全 文 ：含量分别为 14.89%、0.42%和 8.7%、 0.21%, 而
这两种成分在毛细辛的根中没有检测到;现代中药
活性成分的药理学研究结果表明:丁香酚甲醚具有
麻醉和镇痛作用 〔5〕、黄樟醚为广谱抗霉菌成分 〔6〕。
由于这些共有成分在三种细辛中的含量不同 , 则挥
发油中这些具有显著药理活性的成分可作为衡量毛
细辛和铜钱细辛能否取代华细辛的标准。
4.3　三种细辛含有一些不同的组分。华细辛 、毛
细辛和铜钱细辛中分别检测出 15、41和 30种特有
成分 , 其中 1-(1, 4-二甲基 -3-环己烯-1-基)乙酮和
松油醇分别在毛细辛和铜钱细辛挥发油中含量最
高 , 且在根茎叶中都存在。此外 ,这三种细辛中分
别有两种细辛检测出一些相同成分。如毛细辛和铜
钱细辛中均检测出 T-杜松醇 , 而在华细辛中没有检
测到;华细辛和铜钱细辛中均检测到罗柏汉烯 、环
十五烷等 , 而在毛细辛中没有检测到;橙花叔醇 、
马兜铃烯等在华细辛和毛细辛中均检测到 , 而在铜
钱细辛中没有检测到 。说明三种细辛独特性的挥发
性成分存在着一定的差异 。
参 考 文 献
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HPLC-ELSD法测定急性子中 4种凤仙萜
四醇苷类成分的含量
裴　慧 1, 2 ,朱玲英2 ,钱士辉 1, 2＊
(1.南京中医药大学 ,江苏 南京 210046;2.江苏省中医药研究院 ,江苏 南京 210028)
　　摘要　目的:建立 HPLC-ELSD法同时测定急性子中凤仙萜四醇苷 A、B、C、D含量的方法。方法:采用反相高
效液相色谱-蒸发光散射检测法 ,使用 AlltimaTM-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm),流动相为甲醇-水 , 梯度洗
脱 , 流速 0.8 mL/min,柱温 35 ℃。 ELSD检测器条件:载气(空气)流速 2.6L/min, 漂移管温度 95℃。结果:凤仙萜
四醇苷 A、B、C、D进样量分别在 1.250 ～ 12.500 μg、9.100 ～ 91.000 μg、10.125 ～ 101.250 μg、1.625 ～ 16.250 μg范
围内线性关系良好 , 相关系数(n=6)分别为 0.9998、0.9992、0.9993、 0.9998;平均回收率(n=6)分别为 98.98%、
102.50%、 98.31%和 97.69%, RSD分别为 2.79%、 1.37%、2.58%和 2.45%。结论:本方法简便 、灵敏 、准确 , 可用
于急性子药材中凤仙萜四醇苷 A、B、C、D4种成分的含量测定。
关键词　急性子;凤仙萜四醇苷;HPLC-ELSD;含量测定
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2010)12-1893-03
收稿日期:2010-08-12基金项目:江苏省公益研究项目(BM2006104)作者简介:裴慧(1987-),女 ,在读硕士研究生 ,主要从事中药品质评价研究;E-mail:njph1987@126.com。＊通讯作者:钱士辉 , Tel:025-85639644, E-mail:njqsh2005@126.com。
　　急性子为凤仙花科凤仙花属植物凤仙花 Impa-
tiensbalsaminaL.的干燥成熟种子 ,为一常用传统
中药。始载于《救荒本草》:“人家园圃多种 ,今处处
有之。苗高尺许 ,叶似桃叶而旁边有细锯齿 。开红
花 ,结实形类桃样 ,极小 ,有子似萝卜子 ,取之易迸散
俗称急性子”。夏 、秋季果实成熟而未开裂时采收 ,
晒干 ,搓出种子 ,除去果皮及杂质而得 。味微苦 ,性
辛 、温;有小毒 。归肺 、肝经 。具有破血 、软坚 、消积
的功效 〔1〕 ,在临床上可用于避孕 〔2〕、终止早孕〔3〕、癌
症 、肿瘤 〔4〕 、闭经 、骨质增生 〔5〕等的治疗 。现代药理
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DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2010.12.025
学研究表明 , 急性子具有促透皮 〔6〕 、抗生育 、抗肿
瘤 、抗癌 、抗菌〔7〕等作用 。本文采用 HPLC-ELSD法
测定了急性子中这凤仙萜四醇苷 A、B、C、D苷类成
分的含量 ,以期为急性子质量标准的建立提供参考 。
1　仪器与材料
Waters2695高效液相色谱仪;AltechELSD
2000蒸发光散射检测器;Empower化学工作站 (美
国沃特世公司);AltimaTM-C18色谱柱 (250 mm×
4.6mm, 5μm);METTLERTOLEDOAT-201十万分
之一电子天平(梅特勒 -托利多仪器上海有限公司);
B CHIR-200旋转蒸发仪(瑞士步琪公司);甲醇为
色谱纯 (江苏汉邦科技有限公司);水为重蒸馏水
(Mili-Q纯水器)。
急性子药材购于南京市各大药房 ,来源见表 2,
经江苏省中医药研究院钱士辉研究员鉴定为凤仙花
科凤仙花属植物凤仙花 ImpatiensbalsaminaL.的种
子 。
凤仙萜四醇苷 A、B、C、D的对照品均为从急性
子的提取物中分离得到 , 并经1H-NMR、13C-NMR、
MS、IR和 UV等光谱鉴定其结构 ,归一化法测得它
们的纯度均大于 98%。
2　方法与结果
2.1　色谱条件　色谱柱:AltimaTM-C18色谱柱(250
mm×4.6 mm, 5 μm);流动相:A为甲醇 , B为水 ,梯
度洗脱 ,洗脱顺序为:0 ～ 15 min, 51% ～ 55%A;16
～ 25 min, 55% ～ 65%A;26 ～ 40min, 65% ～ 63%A;
41 ～ 43 min, 63% ～ 51%A;44 ～ 60 min, 51%A;流
速:0.8 mL/min;柱温:35 ℃;ELSD漂移管温度:95
℃;载气(空气)流速:2.6 L/min;放大系数:1;撞击
器:关闭。色谱图见图 1。
图 1　对照品(A)及急性子样品(B)色谱图
1.凤仙萜四醇苷 B　2.凤仙萜四醇苷 C
3.凤仙萜四醇苷 A　4.凤仙萜四醇苷 D
2.2　对照品溶液的制备　分别精密称取对照品凤
仙萜四醇苷 A、B、C、D适量 , 置同一 5 mL容量瓶
中 ,以甲醇溶解稀释并定容至刻度 ,制成浓度分别为
0.250 mg/mL、 1.820 mg/mL、 2.025 mg/mL、 0.325
mg/mL的混合对照品溶液。
2.3　供试品溶液的制备　称取干燥急性子粉末
(过 40目筛)5.0 g于滤纸筒内 , 置于索氏提取器
中 ,加 60 ～ 90℃石油醚 100 mL,加热回流提取至无
色 ,弃去石油醚液 。药渣挥干溶剂 ,再加甲醇 120
mL,加热回流提取至无色 ,回收甲醇 ,浓缩提取液 ,
残渣用甲醇转移溶解并定容至 10mL,摇匀 ,过 0.45
μm微孔滤膜 ,即得。
2.4　线性关系的考察　依次精密吸取混合对照品
溶液 5、10、20、30、40、50μL,注入高效液相色谱仪 ,测
定峰面积 ,以峰面积的常用对数(Y)对进样量(μg)的
常用对数(X)进行线性回归 ,线性关系见表 1。
　表 1 　4种对照品的线性关系(n=6)
成分 回归方程 r 线性范围 /μg
凤仙萜四醇苷A Y1 =1.87X1 +4.46 0.9998 1.250 ～ 12.500
凤仙萜四醇苷B Y2 =1.38X2 +4.99 0.9992 9.100 ～ 91.000
凤仙萜四醇苷C Y3 =1.40X3 +4.95 0.9993 10.125 ～ 101.250
凤仙萜四醇苷D Y4 =2.05X4 +4.12 0.9998 1.625 ～ 16.250
2.5　精密度试验　精密吸取混合对照品溶液 20
μL,连续进样 6次 ,测定峰面积 ,以峰面积计算凤仙
萜四醇苷 A、B、C、D峰面积的 RSD(n=6)分别为
1.384%、1.013%、 1.530%和 1.395%。表明仪器
精密度良好。
2.6　稳定性试验 　取供试品溶液 (江苏盱眙
070301)分别于 0、2、4、8、12 h进样 20 μL,测定峰面
积 ,凤仙萜四醇苷 A、B、C、D峰面积的 RSD(n=5)
分别为 0.8%、1.6%、2.1%和 1.4%。结果表明供
试品溶液在 12 h内稳定性良好 。
2.7　重复性试验　精密称取同一批号(江苏盱眙
070301)急性子药材 6份 ,每份 5.0 g,按 “ 2.3”项下
制得供试品溶液 , 分别取 20 μL注入色谱仪测定。
凤仙萜四醇苷 A、B、C、D含量的平均值(n=6)分别
为 0.087%、0.089%、0.178%和 0.037%, RSD分别
为 1.987%、1.785%、2.278%和 2.534%。表明本
方法重复性良好。
2.8　加样回收率试验　取已知含量(凤仙萜四醇
苷 A、 B、 C、 D含量分别为 0.087%、 0.089%、
0.178%和 0.037%)的急性子药材 (江苏盱眙
070301)6份 ,每份 2.5 g,分别向其中加入凤仙萜四
醇苷 A、B、C、D对照品 2.32、2.34、 4.62、1.06 mg,
按 “ 2.3”项下方法操作 ,得 6份加标溶液 。进样 20
μL,计算回收率 。结果凤仙萜四醇苷 A、B、C、D平
均回收率分别为 98.98%、 102.50%、 98.31%和
97.69%, RSD分别为 2.79%、 1.37%、 2.58%和
·1894· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 33卷第 12期 2010年 12月
2.45%(n=6)。
2.9　样品含量测定　取不同产地不同批号的急性
子药材按 “2.3”项下方法操作 ,平行 2份 ,在上述色
谱条件下进样 ,测定急性子中凤仙萜四醇苷 A、B、
C、D的平均含量 ,结果见表 2。
　表 2　　　　11批急性子药材中凤仙萜四醇苷
A、B、C、D的含量测定(%)
样品来源 批号 凤仙萜四醇苷 A 凤仙萜四醇苷 B 凤仙萜四醇苷 C 凤仙萜四醇苷 D
安徽 011020 0.087 0.091 0.213 0.026
安徽 071201 0.107 0.093 0.171 0.023
安徽 081127 0.105 0.093 0.232 0.043
安徽 090315 0.110 0.104 0.258 0.052
安徽 100115 0.094 0.094 0.222 0.023
安徽 100129 0.075 0.093 0.161 0.036
安徽 100401 0.097 0.091 0.234 0.019
安徽 100410 0.109 0.100 0.224 0.018
河北 060310 0.087 0.095 0.245 0.027
江苏 060410 0.059 0.093 0.102 0.055
盱眙 070301 0.086 0.091 0.178 0.040
3　讨论
3.1　溶剂与提取方法的选择　本实验分别比较了
索氏提取 、水浴加热回流提取 、超声提取三种不同提
取方法 ,结果发现索氏提取效果较好;考察了甲醇 、
乙醇 、70%甲醇 、50%甲醇 、70%乙醇和 50%乙醇对
样品的提取效果 ,结果表明以甲醇提取效果较好;选
择甲醇作为提取溶剂 ,进一步对不同提取时间进行
了考察 ,结果发现甲醇提取 4 h效果较好。
3.2　流动相的选择　分别考察了甲醇-水 、乙腈-水
2个溶剂系统 ,结果发现甲醇 -水作为流动相分离效
果很好 ,梯度洗脱比等度洗脱分离效果好 ,能使样品
中的所有组分在 60 min内实现最佳分离 。
3.3　色谱柱的选择　实验中比较了不同的色谱
柱 ,分别为 SYMMETRYTM-C8(150 mm×3.9 mm, 5
μm)和 AltimaTM-C18(250 mm×4.6mm, 5 μm)。
结果表明 ,前者不能使凤仙萜四醇苷 A、B、C、D与
样品中其他成分达到理想分离 ,后者分离效果较好 。
3.4　ELSD条件的选择　皂苷类成分的液相色谱
分析中存在的最大问题就是检测 ,除了少数几种皂
苷外 ,多数皂苷由于分子内无发色团 ,因而无紫外吸
收或仅在近紫外区有末端吸收 ,紫外检测器检测往
往灵敏度偏低〔8〕。 ELSD检测的漂移管温度与载气
流速是影响实验的两个关键性参数。在 ELSD的气
化室中 ,载气流速对信号影响很大 ,太低或太高均导
致信号不够准确。而漂移管温度降低时 ,溶剂挥发
不够完全;温度高时则样品颗粒挥发导致检测仪响
应下降〔9〕。在本文色谱条件下 ,通过反复试验和综
合评价后 ,使用漂移管温度为 95 ℃、载气流速为
2.6 L/min作为检测条件 ,凤仙萜四醇苷 A、B、C、D
与样品中其他成分的分离效果较好。
3.5　药材含量分析　本实验对 11批药材进行含
量测定 ,发现药材中均含有凤仙萜四醇苷 A、B、C、D
4种成分 ,不同产地不同批号的急性子药材中凤仙
萜四醇苷 A、B、C、D的含量略有差异 ,河北和安徽
产地的凤仙萜四醇苷 A的含量与文献记载 〔10〕的相
近 ,这可能因产地生态环境和种植条件的不同所致 ,
同时干燥方法 、贮存条件 、贮存时间也可能对此有影
响 ,有待进一步研究 。
3.6　小结　本研究首次建立了 HPLC-ELSD法同
时测定急性子药材中 4种凤仙萜四醇苷类成分含量
的方法 ,该方法简便 、准确 ,重复性好 ,为急性子药材
质量标准的研究提供了参考 。
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