全 文 ：　[收稿日期] 　2005-04-18
　[基金项目] 　贵州省中药现代化科技产业研究开发专项项目[ 黔科合中药专字(2003)45号]
　[作者简介] 　毛堂芬(1970 - ),女 ,助理研究员 ,从事生物技术研究工作。
研究简报 [ 文章编号] 1001-3601(2005)04-0169-0074-01
环草石斛组培苗的移栽试验
毛堂芬1 , 刘作易2 ,3 , 金家兴4 , 朱国胜1 , 2 , 吴明开1 ,2 , 李 飞1
(1.贵州省农业科学院 生物技术研究所 , 贵阳 550006;2. 贵州省农业生物技术重点实验室 , 贵阳 550006;3. 贵州省农
业科学院 , 贵阳 550006;4. 兴义市吉仁堂药业公司 , 贵州 兴义 562400)
Primary Report on Transplanting Plantlets of Dendrobium loddigesii
Rolfe Seedling in Vitro
MAO Tang-fen1 , LIU Zuo-yi2 , 3 , JIN Jia-x ing 4 , ZHU Guo-sheng1 , 2 , WU M ing-kai1 , 2 , LI Fei1
(1. Biotechnology Institute , Guizhou Academy of Agricultural Sciences , Guiyang 550006;2. The Key Laboratory for Agri .
Biotechnology of Guizhou , Guiyang 550006;3. GuizhouAcademy o f Agricultural Sciences , Guiyang 550006;4. Jierentang
Pharmaceutical Co. Xingyi , Guizhou 562400 , China)
[ 关键词] 环草石斛;组培苗;移栽基质;成活率;栽种方式[ 中图分类号] S567. 035. 3 [ 文献标识码] A
　　环草石斛(Dend robium lodd igesii Ro lfe )为兰科石斛属多
年附生草本植物 ,又名粉花石斛 、美花石斛 , 是我国常用名贵中
药材 ,也是我国三级濒危保护植物。在自然条件下难以大量繁
殖。自 2003 年以来 , 我们采用了组织培养技术进行种苗的快
速繁殖 ,获得了成功[ 1～ 2] 。但组培苗的出瓶炼苗移栽成活率问
题是影响产业化生产种苗的关键环节。为此 ,我们对试管苗的
移栽基质和移栽方式进行了试验 ,以确定较佳的移栽基质和移
栽方式 ,为组培苗的商业化生产应用提供依据 。
1 材料与方法
1. 1 供试材料
利用环草石斛成熟种子进行无菌播种 , 待种子萌发生长的
试管苗达到 4 个月时 ,选用苗高约 1. 5 cm 左右 、1 ～ 3 条根 、2 ～
3 片叶的组培苗作为试验材料。
1. 2 选用基质及配制
本试验采用碎瓦 、锯木屑 、苔藓 、蛭石 、珍珠岩 、木炭和腐质
土为移栽基质 ,按照不同的比例(体积比)混合配制成 5 种移栽
基质(表 1)。
表 1 不同混合基质组成
试验名称 基质编号 基质组成
移栽基质试验 Ⅰ 碎瓦+锯木屑+苔藓(1∶1∶1)
Ⅱ 锯木屑+蛭石(1∶1)
Ⅲ 腐质土+锯木屑+珍珠岩(1∶1∶1)
Ⅳ 木炭+蛭石+苔藓(1∶1∶1)
移栽方式试验 Ⅴ 蛭石+珍珠岩+锯木屑(1∶1∶1)
1. 3 基质的消毒处理
将选用的基质在太阳光下晒 2d , 然后按不同比例混合分
装于塑料盆(46cm ×35cm ×15cm)内 , 基质厚度为 11 cm。 用
500∶1 的甲醛溶液喷洒淋透 ,再用塑料膜密封处理 1个月。 使
用前揭开塑料膜透气 2 d。
1. 4 组培苗的移栽管理
移栽前将培养有组培苗的培养瓶置于室温条件下炼苗 4 ～
5 d ,以提高小苗的适应性。炼苗后揭开封口膜 , 用镊子小心夹
出组培苗(注意不要损伤根部),在自来水下冲洗掉附着在根部
的培养基 ,再用 0. 2%多菌灵液浸泡 5 ～ 10 s 消毒除菌 , 然后用
清水洗净 ,晾干水分后栽种在准备好的基质中。 不同移栽基质
试验采用丛栽方式 ,每丛 3 株 , 1窝 1 丛;同时 ,还进行了单株移
栽与丛栽效果对比试验。 每个处理栽种 60 株。 栽好后淋透
水 ,置于有散射光的阴凉处 。 1 星期后开始结合浇水喷施营养
液 ,以后每 4 d 喷 1 次营养液。隆冬季节放入室内。 6 个月后
统计结果。
2 结果与分析
2. 1 不同移栽基质对环草石斛组培苗生长的影响
组培苗在不同混合基质中的生长情况见表 2。在Ⅰ 、Ⅱ 、Ⅲ
3 种基质中 , 苗高无明显差异 , 但在 Ⅱ 、Ⅲ基质中植株的茎生长
较粗。从小苗的叶色及生长势来看 , 在 Ⅱ基质中苗生长良好 ,
叶色浓绿 ,叶面积大;在 Ⅲ基质中苗生长也较好 , 叶色绿 , 但有
部分小苗叶呈现黄绿色;在 Ⅰ基质中 , 试管苗的叶基本全部落
掉 ,在生长过程中发生虫害。从根的生长情况来看 , 各处理基
质中的小苗发根数及根长差异较大。 在Ⅱ基质中试管苗新根
发生多 、粗壮发达且整齐 , 并产生分叉;在 Ⅲ基质上的植株新根
发生较多 、整齐 , 但较在Ⅱ基质上的差;在Ⅳ基质中的苗新根发
生少 、短 ,生长势较Ⅲ基质上的差;在Ⅰ 基质中的苗发根少 、细
弱且产生死亡。 从成活率来看 , 在Ⅱ基质中苗的成活率高达
100%,而Ⅳ基质的成活率仅有 75%。
表 2 不同移栽基质对环草石斛组培苗生长的影响
基质编号
　
株高
(cm)
茎粗
(cm)
绿叶数
(片)
发根数
(条)
根长
(cm)
成活率
(%)
Ⅰ 3. 54 0. 34 0 3. 87 6. 17 80. 0
Ⅱ 3. 54 0. 41 5. 73 5. 80 7. 40 100. 0
Ⅲ 3. 48 0. 41 6. 06 4. 67 7. 25 83. 3
Ⅳ 2. 91 0. 35 4. 07 3. 33 4. 39 75. 0
2. 2 栽植方式对组培苗生长的影响
表 3 不同栽植方式对组培苗生长的影响
栽植方式
　
株高
(cm)
茎粗
(cm)
绿叶数
(片)
发根数
(条)
根长
(cm)
成活率
(%)
单　株 2. 27 0. 23 3. 07 1. 67 4. 19 68. 3
3 株 1 窝 3. 08 0. 35 5. 20 3. 07 6. 47 81. 0
　　从单株移栽和丛栽的对比试验结果(表 3)看出 , 丛栽的试
管苗成活率比单株栽种的增加12. 7个百分点 。丛栽的植株长
　贵州农业科学　2005 , 33(4):74　Guizhou Ag ricultural Science s
[ 文章编号] 1001-3601(2005)04-0170-0075-02
高效液相色谱同时测定蔬菜中多菌灵 、甲基托布津残留量
廖国会 , 段婷婷 , 秦立新 , 陈湘燕
(贵州省农业科学院 植物保护研究所 , 贵阳 550006)
Simultaneous Determination of Carbendazim and Thiophanate-methyl
in Vegetable by High Performance Liquid Chromatography
LIAO Guo-hui , DUAN Ting-ting , QING Li-xin , CHEN Xiang-yan
(Plant Protection Institute , Guizhou Academy of Agricultural Sciences , Guiyang 550006 , China)
[ 关键词] 高效液相色谱;甲基托布津;多菌灵;残留量
[ 中图分类号] O657. 72 [ 文献标识码] A
　　食品的安全检测不但要求方法准确 , 而且还需要检测周期
短。现有蔬菜中的多菌灵 、甲基托布津残留检测标准中采用紫
外分光光度计检测[ 1] ,该方法基体干扰严重 , 处理复杂 , 既费时
又耗试剂。为此 ,笔者通过反复实验 , 研究出用高效液相色谱
法同时测定蔬菜中的多菌灵 、甲基托布津残留量的方法。该方
法简便 、快速 、准确。
1 材料与方法
1. 1 主要仪器
高效液相色谱仪(美国 HP1100),附带紫外检测器 、Eclipse
XDB-C8 4. 6 mm×15cm 色谱柱;UV751GD 紫外 /可见分光光
度计;超声波震荡器;C18小柱;旋转蒸发仪。
1. 2 试剂
多菌灵标准品 99. 2%、甲基托布津标准品 99. 8%(购自国
家标准物质中心)、甲醇(色谱纯)、活性炭粉 、无水硫酸钠。
1. 3 色谱条件
流动相:甲醇+水=56+44(V+V), 检测波长:272 nm , 流
速:0. 8 mL /min ,进样量:20 mL 。
1. 4 样品处理
取捣碎后的蔬菜样品 10g 于 250 m L 的锥形瓶中 , 加
50 mL 甲醇 ,震摇 , 加入适量的活性炭和无水硫酸钠 , 超声波震
荡20 min ,抽滤 , 残渣加20 mL 甲醇超声波震荡10 min ,抽滤 , 合
并滤液 ,浓缩至 10 mL , 过 C18小柱后待测。
1. 5 检测波长选择试验
用 UV751GD 紫外 /可见分光光度计分别对多菌灵标准溶
液和甲基托布津标准溶液做 260 ～ 290 nm 的波长扫描。
1. 6 工作曲线
取不含多菌灵 、甲基托布津的蔬菜样品 10 g 分别加入不同
体积的标准溶液。按 1. 3 样品处理方法处理 ,根据上述色谱条
件进行检测。用多菌灵 、甲基托布津的含量与峰高分别作工作
曲线。
1. 7 添加回收试验
取同一个样品 5 份 ,分别加含多菌灵 0. 25μg 、甲基托布津
0. 25μg标准溶液 , 做回收率试验。
2 结果与分析
2. 1 波长扫描图
图 1　样品吸收波长
　[收稿日期] 　2005-04-27
　[作者简介] 　廖国会(1975 -),男 ,研究实习员 ,从事化学分析及农药研究工作。
势较强 , 苗较高 , 茎较粗 , 发生的新叶多 , 新根也较多 、较长;单
株栽种的小苗长势差 ,大多数苗与移栽时差别不大。上述结果
表明 ,环草石斛苗具有群体抗性作用 , 丛栽比单株栽培效果好。
这与屈济逸等的研究结果相似[3] 。
3 讨论
3. 1 本试验结果表明 , 环草石斛组培苗的较佳移栽基质以锯
木屑和蛭石(1∶1)混合使用 , 采用丛栽的效果为好 , 成活率可
达 100%左右 , 且长势良好。
3. 2 室温炼苗时 , 采用培养瓶不开封炼苗后立即移栽较好 , 以
避免炼苗时病菌的滋生 ,影响移栽成活率。
3. 3 移栽前基质的灭菌消毒是十分必要的 , 无菌的试管苗要
适应有菌的自然环境是不容易的。为保证移栽后成活 , 必须做
好基质的消毒处理。
3. 4 试管苗移栽时一定要将附在根部的培养基冲洗干净 , 并
用 0. 2%的多菌灵溶液浸泡 5 ～ 10 s , 否则容易滋生各种菌类 ,
影响植株成活生长。移栽后要勤洒水 , 保持植株和栽培基质湿
润 ,以利生长。
本试验仅报道了移栽基质和移栽方式对组培苗生长的影
响 ,其它因子对其影响的研究正在进行。
[ 参 考 文 献]
[ 1 ] 毛秀华 ,金家兴 ,刘作易 ,等.环草石斛种子萌发培养的研究[ J] .
贵州农业科学 , 2004 , 32(3):48-49.
[ 2 ] 毛堂芬 ,刘作易 , 金家兴 , 等. 环草石斛试管苗壮苗培养的研究
[ J] .种子 , 2005 , 24(6):21-22.
[ 3 ] 屈济逸.铁皮石斛试管苗移栽技术与栽培管理[ C] . 广西医论文
选编 , 1994(4):903-906.
(责任编辑:黄贵平)
　贵州农业科学　2005 , 33(4):75 ～ 76　Guizhou Ag ricultural Science s