效，本实验分别采用 DPPH法、邻二氮菲法以及邻苯
三酚自氧化法对六月青 5种化合物的体外抗氧化活性
进行研究。结果证明，化合物 1， 2， 3， 5 对
DPPH·、·OH以及 O2- 均具有较强的清除能力，化合
物 4对 3种自由基均无清除作用。其中，化合物 1和
3抗氧化活性作用尤为突出。根据初步的构效关系分
析发现，这 4个化合物均具有酚羟基结构，而酚羟基
是清除自由基和活性氧的重要基团[8]。其中，化合物
1和 3的分子中同时存在两个邻位酚羟基，邻位酚羟基
可形成分子内氢键，使得酚羟基上氢原子易于与氧原
子脱离，形成氢离子，发挥还原效应，从而形成较稳
定的中间产物。有关文献[9- 10]对于酚酸抗氧化活性研
究也表明，邻位酚羟基具有较强的清除自由基活性。
本研究发现了六月青含有一系列体外抗氧化活性
成分。因此，作为有效的自由基清除剂，六月青抗氧
化单体成分具有潜在的药用价值。
参考文献：
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（编辑：宋威）
Sc
av
en
gin
g
ra
te/
%
Concentration/μ mol·L-1
100
80
60
40
20
0
- 20
20 40 60
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- 20
20 40 60
图 3 六月青 5 种化学成分对 O 2 -的清除作用
Figure 3 Scavenging effect of 5 compounds from L i u y u e q i n g on
superoxide anion free radical
Sc
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en
gin
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Concentration/μ mol·L-1
100
80
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20
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- 20
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图 1 六月青 5 种化学成分对 DPPH·的清除作用
Figure 1 Scavenging effect of 5 compounds from L i u y u e q i n g on
DPPH free radical
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