全 文 ：声生衣活性组分提取和宁血糖亲质血独翻缺究
上海中医学院 戴荣兴 印 杰 .王 芳 .
提婆 :以药理方法筛选分离出花生衣中止血有效成分可能为配类化合物 , 通过分离出的活性组
分恨为相对标准晶对宁血糖浆谁行鉴别试验和含量测定 , 并初步制订该制剂质控标准应定在。 · 41 ~
。 · 51 哪 /江0 9范围内, 同时应控制花生衣原料含有效成分应在 “ · “ %左右 . 实验证明药厂生产宁血
糖浆的工 ~艺是合理的 。 . , . 、 一 一二 一
、 以花生衣为原料的中药制荆— 宁血糖桨收载子《上海市药品标准》 1 9 8。年版。 鉴子该制剂尚无定性鉴别岌含量控制标准 , 为此 ,
本文作者对花生衣进行较为索统 的 分 禽筛
迄 _毛寻瘫中搜如夯而性成分 , 并通过分离出的活性组夯作为相对标准品对宁血
糖浆进行鉴别试验和含量测定 。 初步制订该
鲡ha 控标腻一 ` 以供生产厂参每, 一, . 一 , 实 一脸 部 分
一 、 材料与仪器
试剂 : 均为 C . P . 或 A . R
、 一 原料: 一花生拓 一宁血萝浆 ’花生衣 )青浦县练塘中药广提供 ( rD n m l夺
5 0 -
「 匕
仪器 : 7 51 型分光光度仇 仁 S一翻比双波
长薄层色谱扫描仪 - · ’
二 、 花生衣活性组分竹提取和药理筛选
( 一 )初步筛选
1
. 提取分离
.2 药理筛选 花生衣为~ 止 血药 , 本卖验采用割小白鼠尾静脉法测是给药俞后凝
血时向改变来筛选其活性部位 。
( 1) 实验方态 将各提取物配成一定浓度水溶液 , 取 18一 2 2 9董雌雄兼有的小白鼠 ,
割断尾一侧静脉 , 每隔 3 0言用独纸接触伤口 ,
直至滤纸上不 ’占血痕止 , 即为止血时向 , 自身对照 。
(2 ) 给药剂量 : 起效时间的选择 , 通过
摸索 , 宁血糖浆以 o . 6m l / 10 9 (小鼠 )剂量灌
胃后 60 m in 时止血作用为最强 , 90 m in 后基
本恢复 。
(3 ) 供试液配制及初选结果扩上提取物
配成` 定浓度的水溶液 , 燕启行止血试验 ,
结果见表
裹 1
`
i
。 提取杨一 D为花生衣的止血部位
花生衣幸9 5务. 2 k g )一人 lc 热提 , 减压浓缩:铃藏 、 过滤
A 托
提取物人 石袖醚萃取 羚斋缎
收石醚
水液
! 乙醚幸萃取
液回油取*!萃
提取物 B
(表犷9 .9 `
中乙醚层
1去乙幸醚
森去乙醚、 乙酸乙醋萃取
捉取
( 二
物 C , 几十 一护 _ , , 十止介
·
g3 )
,乙酸乙醋液 ` ~水旅 _ -
l 回收伞溶剂提取物 D
2
,舫 g 一
(二 )提取物 D的分离和筛选
取提取物 D 5 9 , 干法装硅胶柱 , 以苯、
乙酸乙醋 、 甲醇 的不同比例棍合溶剂洗脱 合
并类似流分 , 得流分 r (黄色 》、 I (黄色 ) 、
宜(红色 ) 、 r亨(橙黄色 ) 、 v (黄芭)五组 , 回
收落剂得相应固体粉末亨配成一定浓度水溶
液 , 迸行止血嫩 , 结果见表 2 。 , -
. 本院中药系睑年级实习生 一
物翻 华绍刃扮 争
裹 2孵肇靡座_一 {翌二巴兰 }二二卜二一 {兵, } _ _ l _ } _ , _ _ . 1 _ . ` . 1 一 1, . 一 l亚 肴土t ` ” 1 ” {竺兰}二二闷}止二 }竺}塑荆 { {兰{丝!兰{一!二二二一一 {二一匕兰匕兰上士匕!二` 二二
再取流分 1 2 9 , 上硅胶柱 , 洗脱剂为不
同比例的乙酸乙角 , 甲醇 混分溶剂 , 收集红
色流分 , 回收溶剂得红色粉末 , 止血试验结 -
果 1 Om g /只剂量灌胃可缩短凝血时间 50 %以
上 , 其官饰分则不显著 ·
几流分 1 经薄层层析分离仍见三个色斑 , _
从主色斑 ( fR 值 .0 2 5 )的荤外 、 _红外吸收光谱
看 , 可能是醒式结构物质 , . 其浓硫酸反应和
醋酸镁反应均为阳性 。 据此对花生衣制剂进
行定性鉴别和含量测定 。
三 、 宁血糖装的质量控制
(一 )鉴别
1
. 浓硫酸反应 : 量取宁血糖浆 50 m l ,
用乙酸 乙醋萃取多次 , 至萃取液无色 , 蒸去
溶剂 , 以甲醇溶解 , 过滤 , 取滤液 1 滴滴于滤
纸上 , 挥干后淹加浓硫酸 1 滴 , 加热 , 即显
红棕色 。
2
. 醋酸镁反应 : 取上滤液 1滴滴 于 滤
纸上 , 挥干后喷 .0 5% 醋酸镁 乙醇液 , 90 ℃
加热 s m in , 即显橙黄色 。
3
. 薄层层析显色法 : 于硅胶薄层 板 上
分别滴上滤液和标准液 (流分 V 的 5% 甲醉
液 ) , 以甲苯 : 丙酮 , 甲酸 ( 5 , :4 1) 上行展开 ,
R f 0
.
25 处均有红色色斑 , 并都有上二种显
色反应 。
(二 )含量测定
1
. 薄层色谱扫描法 :
(1 ) 薄层板制 备 : 硅 酸 G 3 o g 加 1%
C M C一N a 水液 1 o Qm l , 铺成 2 0 0 x 2 0 0 x 0 . 5
( m m ) 的薄层板 , 使用前 DI 5℃ 30 尹活化 。
( 2) 标准液的配制 : 取流分 V粉末溶于
甲醇 , 使成浓度为 50 m以。 1溶液 。
.
(3 ) 供试液的配制 : 正确取 宁 血 糖 浆
支卿 边1犷 加万晒卜乙酸乙酸提联 分出乙酸
乙醋层 , 反复四次 (实验证明 : 四饮萃取已
完全提净 ) 合并 乙醋液 , 回收溶剂后用甲醉
溶解并稀释至 10 m l , 浓度为 5 9 ( 花生衣 、 / m l。
( 4 ) 测定 :
a
. 薄层层析 : 上样量 各 为 5川 , 展 开
剂 : 甲苯 : 丙酮 : 甲醇 ( 5 , :4 1) 上行展开 1 5
c m
, 取出后室温放置 12 h 进行测定 。
b
.
T C S条件 : 入。 2 8 0 n m 入: 4 0 0 n m , Z 形
扫描 , 狭缝 1 , 25 x l · 25 m。 , 扫描速度 = 纸
走速 二 20 m m / im n , 背景补偿 。 对 R f = 0 . 2 5
色斑扫描 , 结果见表 3 。
衰 3 不同批号宁典抽拜幸. `草次平均位 )
二豪哪馨 ) ,! ,产 卜 · 。 }一 。 , 。
( 5) 加样回收率试验 : 供试液加不同 一着
标准液混合上裕 一 峡探准液作对照 , 层析后
行薄层色谱扫描 , 结果见表 4 。
表 4
加 入 值
\ {一甲 , 尸尸一~ 二一 , 叫 l实测值 } 回收率多编号
\ }
标准叫供试浓 }总值 1 1
二石立` ` }泛乙色! -丝生 }些生生 !` 二全互一卜- 一』旦一— 互一一 !」生乙卜旦旦生 }望理 ~卜一丝匕 1` 一一王旦竺一`3 }1 6 7 . 5 ! 3 9 3 巨5了 U 6 1 5了 2 { I t ) Z
_二哮兜螃 J烈熟奋皿y一里鱼一二一 ~一一一
2
. 分光光度法 :
( 1) 标准曲线的绘制 : 于 2 0 x 20 0二二
硅胶薄层板分别点标准液 1、 2、 3、 4 、 5 、 6 、 7、
s
、
9拼 1, 展开同前 , ,室温放 置 12 h , 们取 R f
0
.
25 色斑处 I C m Z正方形硅胶块 , 甲醇洗脱过
滤置 2 . 5 m l容量瓶中 , 并用甲醇稀释至刻度 ,
用空白硅胶板作空白对照 。 在 2 8 On m 下测得
吸收度 , 作图 , 在 0 . 05 ~ 0 . 4 5拜g / nI l 浓度范
围内符合比尔定律 。 -
( 2) 供试液的测定 : 方法同上 , 结果见
表 5。
裹 5 不同批号宁血枯桨含 t (三次平均值 )
中 成 游 研 究
:声膊炭冲剂呷衡不艺及疗琳碑寒补二
河北医学院第三 医院 燕福民 周 沛
我院药剂科 、 骨科与河北省体委体育科学研究
所协作谕 自 9 19 7年至今应用中药 `滑膜炎冲剂 ’ , 怡
疗膝关节创伤性滑膜炎 , 取得了较满意的效果 。
一 、 药物组成 由夏枯草 、 女贞子 、 防己 、 功
劳叶 、 惹米仁 、 土获等 、 丝瓜络 、 稀签草 、 川牛膝 、
泽兰 、 丹参 、 当归 、 黄蔑等十三味中药组成 。
二 、 翻 . 工艺 取女贞子 、 防己、 惫米仁 、 土获
等、 川牛膝 、 当归 、 黄浅等六味药 , 混合粉碎 , 过
10 。~ 120 目筛。 另取夏枯草等六味药水煎二次 , 浓
缩成清膏 , 加入上述细粉及适盆糖粉 , 拌匀 , 制成
颗粒 , 千燥 , 分装 , 即得 。 每袋重30 克 , 约相当子
生药50 克 。
_ 主、 脸康愉况 共使用 12 0例 , 真中运动员 70
例 , 大多为青年人犷冰组病例均有外伤史 ,有关节肿
涨 , 疼痛及活动功能障碍 , 推滑及挤压试验和浮簇
实脸阳性 , 病程较长者有的伴有股四头肌萎缩无力 ,
X 光检查可排除膝关节内病损。 使用方法为 , 每日
服用二次 , 每次 15 克 , 连续 6 日为一疗程 。 休息 2
日启触第二个疗程 , 可连用 3一 5个疗程 。 临床结果
痊愈86 例 , 显效 1 9例 , 进步 12 例 , 无效 3例 , 总有
效率为 95 . 8% ,
牙。
孪 秋
治愈及显效率为 81
衰 1 退劝员泞效 衰 2
5%
。 见表 1 ,
厅更 甲
一般取业疗效
ha
痊 显 进 二 \ 疗效 痊 显 进 无愈 效 步 儿 \ 愈 效步 效效 例数 7 0 男 3咬 4 1 1 6 l 0 男 2 4} ` }tS 3 2 0
3 50 1— {女 3 6 女 2 6l 」
4
·
3 百分率` !百分率拓
5 8
.
6 22
.
9 1止 交 巨6 }生巨l ’ }
四 、 讨论 中医理论认为膝关节积液的病机为
水湿停播在关节 、 有热痹及虚损之分。 其共同点为
在营阴中有湿热 , 只有在慢性病例牙有虚福兼证的
发生。
“ 滑膜炎冲剂 ’ 就是针对水逸及热痹、 虚 损 而
组方 , 适用于急 、 慢性期的膝关节创伤性滑膜炎 ,
方中以清热利湿为主要治法 , 用夏枯草 、 女贞子 、
功劳叶清营阴中之跟热 , 用防己、 慧米 利 络 中之
湿 、 土获等丝瓜络利关节中之湿 ,佐以当归 、 丹参 、
稀签草 、 赤芍 、 泽兰以活血化瘾 , 加黄茂以补虚 ,
即 `攻补兼施 ,之谓二 ’
~ 一~ ~ 一~ ~ ~ ~ ~ ~ ` . ~ ~ ~ ~ ` 口~ ~ ~ ~ ~ 1 , ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ 一~ ~ ~ ~ ~ ~ 亨 . . ~ 一~ ~ ~ ~ ~ ~ . 奋一~ ~
( 3 )
见表 6 。
衰 6
、 吸收度
编号 、 加样回收率试验 : 方法同上 , :结果
加 人 值
标准叫供试叶总值
卖测· …回“ ·
.洲弃` 二 !里华 }毕兰 }生弓Z主!」」卫孔卜一之竺石`一一之— . }址悠 }生卫旦上!巴巡巴 }一生卫乙 }一一之乙一一3 一 lq . 1军必月 J . 及2在 10 . 2 6 8 1 Q . 2 6 0 1, 9 7一4 鞠卿鳃华华瑞漂边落一六坚一一
四 、 花生衣 中有活性组分的含量测 定
正确称取花生衣g5 , 飞共三份 , 分别正确
加 50 m l 甲醇 , 室温分别浸渍 2 4 , 48 , 72 场 过
滤 , 正确吸收续滤液 一 10 二1, 挥青溶剂 , 再加
甲醇使溶并定容至 1 m l, 同前法测定 , 结果
见表 7。
上徉量 (川 ) 一 布 4 选 4 4 4 」
侧定方法 分光扫描 分光 旗豁 扫描含最 m g八 。Ug( 花生衣 ) j . 2匕今: 2 4上右0 6 1 0 . 6 25
平 均 刃 .邪 ! 0 .眨 一 l ` 犷吞{劝
1分. 扒娜娜 , 娜
甲醇室温浸渍 4 8 h能完全浸出 , 花生衣
中含相对标准品为 .0 61 % ( m g八 0 0 9 )
结果与讨论
1
. 通过药理方法筛选分离出花生 衣 中
止血有效组分 , 从薄层层析看 , 该组分至少有
三个成分 , 其中一个成分在 2 80n m处有强吸
收 , 从红外吸收光谱看 , 估计为醒类化合物 ,
但是否是有效成分尚在进一步分离筛选中 。
2
. 以分离得到的有效组分作为相 对 标
准品对 目前生产的宁血糖浆进行 鉴 别 和 定
量 , 以控制产品质量是可行的 。
3
. 为更好控制成品质量 , · 对原料 花 生
衣也应控制 , 实脸结果表明如果花全衣含有
效组分为 母. 6% 左右 , 则按宁血糖浆生产方
法操作可得到含量为 0 . 45 %左右的成品 , 从
而说明药厂目前的生产工艺是合理的 。
.4 花生衣中有效成分单体的分离 和 结
构测定在进行中、
t